当前位置: 首页 > 期刊 > 《齐鲁医学杂志》 > 2007年第2期
编号:11417649
mRNA差异显示技术在胃肠肿瘤中的应用
http://www.100md.com 《齐鲁医学杂志》 2007年第2期
胃肠肿瘤,1mRNA差异显示技术,2DDRTPCR在胃肠肿瘤研究中的应用,3展望,[参考文献]
     胃肠肿瘤占我国恶性肿瘤半数以上,且容易复发和转移。许多研究表明,胃肠肿瘤的发生、转移涉及一系列基因(包括显性癌基因、错配修复基因及抑癌基因)的变化,其相互间存在复杂的转导、调控、抑制或激活的关系。mRNA差异显示技术是近年来检测基因表达的新方法,因其具有操作简单、适用范围广、敏感性高、原料要求少及可以同时比较多个样品等优点,目前在肿瘤研究领域已被广泛应用。通过分离并克隆胃肠肿瘤差异表达的基因,不仅有助于揭示胃肠肿瘤的发病机制,而且为临床诊断和治疗提供新的思路。该文就差异表达基因技术在胃肠肿瘤中的应用进展进行综述。

     1 mRNA差异显示技术

    mRNA差异显示法又称差异显示反转录PCR(DDRTPCR),是1992年由LIANG等[1]首先建立,其主要原理是:首先利用3′端锚定引物,将细胞中的RNA反转录成cDNA,然后用大量随机引物与锚定引物组合,对全部的cDNA进行PCR扩增,再通过高分辨率的凝胶电泳显示基因表达的不同。它可以鉴别不同病理状态下基因的表达,已被证实能有效地筛选肿瘤恶性转化、转移进程中差异表达的基因。DDRTPCR的优点在于:①仅需0.2 μg总RNA作为起始材料,即足以覆盖整个锚定的引物及与之组合的多个随机引物;②可同时分析比较两组或多组RNA样品;③可以同时检测到“上调”及“下调”的基因;④敏感性高,可检出低丰度mRNA;⑤重复性好,90%~95%的显示条带进行电泳时具有重复性;⑥实验过程中可步步验证比较,无需在整个过程结束时才证实试验是否顺利;⑦研究mRNA的差异较之研究DNA的差异排除了非编码区的影响,使研究范围缩小到表达基因上。随着人们对引物、PCR循环参数、显示标记方法、分子克隆测序及结果鉴定等进一步优化设计,差异显示技术已日趋成熟,而且得以与其他寻找差异表达基因方法联合应用,如代表性差异显示(RDA)、基因表达的系统分析法(Serial Analysis of Gene Expression,SAGE)、多色荧光差异显示技术等。因而DDRTPCR技术是目前进行差异表达基因分析的研究热点,同样在胃肠肿瘤基础和临床研究中有着推广的可能性。

     2 DDRTPCR在胃肠肿瘤研究中的应用

    2.1 在胃肠肿瘤发生机制研究中的应用胃肠肿瘤的发生是多步骤的过程,涉及到原癌基因的激活及抑癌基因的失活。以往在胃肠肿瘤中首先发现克隆的基因很少,多数研究是将在其他肿瘤中发现克隆的基因在胃肠肿瘤中验证检测 ......

您现在查看是摘要页,全文长 9545 字符