人异体肾移植排斥反应PNA和DBA的结合部位
作者：郑智勇 余英豪 卢起 曾万铮 欧良明
单位：(南京部队福州总医院)
关键词：
中华医学杂志900321
我们采用辣根过氧化物酶(HRP)标记的花生凝集素(PNA)和双花豆凝集素(DBA)染色，观察不同类型肾移植斥反应相应受体的分布部位，并对其意义进行探讨。
一、材料和方法
1. 病例选择：我院10年来成人尸体肾移植排斥反应后术切除标本27例，按使用免疫抑制剂分硫唑嘌呤(AZA)组13例，环孢素A(CYA)组14例。以正常肾脏(未用的供肾)2例、肾小球肾炎肾穿标本15例作为对照。排斥反应及肾小球炎分型均按国内通用标准。
, 百拇医药
2. 染色方法：(1)DBA和HRP(Type VI)系Sigma公司产品，PNA为Vector公司产品，按Avrameas法[1]制备PNA-HRP和DBA-HRP。(2)组织经福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片2μm厚，分别作HE、PAS、PASM和Masson三色染色，以及PNA-HRP和DBA-HRP免疫酶染色；免疫酶染色中，切片未经胰酶消化，而是浸入PBSC液(pH7.4 0.1MPBS中含0.1mmol MgCl2、MnCl2 和CaCl2)中20分钟，再滴加PNA-HRP或DBA-HRP(PBSC液稀释)，其余步骤同常规。(3)肾小球肾炎组分送组织，作冰冻切片IgG、IgM、IgA、C3、C4及C1q免疫荧光染色。
二、结果
1. 正常肾脏：PNA和DBA的结合部位基本一致，肾球囊壁层、远端小管、集合管和肾小管基膜均阳性，阳性肾小管一般以上皮细胞腔面着色较深；肾小球、近端小管及细段均阴性；中小动脉仅外膜层着色。
, 百拇医药
2. 肾小球肾炎组：肾小球轻微病变1例，系膜增生性肾小球肾炎2例，膜增生性肾小球肾炎5例，膜性肾病2例，IgA肾病3例，狼疮性肾炎2例。免疫荧光证实，各例肾不球系膜区或血管襻均有不同程度免疫球蛋白和补体沉积。各例中PNA和DBA的结合部位与正常肾脏基本相同。
3. 肾移植排斥反应组：呈现PNA和DBA异常的结合分布，表现为(1)PNA或DBA与肾小球结合，有两种分布模式，多数病例呈弥漫性球性血管襻基膜线状强阳性着色，少数病例呈系膜区不规则斑点状着色(附表)(2)中小动脉除外膜层着色外，明显血管内膜炎处有PNA和DBA不均匀着染；(3)绝大多数病例肾小管内有多少不等的PNA和DBA结合阳性的管型物质；(4)PNA和DBA在肾组织中的正常结合分布不同程度减弱或消失，在病变较重区域尤为明显。
附表 肾排斥反应肾小球与PNA和DBA结合的阳性例数及分布特点 组别
例数
, http://www.100md.com
PNA
DBA
线状
斑点
线状
斑点
AZA组
超急性
2
2
0
0
0
急性
, http://www.100md.com
9
6
0
0
1
慢性
2
1
1
1
0
合计
13
9
, 百拇医药
1
1
1
CYA组
超急性
4
0
0
0
1
急性
9
3
1
, http://www.100md.com
1
0
慢性
1
0
0
0
0
合计
14
3
1
1
1
, http://www.100md.com
三、讨论
各种凝集素在正常肾组织中的结合部位具有高度特异性。本结果表明，PNA和DBA特异结合在肾球囊壁层、远端小管、集合管及肾小管基膜上，这与文献报道基本一致[2]。
肾移植排斥反应中凝集素的结合分布是否会发生改变尚未见报道。本结果表明，排斥反应中PNA和DBA在肾组织中的结合部位发生明显改变，特别是肾小球与PNA和DBA呈强阳性结合反应。本组15例肾小球肾炎中无一例有此现象，说明此种结合与免疫球蛋白和补体的沉积有关。一些学者发现[2]，正常肾组织切片经神经氨酸酶处理后，肾小球基膜可与PNA呈强阳性结合，但本组切片均未经此处理。因此我们认为排斥反应中有某种因素破坏了肾小球、特别是血管襻基膜的组化结构，使相应糖基暴露，造成上述结合反应，这也可能仅反应了肾小球基膜组化结构变性的一个侧面。CYA组肾小球与PNA结合的阳性率(28.6%)显著低于AZA组(76.9%)(x2=4.52，P<0.05)，提示CYA可能通过某种机制减轻了肾小球基膜的变性程度。
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一般认为，排斥反应中血管炎是造成移植肾缺血性坏死和功能丧失的主要原因，但从本组病例看，有些移植肾的组织病变程度尚不足以解释临床上移植肾无功能的现象，因此可能还有其它损害肾功能的因素存在。根据本观察所见，我们推测肾小球基膜组化结构的变性有可能会影响肾小球的滤过率，从而造成肾功能明显下降。如能有效控制和改善肾小球基膜的病变程度，将有利于提高移植肾的存活期。参考文献
1. Avrameas S Coupling of enzymes to protiens with glutaraldehyde Use of the conjugate for the detection of antigens and antibodies. Immunoche-mistry 1969；6：43.
2. Holthofer H, Lectin binding sites in kidney: A comparative study of 14 animal species. J Histochem Cytochem 1983；31：531.
(1989年7月24日收稿 同年11月8日修回), 百拇医药
单位：(南京部队福州总医院)
关键词：
中华医学杂志900321
我们采用辣根过氧化物酶(HRP)标记的花生凝集素(PNA)和双花豆凝集素(DBA)染色，观察不同类型肾移植斥反应相应受体的分布部位，并对其意义进行探讨。
一、材料和方法
1. 病例选择：我院10年来成人尸体肾移植排斥反应后术切除标本27例，按使用免疫抑制剂分硫唑嘌呤(AZA)组13例，环孢素A(CYA)组14例。以正常肾脏(未用的供肾)2例、肾小球肾炎肾穿标本15例作为对照。排斥反应及肾小球炎分型均按国内通用标准。
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2. 染色方法：(1)DBA和HRP(Type VI)系Sigma公司产品，PNA为Vector公司产品，按Avrameas法[1]制备PNA-HRP和DBA-HRP。(2)组织经福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片2μm厚，分别作HE、PAS、PASM和Masson三色染色，以及PNA-HRP和DBA-HRP免疫酶染色；免疫酶染色中，切片未经胰酶消化，而是浸入PBSC液(pH7.4 0.1MPBS中含0.1mmol MgCl2、MnCl2 和CaCl2)中20分钟，再滴加PNA-HRP或DBA-HRP(PBSC液稀释)，其余步骤同常规。(3)肾小球肾炎组分送组织，作冰冻切片IgG、IgM、IgA、C3、C4及C1q免疫荧光染色。
二、结果
1. 正常肾脏：PNA和DBA的结合部位基本一致，肾球囊壁层、远端小管、集合管和肾小管基膜均阳性，阳性肾小管一般以上皮细胞腔面着色较深；肾小球、近端小管及细段均阴性；中小动脉仅外膜层着色。
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2. 肾小球肾炎组：肾小球轻微病变1例，系膜增生性肾小球肾炎2例，膜增生性肾小球肾炎5例，膜性肾病2例，IgA肾病3例，狼疮性肾炎2例。免疫荧光证实，各例肾不球系膜区或血管襻均有不同程度免疫球蛋白和补体沉积。各例中PNA和DBA的结合部位与正常肾脏基本相同。
3. 肾移植排斥反应组：呈现PNA和DBA异常的结合分布，表现为(1)PNA或DBA与肾小球结合，有两种分布模式，多数病例呈弥漫性球性血管襻基膜线状强阳性着色，少数病例呈系膜区不规则斑点状着色(附表)(2)中小动脉除外膜层着色外，明显血管内膜炎处有PNA和DBA不均匀着染；(3)绝大多数病例肾小管内有多少不等的PNA和DBA结合阳性的管型物质；(4)PNA和DBA在肾组织中的正常结合分布不同程度减弱或消失，在病变较重区域尤为明显。
附表 肾排斥反应肾小球与PNA和DBA结合的阳性例数及分布特点 组别
例数
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PNA
DBA
线状
斑点
线状
斑点
AZA组
超急性
2
2
0
0
0
急性
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9
6
0
0
1
慢性
2
1
1
1
0
合计
13
9
, 百拇医药
1
1
1
CYA组
超急性
4
0
0
0
1
急性
9
3
1
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1
0
慢性
1
0
0
0
0
合计
14
3
1
1
1
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三、讨论
各种凝集素在正常肾组织中的结合部位具有高度特异性。本结果表明，PNA和DBA特异结合在肾球囊壁层、远端小管、集合管及肾小管基膜上，这与文献报道基本一致[2]。
肾移植排斥反应中凝集素的结合分布是否会发生改变尚未见报道。本结果表明，排斥反应中PNA和DBA在肾组织中的结合部位发生明显改变，特别是肾小球与PNA和DBA呈强阳性结合反应。本组15例肾小球肾炎中无一例有此现象，说明此种结合与免疫球蛋白和补体的沉积有关。一些学者发现[2]，正常肾组织切片经神经氨酸酶处理后，肾小球基膜可与PNA呈强阳性结合，但本组切片均未经此处理。因此我们认为排斥反应中有某种因素破坏了肾小球、特别是血管襻基膜的组化结构，使相应糖基暴露，造成上述结合反应，这也可能仅反应了肾小球基膜组化结构变性的一个侧面。CYA组肾小球与PNA结合的阳性率(28.6%)显著低于AZA组(76.9%)(x2=4.52，P<0.05)，提示CYA可能通过某种机制减轻了肾小球基膜的变性程度。
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一般认为，排斥反应中血管炎是造成移植肾缺血性坏死和功能丧失的主要原因，但从本组病例看，有些移植肾的组织病变程度尚不足以解释临床上移植肾无功能的现象，因此可能还有其它损害肾功能的因素存在。根据本观察所见，我们推测肾小球基膜组化结构的变性有可能会影响肾小球的滤过率，从而造成肾功能明显下降。如能有效控制和改善肾小球基膜的病变程度，将有利于提高移植肾的存活期。参考文献
1. Avrameas S Coupling of enzymes to protiens with glutaraldehyde Use of the conjugate for the detection of antigens and antibodies. Immunoche-mistry 1969；6：43.
2. Holthofer H, Lectin binding sites in kidney: A comparative study of 14 animal species. J Histochem Cytochem 1983；31：531.
(1989年7月24日收稿 同年11月8日修回), 百拇医药