摘要: 目的 建立从Lewis大鼠骨髓中分离、培养间充质干细胞的方法，并对分离、培养的间充质干细胞进行鉴定。 方法 采用Percoll(1.073g/L)密度梯度分离和贴壁培养相结合的方法分离培养Lewis大鼠的骨髓间充质干细胞(MSC)。MSC细胞鉴定:采用相差显微镜观察MSC的形态学特征;流式细胞仪检测细胞表面标志抗原CD 29 ，CD 90 ，CD 34 和CD 45 的表达率;苏丹Ⅳ染色检测MSC成脂细胞分化;碱性磷酸酶染色和茜素红染色检测MSC成骨分化。 结果 原代培养的MSC于24h后贴壁，48～72h形成集落，12～15d可达到80%～90%融合。第1代细胞表面标记物CD 29 ，CD 90 ，CD 34 和CD 45 的阳性率分别为80.41%，66.27%，2.73%，0.74%。第3代细胞表面标记物CD 29 ，CD 90 ，CD 34 和CD 45 的阳性率分别为89.91%，88.17%，0.81%，0.17%。细胞周期分析显示，第5代细胞G 0 /G 1 期细胞占68.9%，S+G 2 +M期为31.1%。用α-MEM培养液培养的第6代细胞部分分化为成骨和成脂细胞。 结论 采用Percoll(1.073g/L)密度梯度分离和贴壁培养相结合的方法能够成功分离和培养大鼠的MSC。第5代MSC细胞保持分化潜能。

    关键词: 大鼠，近交Lew;细胞分离;细胞培养;干细胞;骨髓细胞;细胞周期;细胞分化

    骨髓间充质干细胞(MSC)移植治疗心肌梗死的研究常选用近交系Lewis大鼠为实验对象，以减少异体移植排斥反应和建立稳定的心肌梗死模型。笔者拟从近交系Lewis大鼠的骨髓分离、培养、扩增MSC，流式细胞仪检测表面标记物，并促进其向成骨及成脂细胞分化来获得进一步证实，了解MSC的增殖特性，为后续的MSC移植治疗心肌梗死的研究奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 动物 SPF级雄性Lewis大鼠(4周鼠龄，120g左右)。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供(北京市实验动物质量合格证:0031492)。

    1.2 主要试剂和药品 α-MEM培养基(Gibco公司)，DMEM-LG培养基(Gibco公司)，Percoll分离液(Pharmacia公司)，胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，青、链霉素(Serva公司)，胰酶(Amresco公司)，乙二胺四乙酸(EDTA，Gibco公司)，茜素红(Sigma公司)，苏丹Ⅳ醇(Sigma公司)，DNA分析试剂盒(Coulter公司) ......