高效液相色谱质谱_荧光检测_柱前衍生_脂肪酸

高效液相色谱质谱分离鉴定荧光试剂标记的脂肪酸

http://www.100md.com 《分析化学》医学期刊 2007年第4期

高效液相色谱质谱,荧光检测,柱前衍生,脂肪酸,蜂花粉,,高效液相色谱质谱，荧光检测，柱前衍生，脂肪酸，蜂花粉,1引言,2实验部分,3结果与讨论,References

     摘要以2(2(10蒽基)萘[2,3d]咪唑)乙基对甲苯磺酸酯(ANITS)作为柱前衍生化试剂，在Eclipse XDBC8色谱柱上，梯度洗脱实现了20种游离脂肪酸(FFA)衍生物的完全基线分离。90℃下在DMF溶剂中以K2CO3作催化剂，选取衍生试剂摩尔数为脂肪酸的7倍，衍生反应40 min可获得稳定的荧光产物。激发和发射波长分别为250 nm和512 nm。采用大气压化学电离源(APCI)正离子模式，实现了油菜蜂花粉中游离脂肪酸的质谱鉴定。所有脂肪酸的线性相关系数均大于0.9999, 检出限为24.76～98.79 fmol。

    关键词高效液相色谱质谱，荧光检测，柱前衍生，脂肪酸，蜂花粉

     1 引言

    脂肪酸广泛分布于自然界中, 是生物体内重要的营养物质和代谢产物，对调节生物体内各项生理和生物功能起着重要作用。由于这类化合物在紫外可见光区吸收较弱,光度法难以准确测定[1]，HPLC荧光检测法具有较高的灵敏度。用于脂肪酸测定的荧光标记试剂主要有溴代香豆素类化合物[2]和重氮甲烷类[3]，通常情况下这些化合物对潮气及水不稳定。文献[4]采用NOEPES磺酸酯对脂肪酸类化合物进行了测定，但衍生过程需在KOH、冠醚及相转移催化剂的存在下于苯或甲苯溶剂中完成，分离前需预处理，费时费力。本实验采用新型荧光试剂2(2(10蒽基)萘[2,3d]咪唑)乙基对甲苯磺酸酯作为柱前衍生化试剂，以 N,N二甲基甲酰胺(DMF)作溶剂，在90℃下以K2CO3 作催化剂可获得稳定的荧光产物。衍生产率高，条件温和，操作简便，衍生液不必预处理可直接进样分析。在激发和发射波长分别为250 nm和512 nm荧光检测下，采用梯度洗脱对油菜蜂花粉中的游离脂肪酸实现了快速、灵敏的测定，并对实际样品中各衍生组分进行了在线的柱后质谱鉴定，结果满意。

     2 实验部分

    2.1 仪器与试剂1100型高效液相色谱质谱联用仪(美国Agilent公司)，配备四元梯度泵、在线真空脱气机、荧光检测器、100位自动进样器、大气压化学电离源(APCI)；Eclipse XDBC8色谱柱(4.6 nm×150 mm，5 μm，Agilent公司)。2(2(10蒽基)萘[2,3d]咪唑)乙基对甲苯磺酸酯(自制)；20种脂肪酸标准样品(上海试剂厂)；光谱纯乙腈(ACN,德国Merck公司)；油菜蜂花粉(青海、新疆)。其它试剂均为分析纯，水由MilliQ超纯水系统制备，DMF经减压蒸馏后使用 ......

百拇医药网 http://www.100md.com/html/DirDu/2007/04/28/43/00/65.htm

您现在查看是摘要页，全文长 10774 字符。