脑星形细胞瘤的嗜银蛋白定量研究
作者：李青 丁华野 羊为民 李耀君
单位：李青 丁华野 羊为民(西安第四军医大学病理解剖学教研室 710033)；李耀君(西安热工程研究所 710033)
关键词：星形细胞瘤；蛋白
中华医学杂志900310
提要 28例不同类型的星形细胞瘤，用银染色技术显示核仁组成区相关的嗜银蛋白(Ag NOR)，并用图象分析仪进行定量分析。结果，每个星形细胞瘤细胞含有的Ag NOR颗粒分布为：Ⅰ级星型细胞瘤4.6个，Ⅱ级7.1个，Ⅲ、Ⅳ级11.71个，提示Ag NOR颗粒多寡与肿瘤恶性程度成正比。
嗜银蛋白(Ag NOR)与核仁组成相关。目前认为它对于肿瘤的鉴别诊断、区分良恶性病变及肿瘤的分型分级及检测癌前病变等有一定的价值。我们应用图象分析仪对28例不同级别的星形细胞瘤的Ag NOR进行定量分析，旨在探讨星形细胞瘤分级的客观标准，为临床治疗和判断预后作参考。
, 百拇医药
材料与方法
一、组织制备及Ag NOR染色
本组28例星形细胞瘤取自手术切除肿瘤标本，10%福马林液固定，石蜡包埋，连续切片，厚3～4μm，一张做HE染色，另一张做Ag NOR染色。Ag NOR染色方法：(1)切片经二甲苯脱蜡，逐级乙醇，进入去离子化水化；(2)银工作液配制：明胶溶于1%蚁酸液使成2%溶液，将此溶液按1：2容积与50%硝酸银溶液混合而成；(3)将此工作液滴加于组织切片上，室温下暗室作用1小时；(4)去离子水充分冲洗，经脱水和二甲苯透明后，用加拿大树胶封片。
二、Ag NOR含量测定
应用西德Leitz公司的TASplus型图象分析仪，测量每个细胞含Ag NOR颗粒的个数，每例切片观察20个细胞，最后取平均值。
28例星形细胞瘤HE染色后病理诊断Ⅰ级6例；Ⅱ级14例，其中包括肥胖细胞型6例；Ⅲ、Ⅳ级8例。Ag NOR颗粒在每个细胞中的计数见图1。
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星形细胞瘤类型和级别
图1 每组Ag NOR均数
Ⅰ级星形细胞瘤每个细胞含Ag NOR颗粒3.4～6.5个，平均4.6个，颗粒大小基本一致(图2)。Ⅱ级2.5～11.7个，平均7.1个。肥胖细胞型3.4～13.1个，平均7.3个，颗粒大小不规则，其中有3例在细胞核中可见1～2个较大Ag NOR颗粒，周围为小的卫星颗粒。这种类型Ag NOR计数在8.5～13.1之间(图3)。Ⅲ、Ⅳ7.7～13.3个，平均11.71个，颗粒大小不规则(图4)，但有1例也可见到同肥胖细胞型一样的大Ag NOR颗粒。另做了2例正常脑组织，1例4.25个，另1例2.8个。方差分析各组均数。Ⅲ、Ⅳ级星形细胞瘤组和Ⅰ组星形细胞瘤相比，P<0.01；和Ⅱ级以及胖细胞型星形细胞瘤相比，P<0.05。Ⅰ、Ⅱ级和肥胖细胞型组间相比，差异无统计学意义。
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图2 Ⅰ级星形细胞瘤，平均每个细胞含3.4个Ag NOR颗粒，银染色×1400
图3 Ⅲ级星形细胞瘤，平均每个细胞含13个Ag NOR颗粒，银染色×1400
图4 Ⅲ级星形细胞瘤，可见一个Ag NOR主颗粒和多个卫
生颗粒，平均每个细胞含12个Ag NOR，银染色×1400
讨 论
Ag NOR是与rRNA相关的酸性非组蛋白，其生化性质可能是调节rRNA转录的蛋白质或是RNA聚合酶I的亚单位，起保持rDNA链伸展的作用，对核糖体的形成及细胞内蛋白质的合成至关重要。故Ag NOR可作为rDNA转录活动的标志，用来反映核仁结构和功能的变化。
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1979年，Bush等[1]采用Ag NOR法比较了淋巴细胞和肝细胞等正常非活动细胞和肿瘤细胞，发现肿瘤细胞内银染颗粒比正常细胞要多[1]。类似的报道还有乳腺癌、前列腺癌、食道癌、胃癌、结晶肠癌、黑色素瘤、间皮瘤及肝癌[2～6]。故Ag NOR计数对区别良恶性病变的价值已越来越受到重视。1988年Rowlands等[6]研究了18例宫颈上皮癌(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级各6例)及6名正常人，结果Ⅲ级宫颈癌与正常及Ⅰ、Ⅱ级宫颈癌差别显著。1988年Crocker等[2]对皮肤肿瘤进行了Ag NOR计数，发现基底细胞癌的计数显著高于其它皮肤良恶性肿瘤。他们还对小儿几种小圆形细胞瘤(神经母细胞瘤、Ewing氏肉瘤及胚胎型横纹肌肉瘤)进行了计数，其结果各不相同，并可以此作鉴别诊断。因此Ag NOR对于肿瘤的鉴别诊断、区分良恶性病变及肿瘤的分型分级等有一定价值。
在本组病例中，Ⅲ、Ⅳ级星形细胞瘤Ag NOR颗粒明显多于Ⅰ、Ⅱ级星形细胞瘤。提示Ag NOR的计数与肿瘤的恶性程度是成正比的。Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ级星形细胞瘤Ag NOR的计数各例间差别小，前者最低计数和最高计数差3.1个，后者差4.4个，而Ⅱ级和肥胖型差别较大，前者9.2个，后者7.1个。这两组的Ag NOR计数一部分接近Ⅰ级星形细胞瘤(2.5～4.9个)，而另一部分接近Ⅲ、Ⅳ级星形细胞瘤(8.4～13.1个)。由于Ag NOR颗粒多寡反映了细胞的生长活性，因此我们认为Ag NOR对于Ⅱ级星形细胞瘤有特殊重要意义。对那些计数高的Ⅱ级星形细胞瘤应接Ⅲ、Ⅳ级星形细胞瘤对待，而计数低的Ⅱ级星形细胞瘤可望有较好的预后。一般来讲，肥胖细胞型星形细胞瘤Ⅱ级星形细胞瘤，我们之所以要把此型专门分成一组是因为一半病例具有其特殊Ag NOR形态，即由主Ag NOR和卫星Ag NOR构成，此形态除可在Ⅲ、Ⅳ级组见到外，其它各组无此形态。而且这些病例Ag NOR计数接近Ⅲ、Ⅳ级组。众所周知，星形细胞瘤由于取材部位不同，其恶性度可以表现不同，因此强调要多处取材。银染色技术的应用是否可以通过一处取材的Ag NOR计数来反映肿瘤的全貌，还需进一步实验证明。
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本图片由本校电教室张玉燕同志协助照相，特此致谢
参考文献
1. Bush H, et al. Silver staining of nucleolar granules in tumor cells. Cancer Res 1979；39：857.
2. 王瑞年，等.Ag NOR 肿瘤研究的一项新指标.国外医学(肿瘤分册)1989；1：22.
3. Crocker J, et al. Nucleolar organiser regions in normal ,cirrhotic and carcinomatous livers. J Clin Pathol 1988；41：1044.
4. Egan MJ, et al. Nucleolar organiser regions in small cell tumors of childhood. J Pathol 1987；153：275.
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5. Crocker J, et al. Nucleolar organiser region associated proteims in cutaneous melanotic lesions: a quantitative study. J Clin Pathol 1987；40：885.
6. Rowlands DC, et al. Nucleolar organiser region associated proteins in cervical intraepithelial neoplasia. J Clin Pathol 1988；41：1200.
(1989年5月10日收稿 同年12月14日修回), 百拇医药
单位：李青 丁华野 羊为民(西安第四军医大学病理解剖学教研室 710033)；李耀君(西安热工程研究所 710033)
关键词：星形细胞瘤；蛋白
中华医学杂志900310
提要 28例不同类型的星形细胞瘤，用银染色技术显示核仁组成区相关的嗜银蛋白(Ag NOR)，并用图象分析仪进行定量分析。结果，每个星形细胞瘤细胞含有的Ag NOR颗粒分布为：Ⅰ级星型细胞瘤4.6个，Ⅱ级7.1个，Ⅲ、Ⅳ级11.71个，提示Ag NOR颗粒多寡与肿瘤恶性程度成正比。
嗜银蛋白(Ag NOR)与核仁组成相关。目前认为它对于肿瘤的鉴别诊断、区分良恶性病变及肿瘤的分型分级及检测癌前病变等有一定的价值。我们应用图象分析仪对28例不同级别的星形细胞瘤的Ag NOR进行定量分析，旨在探讨星形细胞瘤分级的客观标准，为临床治疗和判断预后作参考。
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材料与方法
一、组织制备及Ag NOR染色
本组28例星形细胞瘤取自手术切除肿瘤标本，10%福马林液固定，石蜡包埋，连续切片，厚3～4μm，一张做HE染色，另一张做Ag NOR染色。Ag NOR染色方法：(1)切片经二甲苯脱蜡，逐级乙醇，进入去离子化水化；(2)银工作液配制：明胶溶于1%蚁酸液使成2%溶液，将此溶液按1：2容积与50%硝酸银溶液混合而成；(3)将此工作液滴加于组织切片上，室温下暗室作用1小时；(4)去离子水充分冲洗，经脱水和二甲苯透明后，用加拿大树胶封片。
二、Ag NOR含量测定
应用西德Leitz公司的TASplus型图象分析仪，测量每个细胞含Ag NOR颗粒的个数，每例切片观察20个细胞，最后取平均值。
28例星形细胞瘤HE染色后病理诊断Ⅰ级6例；Ⅱ级14例，其中包括肥胖细胞型6例；Ⅲ、Ⅳ级8例。Ag NOR颗粒在每个细胞中的计数见图1。
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星形细胞瘤类型和级别
图1 每组Ag NOR均数
Ⅰ级星形细胞瘤每个细胞含Ag NOR颗粒3.4～6.5个，平均4.6个，颗粒大小基本一致(图2)。Ⅱ级2.5～11.7个，平均7.1个。肥胖细胞型3.4～13.1个，平均7.3个，颗粒大小不规则，其中有3例在细胞核中可见1～2个较大Ag NOR颗粒，周围为小的卫星颗粒。这种类型Ag NOR计数在8.5～13.1之间(图3)。Ⅲ、Ⅳ7.7～13.3个，平均11.71个，颗粒大小不规则(图4)，但有1例也可见到同肥胖细胞型一样的大Ag NOR颗粒。另做了2例正常脑组织，1例4.25个，另1例2.8个。方差分析各组均数。Ⅲ、Ⅳ级星形细胞瘤组和Ⅰ组星形细胞瘤相比，P<0.01；和Ⅱ级以及胖细胞型星形细胞瘤相比，P<0.05。Ⅰ、Ⅱ级和肥胖细胞型组间相比，差异无统计学意义。
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图2 Ⅰ级星形细胞瘤，平均每个细胞含3.4个Ag NOR颗粒，银染色×1400
图3 Ⅲ级星形细胞瘤，平均每个细胞含13个Ag NOR颗粒，银染色×1400
图4 Ⅲ级星形细胞瘤，可见一个Ag NOR主颗粒和多个卫
生颗粒，平均每个细胞含12个Ag NOR，银染色×1400
讨 论
Ag NOR是与rRNA相关的酸性非组蛋白，其生化性质可能是调节rRNA转录的蛋白质或是RNA聚合酶I的亚单位，起保持rDNA链伸展的作用，对核糖体的形成及细胞内蛋白质的合成至关重要。故Ag NOR可作为rDNA转录活动的标志，用来反映核仁结构和功能的变化。
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1979年，Bush等[1]采用Ag NOR法比较了淋巴细胞和肝细胞等正常非活动细胞和肿瘤细胞，发现肿瘤细胞内银染颗粒比正常细胞要多[1]。类似的报道还有乳腺癌、前列腺癌、食道癌、胃癌、结晶肠癌、黑色素瘤、间皮瘤及肝癌[2～6]。故Ag NOR计数对区别良恶性病变的价值已越来越受到重视。1988年Rowlands等[6]研究了18例宫颈上皮癌(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级各6例)及6名正常人，结果Ⅲ级宫颈癌与正常及Ⅰ、Ⅱ级宫颈癌差别显著。1988年Crocker等[2]对皮肤肿瘤进行了Ag NOR计数，发现基底细胞癌的计数显著高于其它皮肤良恶性肿瘤。他们还对小儿几种小圆形细胞瘤(神经母细胞瘤、Ewing氏肉瘤及胚胎型横纹肌肉瘤)进行了计数，其结果各不相同，并可以此作鉴别诊断。因此Ag NOR对于肿瘤的鉴别诊断、区分良恶性病变及肿瘤的分型分级等有一定价值。
在本组病例中，Ⅲ、Ⅳ级星形细胞瘤Ag NOR颗粒明显多于Ⅰ、Ⅱ级星形细胞瘤。提示Ag NOR的计数与肿瘤的恶性程度是成正比的。Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ级星形细胞瘤Ag NOR的计数各例间差别小，前者最低计数和最高计数差3.1个，后者差4.4个，而Ⅱ级和肥胖型差别较大，前者9.2个，后者7.1个。这两组的Ag NOR计数一部分接近Ⅰ级星形细胞瘤(2.5～4.9个)，而另一部分接近Ⅲ、Ⅳ级星形细胞瘤(8.4～13.1个)。由于Ag NOR颗粒多寡反映了细胞的生长活性，因此我们认为Ag NOR对于Ⅱ级星形细胞瘤有特殊重要意义。对那些计数高的Ⅱ级星形细胞瘤应接Ⅲ、Ⅳ级星形细胞瘤对待，而计数低的Ⅱ级星形细胞瘤可望有较好的预后。一般来讲，肥胖细胞型星形细胞瘤Ⅱ级星形细胞瘤，我们之所以要把此型专门分成一组是因为一半病例具有其特殊Ag NOR形态，即由主Ag NOR和卫星Ag NOR构成，此形态除可在Ⅲ、Ⅳ级组见到外，其它各组无此形态。而且这些病例Ag NOR计数接近Ⅲ、Ⅳ级组。众所周知，星形细胞瘤由于取材部位不同，其恶性度可以表现不同，因此强调要多处取材。银染色技术的应用是否可以通过一处取材的Ag NOR计数来反映肿瘤的全貌，还需进一步实验证明。
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本图片由本校电教室张玉燕同志协助照相，特此致谢
参考文献
1. Bush H, et al. Silver staining of nucleolar granules in tumor cells. Cancer Res 1979；39：857.
2. 王瑞年，等.Ag NOR 肿瘤研究的一项新指标.国外医学(肿瘤分册)1989；1：22.
3. Crocker J, et al. Nucleolar organiser regions in normal ,cirrhotic and carcinomatous livers. J Clin Pathol 1988；41：1044.
4. Egan MJ, et al. Nucleolar organiser regions in small cell tumors of childhood. J Pathol 1987；153：275.
, http://www.100md.com
5. Crocker J, et al. Nucleolar organiser region associated proteims in cutaneous melanotic lesions: a quantitative study. J Clin Pathol 1987；40：885.
6. Rowlands DC, et al. Nucleolar organiser region associated proteins in cervical intraepithelial neoplasia. J Clin Pathol 1988；41：1200.
(1989年5月10日收稿 同年12月14日修回), 百拇医药