摘要: 目的 探讨牙周膜成纤维细胞与引导组织再生胶原膜(BME-10X)复合物在大鼠颅骨皮质骨表面引导成骨的能力，为其应用于牙周组织工程研究提供实验依据。 方法 体外培养SD大鼠牙周膜成纤维细胞并以5×10 6 mL -1 的细胞浓度与BME-10X复合培养10d后，植入同种异体SD大鼠颅骨皮质骨表面(复合细胞组);以单纯BME-10X组及骨膜刮除组为对照，于植入后3，6周进行组织学观察。 结果 单纯BME-10X组及骨膜刮除组未见类骨质形成，复合细胞组在材料表面与颅骨交界处可见明显的骨样组织形成，随着植入时间的延长，成骨作用明显。 结论 牙周膜成纤维细胞与BME-10X复合物在大鼠颅骨皮质骨表面具有明显的引导成骨能力。

    关键词: 成纤维细胞;引导组织再生;胶原;骨再生;生物医学工程

    牙周结缔组织中I型胶原最多，因此商品化的引导组织再生胶原膜多以I型胶原作为其主要成分。该材料具有无抗原性、生物相容性好、能促进细胞增殖、加快伤口愈合、降解产物无毒副作用等优点，已广泛应用于临床 [1] 。随着组织工程学的兴起，它又作为牙周组织工程的支架材料而倍受关注。本实验在以往实验基础上 [2-4] ，采用商品化的引导组织再生胶原膜BME-10X为支架材料，以SD大鼠牙周膜成纤维细胞(PDLF)为种子细胞，初步探讨SD大鼠PDLF与BME-10X复合物同种异体颅骨皮质骨表面引导成骨作用，为其应用于牙周组织工程研究提供实验依据。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂和仪器 DMEM培养液、I型胶原酶、胰蛋白酶(Gibco，美国)，新生牛血清(杭州四季青生物制品有限公司)，国产胶原膜BME10-X(中国医学科学院生物医学工程研究所)，超净工作台(NUAIR，日本)，CO 2 孵箱(NUAIR，日本)，SD大鼠(第四军医大学实验动物中心)。

    1.2 SD大鼠PDLF的体外培养及扩增 参照文献[5]的方法，将12周健康雄性SD大鼠的下颌骨取下，体外将磨牙区的牙龈及其他软组织刮除干净后小心拔出第一磨牙，随即在无菌条件下用含抗生素的PBS液冲洗，以除去血液。1%I型胶原酶消化1h，将牙取出，离心，弃上清;加入DMEM培养液(内含10%小牛血清，青霉素100U/mL，链霉素100μg/mL)制成细胞悬液，在体积分数为0.05的CO 2 孵箱中培养，待细胞贴壁后隔日换液。取生长状态良好的第4代细胞用于实验 ......