尿液流式细胞DNA分析术在膀胱肿瘤诊断中的价值
作者：曹世龙 王泽 缪延杰 熊汝成 缪中良
单位：曹世龙(上海医科大学肿瘤医院放射生物室 200032)；王泽 缪延杰 熊汝成 缪中良(上海医科大学中山医院泌尿外科 200032)
关键词：
中华医学杂志900317
我们用流式细胞分析术(Flow cytometry, FCM)对膀胱肿瘤病人的尿液标本作了细胞DNA含量测定，目的在于研究尿液可否作为FCM检测的理想标本和尿液FCM检测在膀胱肿瘤诊断中的价值。
一、材料与方法
我们对102例病人的尿液和膀胱冲洗液同时进行FCM检测，其中，68例系膀胱肿瘤病人为肿瘤组，34例系泌尿系非肿瘤病人对照组。两组病例均经过泌尿科常规尿细胞学检查和膀胱镜检查及活检等作对照。肿瘤组68例均经手术治疗，病理学检查诊断为膀胱移行上皮细胞癌。对上述每一病例分别收集膀胱冲洗液和尿液，这些标本经纯酒精固定，4°C冰箱中储存。染色前依次经0.1% Triton X-100及0.1%核糖核酸酶处理，采用0.05%碘化丙锭染液染色。所用流式细胞仪型号为EPICSV，标本检测前后对正常人淋巴细胞作检测，所得DNA含量作为正常值标准。FCM诊断肿瘤的阳性标准为：(1)异倍体或近二倍体波型的出现。(2)超二倍体细胞比值>15%伴明显的四倍体波型。(3)G0/G1波型变异系数>9%。凡出现上述标准之一者为FCM检测阳性。
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二、结果
肿瘤组和对照组102例病人的膀胱冲洗液均得到满意的FCM检测结果，而上述病人中只有65例病人的尿液标本得到满意的FCM检测结果，其余37例病人的尿液标本仅得到较满意的FCM检测结果，后者与其膀胱冲洗液FCM检测结果相比，DNA直方图上除了显示有较多的细胞团块和细胞碎片外，无明显的S期细胞曲线和G2/M波型，无法作细胞动力学分析，但有明显的G0/G1波型，可以进行DNA倍体分析。
对照组34例病人尿液和膀胱冲洗液FCM检测均为二倍体，没有一例出现超二倍体细胞比值>15%伴明显四倍体波型。对照组34例病人中，所有的膀胱冲洗液的G0/G1波型变异系数均<9%，而16例病人其尿液标本G0/G1波型变异系数>9%，以G0/G1波型变异系数>9%作为FCM诊断肿瘤的阳性标准，膀胱冲洗液FCM的假阳性率为零，而尿液FCM的假阳性率则高达47%(16/34)。因此仅将G0/G1波型变异系数>9%作为膀胱冲洗液FCM诊断肿瘤的标准之一。
, 百拇医药
肿瘤组68例中，异倍体者38例(55.9%)，其中34例膀胱冲洗液和尿液FCM检测均为异倍体，3例膀胱冲洗液为异倍体而尿液则为二倍体，1例膀胱冲洗液为二倍体而尿液则为异倍体。尿液和膀胱冲洗液FCM检测阳性率分别为75%(51/68)和90%(61/68)。按照UICC病理分期，68例膀胱肿瘤可分为浅表性(Ta-1)肿瘤29例和浸润性(T2-4)肿瘤39例，前者尿液和膀胱冲洗液FCM阳性率分别为55%(16/29)和79.3%(23/29)，其差别无显著意义(P<0.05)，而后者尿液和膀胱冲洗液FCM阳性率分别为89.7%(35/39)和94.4%(38/39)，其差别无显著意义(P<0.05)。此外，肿瘤组尿细胞学阳性率为47%(32/68)，在浅表性和浸润性肿瘤其阳性率分别为13.7%(4/29)和71.8%(28/39)。有5例尿细胞学阳性而尿液FCM检测则阴性，结合尿细胞学和尿液FCM检测可以诊断出82.3%(56/68)的膀胱肿瘤病人。肿瘤组68例病人中有7例连续送检尿液标本2次，第1次尿液标本送检其FCM阳性者4例(57.1%)，而第2次送检其FCM阳性者增至6例(85.7%)。三、讨论
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利用尿液流式细胞DNA分析术诊断膀胱肿瘤是国外近两年来开展的研究工作，由于尿液中含有较多的杂质，并且常伴有细菌污染，加之所含细胞数较少，因此尿液是否适合于FCM检测尚有争议。本组FCM检测，63.7%尿液标本和100%膀胱冲洗液得到了满意的结果，36.3%尿液标本虽无法得到有关细胞动力学数据，但仍然可以进行DNA倍体的分析，表明膀胱冲洗液和尿液标本均可用于FCM检测，但前者明显优于后者。我们还发现尿液FCM检测与膀胱冲洗液FCM检测在诊断膀胱肿瘤标准上不尽相同，对于膀胱冲洗液和尿液标本可以选择异倍体或近二倍体波型的出现和超二倍体细胞比值>15%伴明显的四倍体波型作为肿瘤诊断的标准，按G0/G1波型变异系数>9%诊断肿瘤只适合于膀胱冲洗液FCM检测。
关于FCM检测阳性率问题，肿瘤组检测结果显示膀胱冲洗液的阳性率明显高于尿液，在浸润性肿瘤两者的阳性率差距较小，而在浅表性肿瘤两种的阳性率相差较大。表明在膀胱肿瘤尤其在早期膀胱肿瘤诊断上，膀胱冲洗液FCM检测优于尿液FCM检测。究其原因，可能是因为(1)脱落的细胞由于受到尿液酸碱度等因素的影响，其胞核发生了裂解，因而产生了较多的核碎片。(2)许多膀胱肿瘤病人常合并泌尿系感染，因此这些患者的尿液常受到不同程度的细菌污染。(3)尤其在早期病理级别较低的肿瘤病例中，尿液内脱落的瘤细胞明显少于膀胱冲洗液。
本组某些肿瘤病例连续送检尿液2次，第2次送检其FCM阳性率可达85.7%，尽管上述病例数较少，提示多次送检尿液可以明显提高尿液FCM检测的阳性率。另外，本组尿液FCM阳性率不论是在浅表性肿瘤还是浸润性肿瘤均高于尿细胞学检查。
(1989年6月30日收稿 同年12月5日修回), 百拇医药
单位：曹世龙(上海医科大学肿瘤医院放射生物室 200032)；王泽 缪延杰 熊汝成 缪中良(上海医科大学中山医院泌尿外科 200032)
关键词：
中华医学杂志900317
我们用流式细胞分析术(Flow cytometry, FCM)对膀胱肿瘤病人的尿液标本作了细胞DNA含量测定，目的在于研究尿液可否作为FCM检测的理想标本和尿液FCM检测在膀胱肿瘤诊断中的价值。
一、材料与方法
我们对102例病人的尿液和膀胱冲洗液同时进行FCM检测，其中，68例系膀胱肿瘤病人为肿瘤组，34例系泌尿系非肿瘤病人对照组。两组病例均经过泌尿科常规尿细胞学检查和膀胱镜检查及活检等作对照。肿瘤组68例均经手术治疗，病理学检查诊断为膀胱移行上皮细胞癌。对上述每一病例分别收集膀胱冲洗液和尿液，这些标本经纯酒精固定，4°C冰箱中储存。染色前依次经0.1% Triton X-100及0.1%核糖核酸酶处理，采用0.05%碘化丙锭染液染色。所用流式细胞仪型号为EPICSV，标本检测前后对正常人淋巴细胞作检测，所得DNA含量作为正常值标准。FCM诊断肿瘤的阳性标准为：(1)异倍体或近二倍体波型的出现。(2)超二倍体细胞比值>15%伴明显的四倍体波型。(3)G0/G1波型变异系数>9%。凡出现上述标准之一者为FCM检测阳性。
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二、结果
肿瘤组和对照组102例病人的膀胱冲洗液均得到满意的FCM检测结果，而上述病人中只有65例病人的尿液标本得到满意的FCM检测结果，其余37例病人的尿液标本仅得到较满意的FCM检测结果，后者与其膀胱冲洗液FCM检测结果相比，DNA直方图上除了显示有较多的细胞团块和细胞碎片外，无明显的S期细胞曲线和G2/M波型，无法作细胞动力学分析，但有明显的G0/G1波型，可以进行DNA倍体分析。
对照组34例病人尿液和膀胱冲洗液FCM检测均为二倍体，没有一例出现超二倍体细胞比值>15%伴明显四倍体波型。对照组34例病人中，所有的膀胱冲洗液的G0/G1波型变异系数均<9%，而16例病人其尿液标本G0/G1波型变异系数>9%，以G0/G1波型变异系数>9%作为FCM诊断肿瘤的阳性标准，膀胱冲洗液FCM的假阳性率为零，而尿液FCM的假阳性率则高达47%(16/34)。因此仅将G0/G1波型变异系数>9%作为膀胱冲洗液FCM诊断肿瘤的标准之一。
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肿瘤组68例中，异倍体者38例(55.9%)，其中34例膀胱冲洗液和尿液FCM检测均为异倍体，3例膀胱冲洗液为异倍体而尿液则为二倍体，1例膀胱冲洗液为二倍体而尿液则为异倍体。尿液和膀胱冲洗液FCM检测阳性率分别为75%(51/68)和90%(61/68)。按照UICC病理分期，68例膀胱肿瘤可分为浅表性(Ta-1)肿瘤29例和浸润性(T2-4)肿瘤39例，前者尿液和膀胱冲洗液FCM阳性率分别为55%(16/29)和79.3%(23/29)，其差别无显著意义(P<0.05)，而后者尿液和膀胱冲洗液FCM阳性率分别为89.7%(35/39)和94.4%(38/39)，其差别无显著意义(P<0.05)。此外，肿瘤组尿细胞学阳性率为47%(32/68)，在浅表性和浸润性肿瘤其阳性率分别为13.7%(4/29)和71.8%(28/39)。有5例尿细胞学阳性而尿液FCM检测则阴性，结合尿细胞学和尿液FCM检测可以诊断出82.3%(56/68)的膀胱肿瘤病人。肿瘤组68例病人中有7例连续送检尿液标本2次，第1次尿液标本送检其FCM阳性者4例(57.1%)，而第2次送检其FCM阳性者增至6例(85.7%)。三、讨论
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利用尿液流式细胞DNA分析术诊断膀胱肿瘤是国外近两年来开展的研究工作，由于尿液中含有较多的杂质，并且常伴有细菌污染，加之所含细胞数较少，因此尿液是否适合于FCM检测尚有争议。本组FCM检测，63.7%尿液标本和100%膀胱冲洗液得到了满意的结果，36.3%尿液标本虽无法得到有关细胞动力学数据，但仍然可以进行DNA倍体的分析，表明膀胱冲洗液和尿液标本均可用于FCM检测，但前者明显优于后者。我们还发现尿液FCM检测与膀胱冲洗液FCM检测在诊断膀胱肿瘤标准上不尽相同，对于膀胱冲洗液和尿液标本可以选择异倍体或近二倍体波型的出现和超二倍体细胞比值>15%伴明显的四倍体波型作为肿瘤诊断的标准，按G0/G1波型变异系数>9%诊断肿瘤只适合于膀胱冲洗液FCM检测。
关于FCM检测阳性率问题，肿瘤组检测结果显示膀胱冲洗液的阳性率明显高于尿液，在浸润性肿瘤两者的阳性率差距较小，而在浅表性肿瘤两种的阳性率相差较大。表明在膀胱肿瘤尤其在早期膀胱肿瘤诊断上，膀胱冲洗液FCM检测优于尿液FCM检测。究其原因，可能是因为(1)脱落的细胞由于受到尿液酸碱度等因素的影响，其胞核发生了裂解，因而产生了较多的核碎片。(2)许多膀胱肿瘤病人常合并泌尿系感染，因此这些患者的尿液常受到不同程度的细菌污染。(3)尤其在早期病理级别较低的肿瘤病例中，尿液内脱落的瘤细胞明显少于膀胱冲洗液。
本组某些肿瘤病例连续送检尿液2次，第2次送检其FCM阳性率可达85.7%，尽管上述病例数较少，提示多次送检尿液可以明显提高尿液FCM检测的阳性率。另外，本组尿液FCM阳性率不论是在浅表性肿瘤还是浸润性肿瘤均高于尿细胞学检查。
(1989年6月30日收稿 同年12月5日修回), 百拇医药