DNA-DNA杂交检测研究人类巨细胞病毒感染与病理妊娠的关系
作者：黄树林 胡捷 李钰 余素琴 梁翠娥 潘米香
单位：黄树林、胡捷(湖北省妇幼保健院病毒研究室 430070)；李钰(哈尔滨医科大学)；余素琴、梁翠娥、潘米香(湖北省妇幼保健院产科)
关键词：
中华医学杂志900323
目前认为孕产妇的病毒性感染发生率较高，而以人类巨细胞病毒(HCMV)感染最为常见。HCMV是致孕妇宫内感染，引起胎儿流产、死胎、畸形等疾病的主要病原体[1]。我们用DNA-DNA杂交检测HCMV感染，拟探讨孕妇HCMV感染后对胎儿及妊娠的影响，现简报如下。
一、材料和方法
1. 材料：收集本院门诊孕妇尿液标本共91份，其中79份为无异常孕产史孕妇的尿液，(孕龄1～3月者12份，孕龄4～6月者33份，孕龄7～9月者34份)。有异常孕产孕妇的尿标本12份(除外遗传性疾病等其它因素)。
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2. 尿标本的处理：取孕妇尿20ml,400Υ/min离心15分钟，倒掉上清，沉淀溶于500μl TE液中，加1%SDS 50μl蛋白酶K5μl(10mg/ml)；37°C水溶1小时，饱和酚抽提两次，氯仿或异戊醇抽提一次，加两倍体积冷无水乙醇，-20°C放置2小时，16000Υ/min离心15分钟，沉淀真空干燥，再溶于40μl TE液中。
3. 探针制备：用HCMV AD169株Hind Ⅲ酶切片段克隆的质粒PHC 79[2](中国预防中心病毒所惠赠)。用常规方法扩增提取质粒DNA[3]。缺口翻译方法用[α-32P]-dCTP[4](北京福瑞诊断用品公司产品)标记。
4. 核酸打点杂交：参照文献所报道的方法[4]。
二、结果
, 百拇医药
一般妊娠妇女的79份尿标本；共检出29份HCMV阳性杂交点，阳性率为36.7%，而孕龄1～3月者有4例(4/12)，4～6月有12例(12/33)，7～9月的有13例(13/34)，所有被检孕妇未出现异常的临床表现。
有异常产史的孕妇尿HCMV DNA检测结果：12份尿标本中阳性9份，阳性率75%，与一般妊娠妇女HCMV感染差别有统计学意义，P<0.05。
三、讨论
目前认为HCMV先天性感染与母亲的原发感染或妊娠期的潜伏感染激活有关。本组资料表明妊娠妇女HCMV感染在30%以上，而且在不同孕期感染率不同，1～3月为33.3%，4～6月为36.4%，7～9月为38.2%。Chandler等[5]人曾从血清学检测和宫颈分泌物的病毒分离对孕妇HCMV感染的情况做了研究，提出HCMV随妊娠时间感染率增高。流行病学调查表明，我国育龄妇女95%血清中有HCMV抗体[6]，但多无临床症状，而在妊娠期由于免疫系统发生变化易致潜伏状态存在的HCMV激活或发生原发性感染，并通过血胎屏障感染胎儿，以致流产、死胎以及致畸或婴儿智力发育障碍等出生缺陷，在围产期则可经产道或母乳感染给新生儿，引起新生儿的巨细胞包涵体病，出现黄疸，肝、脾肿大，瘀斑。本组资料表明HCMV感染与胎儿发育异常关系密切，有异常孕产史(包括有流产、死胎或胎儿畸形)的12例孕妇，在除外遗传因素等影响因素外，尿HCMV DNA 检测HCMV感染率可达75%，且与一般妊娠妇女HCMV感染有差别。
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利用分子杂交方法对HCMV感染进行诊断是一个特异、敏感的方法。本实验方法可达到早期、快速、准确率高之效果，采用HCMV DNA同源序列检测育龄妇女，尤其是对除外了遗传性疾病后有不明原因异常孕史的妇女，可达到明确诊断、指导优生。
参考文献
1. Robert F. Epiolemiology and transmission of cytomegalouirus. J Infect Dis 1985；152：243.
2. Bernhard F, et al. Cloning of the complete human cytomegalouirus genome in eosmids. Gene 1982；18：39.
3. Maniatis T, et al. Molecular cloning 1982；86：
, 百拇医药
4. Augustin, et al. Boblems in detection of cytome-galouirus in urine samples by dot blot Hybridization. J Clin Microbiol 1987；25：1973.
5. Chandler M. et al. Epidemiology of cytomegalorirus Infection in a heterageneous population of pregnant women. J Infect Dis 1984；152：2.
6. 王淑风，等.用核酸杂交法检查北京地区幼儿园正常儿童尿中人巨细胞病毒DNA.病毒学报 1988；4：73.
(1989年5月27日收稿 同年10月2日修回), http://www.100md.com
单位：黄树林、胡捷(湖北省妇幼保健院病毒研究室 430070)；李钰(哈尔滨医科大学)；余素琴、梁翠娥、潘米香(湖北省妇幼保健院产科)
关键词：
中华医学杂志900323
目前认为孕产妇的病毒性感染发生率较高，而以人类巨细胞病毒(HCMV)感染最为常见。HCMV是致孕妇宫内感染，引起胎儿流产、死胎、畸形等疾病的主要病原体[1]。我们用DNA-DNA杂交检测HCMV感染，拟探讨孕妇HCMV感染后对胎儿及妊娠的影响，现简报如下。
一、材料和方法
1. 材料：收集本院门诊孕妇尿液标本共91份，其中79份为无异常孕产史孕妇的尿液，(孕龄1～3月者12份，孕龄4～6月者33份，孕龄7～9月者34份)。有异常孕产孕妇的尿标本12份(除外遗传性疾病等其它因素)。
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2. 尿标本的处理：取孕妇尿20ml,400Υ/min离心15分钟，倒掉上清，沉淀溶于500μl TE液中，加1%SDS 50μl蛋白酶K5μl(10mg/ml)；37°C水溶1小时，饱和酚抽提两次，氯仿或异戊醇抽提一次，加两倍体积冷无水乙醇，-20°C放置2小时，16000Υ/min离心15分钟，沉淀真空干燥，再溶于40μl TE液中。
3. 探针制备：用HCMV AD169株Hind Ⅲ酶切片段克隆的质粒PHC 79[2](中国预防中心病毒所惠赠)。用常规方法扩增提取质粒DNA[3]。缺口翻译方法用[α-32P]-dCTP[4](北京福瑞诊断用品公司产品)标记。
4. 核酸打点杂交：参照文献所报道的方法[4]。
二、结果
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一般妊娠妇女的79份尿标本；共检出29份HCMV阳性杂交点，阳性率为36.7%，而孕龄1～3月者有4例(4/12)，4～6月有12例(12/33)，7～9月的有13例(13/34)，所有被检孕妇未出现异常的临床表现。
有异常产史的孕妇尿HCMV DNA检测结果：12份尿标本中阳性9份，阳性率75%，与一般妊娠妇女HCMV感染差别有统计学意义，P<0.05。
三、讨论
目前认为HCMV先天性感染与母亲的原发感染或妊娠期的潜伏感染激活有关。本组资料表明妊娠妇女HCMV感染在30%以上，而且在不同孕期感染率不同，1～3月为33.3%，4～6月为36.4%，7～9月为38.2%。Chandler等[5]人曾从血清学检测和宫颈分泌物的病毒分离对孕妇HCMV感染的情况做了研究，提出HCMV随妊娠时间感染率增高。流行病学调查表明，我国育龄妇女95%血清中有HCMV抗体[6]，但多无临床症状，而在妊娠期由于免疫系统发生变化易致潜伏状态存在的HCMV激活或发生原发性感染，并通过血胎屏障感染胎儿，以致流产、死胎以及致畸或婴儿智力发育障碍等出生缺陷，在围产期则可经产道或母乳感染给新生儿，引起新生儿的巨细胞包涵体病，出现黄疸，肝、脾肿大，瘀斑。本组资料表明HCMV感染与胎儿发育异常关系密切，有异常孕产史(包括有流产、死胎或胎儿畸形)的12例孕妇，在除外遗传因素等影响因素外，尿HCMV DNA 检测HCMV感染率可达75%，且与一般妊娠妇女HCMV感染有差别。
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利用分子杂交方法对HCMV感染进行诊断是一个特异、敏感的方法。本实验方法可达到早期、快速、准确率高之效果，采用HCMV DNA同源序列检测育龄妇女，尤其是对除外了遗传性疾病后有不明原因异常孕史的妇女，可达到明确诊断、指导优生。
参考文献
1. Robert F. Epiolemiology and transmission of cytomegalouirus. J Infect Dis 1985；152：243.
2. Bernhard F, et al. Cloning of the complete human cytomegalouirus genome in eosmids. Gene 1982；18：39.
3. Maniatis T, et al. Molecular cloning 1982；86：
, 百拇医药
4. Augustin, et al. Boblems in detection of cytome-galouirus in urine samples by dot blot Hybridization. J Clin Microbiol 1987；25：1973.
5. Chandler M. et al. Epidemiology of cytomegalorirus Infection in a heterageneous population of pregnant women. J Infect Dis 1984；152：2.
6. 王淑风，等.用核酸杂交法检查北京地区幼儿园正常儿童尿中人巨细胞病毒DNA.病毒学报 1988；4：73.
(1989年5月27日收稿 同年10月2日修回), http://www.100md.com