β-内啡肽在沙土鼠缺血性脑水肿中的作用
作者：白 波 林葆城 宋朝佑 王成海 朱鹤年
单位：白 波(济宁医学院生理教研室)；林葆城 宋朝佑 王成海 朱鹤年(上海第二军医大学神经生物教研室 200433)
关键词：
中华医学杂志900318
近年来，采用纳洛酮对临床脑缺血病人进行试验性治疗，取得了一定疗效。交推测内源性阿片肽可能参与脑缺血的病理生理过程[1，2]。但不同家族内源性阿片肽在脑缺血的确切作用并不清楚。本工作采用沙土鼠急性脑缺血动物模型，观察了β-内啡肽(β-endorphin,β-EP)在缺血性脑水肿中的作用，以探讨纳洛酮治疗脑缺血的作用机理。
一、材料和方法
蒙古种沙土鼠217只体重50～70g，雌雄不拘。戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔麻醉后，分别分离并结扎双侧颈总动脉，假手术及麻醉对照组不结扎动脉。实验分为以下几个部分：(1)结扎动物双侧颈总动脉后15、30、60和120分分别断头取脑，取相同体积(2mm3)的双侧枕部皮层组织各2块，利用Marmarou等[3]方法测定其比重，判定组织水肿情况。(2)应用β-EP放射免疫测定方法[4]测定脑缺血不同时间，皮层和桥脑-延髓部分的β-EP免疫活性物质(ir-β-EP)的含量。(3)实验组动物侧脑室中分别缓慢注射纳洛酮5～40μg/μl，对照组注射生理盐水4μl，注射后2～5分钟结扎双侧颈总动脉，结扎后60分钟测定皮层比重。(4)实验组动物侧脑室内分别注射1：2、1：1、2：1和3：1抗β-EP血清4μl(效价1：16000)，对照组注射正常兔血清4μl，注射后60分结扎颈总动脉，结扎后60分钟测定皮层比重。(5)实验组动物侧脑定注射β-EP 4μg/4μl，对照组注射生理盐水4μl，注射后2～5分钟结扎颈总动脉，结扎后30分钟测定皮层z比重。
, 百拇医药
二、实验结果
1. 结扎双侧颈总动脉后15分钟，皮层比重已明显减小(sp.gr=1.0481)，此后随着缺血时间的处长，皮层比重进行性下降，即水肿加重。结扎后60～120分钟，皮层比重稳定在较低水平(1.0454左右)。相当于脑组织含水量增加4%左右。在一定时间内，脑缺血时间和皮层水肿(比重)的程度明显相关(Υ=0.871，P<0.01)。
2. 皮层ir-β-EP含量，除结扎动脉后30分钟下降34%外，结扎15、60和120分分别较对照组升高27.3%(P<0.01)39.6%和30.8%(P<0.05)。脑缺血不同时间皮层ir-β-EP含量的变化和皮层水肿的变化趋势基本一致，具有显著的相关特性(Υ=0.8784，P<0.01)。结扎颈总动脉后，桥延部ir-β-EP含量均没有明显变化(附表)。
附表 脑缺血时脑区β-内啡肽含量的动态变化(
±
pg/mg)
, 百拇医药
对照
15min
30min
60min
120min
大脑皮层
对照组
13.75±0.53
16.0±1.4
20.6±2.1
15.4±1.2
24.8±2.1
, 百拇医药 实验组
22.0±1.3**
13.6±1.1**
25.5±3.3*
35.9±4.4*
桥脑-延髓部
对照组
10.82±0.88
11.0±0.8
13.6±1.2
9.7±1.2
17.2±1.6
, 百拇医药
实验组
10.0±1.1
10.6±0.8
11.7±0.8
15.0±1.0
3. 侧脑室注射纳洛酮20μg/4μl，脑缺血60分钟后的皮层比重较对照组明显增加，即水肿减轻(P<0.01)。纳洛酮剂量在5～40μg时表现出明显的剂量-效应关系(附图)。
附图 侧脑室注射纳洛酮对脑缺血60分钟皮层比重的影响(**P<0.01)
4. 侧脑室注射不同剂量的抗β-EP血清，使缺血60分的皮层比重有不同程度增加，并显示明显的量-效关系，即表现出类似纳洛酮减轻或缓解缺血性脑水肿的作用。当注射剂量为2：1/4μl时，皮层比重从对照的1.0446±3.24-4增加到1.0470±3.82-4(P<0.01)。
, 百拇医药
5. 侧脑室注射β-EP 4μg/μl后，脑缺血30分后的皮层比重(1.0459±5.59-4)较注射生理盐水的对照组(1.0480±3.77-4)明显降低(P<0.05)，即水肿明显加重。生理盐水对照组和单纯缺血组相比，皮层比重没有明显变化。
三、讨论
本实验应用Marmarou等[3]溴代苯-煤油密度梯度法定量测定急性脑缺血后皮层水肿情况，表明在一定时间内，皮层水肿随着脑缺血时间的延长而进行性加重。由于沙土鼠脑动脉独特的解剖学特征，结扎动脉比侧颈总动脉后，大脑两半球发生完全性脑缺血，而脑干和小脑没有明显缺血现象。本实验表明，明显缺血的大脑皮层β-EP含量显著升高，没有明显缺血现象的桥延部，β-EP含量没有变化。皮层β-EP含量和相应时间皮层水肿程度相关。提示了β-EP在缺血性脑水肿中的潜在作用。测定脑或CSF中β-EP含量的变化，可以反映脑水肿情况。对于纳洛酮治疗脑缺血的作用尚存在争议[5]。本实验结果表明，侧脑室注射纳洛酮或抗β-EP血清，均可使脑缺血后的皮层水肿减轻，而β-EP显著加重缺血60分钟后的皮层水肿。提示β-EP可能参与了缺血性脑水肿的病理生理过程。阻断μ受体或消除体内β-EP的病理作用可能是纳洛酮治疗脑缺血的作用机制之一。
, 百拇医药
参考文献
1. Faden AI. Neuropeptides and stroke: cusrrent status and potential application. Stroke 1983；14：169.
2. Baskin DS, et al. Naloxone reversal of ischemia neurologic defictis in man. Lancent 1981；2：272.
3. Marmarou A, et al. A simple gravimetric technique for measurement of cerebral edema. J Neurosurg 1978；49：530.
4. 祝元祥，等.β-内啡肽的抗血清制备及其放射免疫测定.第二军医大学学报 1986；7：332.
5. Jabaily J, et al. Naloxone administration to patients with acute stroke. Stroke 1984；15：36.
(1988年8月9日收稿 1989年11月2日修回), 百拇医药
单位：白 波(济宁医学院生理教研室)；林葆城 宋朝佑 王成海 朱鹤年(上海第二军医大学神经生物教研室 200433)
关键词：
中华医学杂志900318
近年来，采用纳洛酮对临床脑缺血病人进行试验性治疗，取得了一定疗效。交推测内源性阿片肽可能参与脑缺血的病理生理过程[1，2]。但不同家族内源性阿片肽在脑缺血的确切作用并不清楚。本工作采用沙土鼠急性脑缺血动物模型，观察了β-内啡肽(β-endorphin,β-EP)在缺血性脑水肿中的作用，以探讨纳洛酮治疗脑缺血的作用机理。
一、材料和方法
蒙古种沙土鼠217只体重50～70g，雌雄不拘。戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔麻醉后，分别分离并结扎双侧颈总动脉，假手术及麻醉对照组不结扎动脉。实验分为以下几个部分：(1)结扎动物双侧颈总动脉后15、30、60和120分分别断头取脑，取相同体积(2mm3)的双侧枕部皮层组织各2块，利用Marmarou等[3]方法测定其比重，判定组织水肿情况。(2)应用β-EP放射免疫测定方法[4]测定脑缺血不同时间，皮层和桥脑-延髓部分的β-EP免疫活性物质(ir-β-EP)的含量。(3)实验组动物侧脑室中分别缓慢注射纳洛酮5～40μg/μl，对照组注射生理盐水4μl，注射后2～5分钟结扎双侧颈总动脉，结扎后60分钟测定皮层比重。(4)实验组动物侧脑室内分别注射1：2、1：1、2：1和3：1抗β-EP血清4μl(效价1：16000)，对照组注射正常兔血清4μl，注射后60分结扎颈总动脉，结扎后60分钟测定皮层比重。(5)实验组动物侧脑定注射β-EP 4μg/4μl，对照组注射生理盐水4μl，注射后2～5分钟结扎颈总动脉，结扎后30分钟测定皮层z比重。
, 百拇医药
二、实验结果
1. 结扎双侧颈总动脉后15分钟，皮层比重已明显减小(sp.gr=1.0481)，此后随着缺血时间的处长，皮层比重进行性下降，即水肿加重。结扎后60～120分钟，皮层比重稳定在较低水平(1.0454左右)。相当于脑组织含水量增加4%左右。在一定时间内，脑缺血时间和皮层水肿(比重)的程度明显相关(Υ=0.871，P<0.01)。
2. 皮层ir-β-EP含量，除结扎动脉后30分钟下降34%外，结扎15、60和120分分别较对照组升高27.3%(P<0.01)39.6%和30.8%(P<0.05)。脑缺血不同时间皮层ir-β-EP含量的变化和皮层水肿的变化趋势基本一致，具有显著的相关特性(Υ=0.8784，P<0.01)。结扎颈总动脉后，桥延部ir-β-EP含量均没有明显变化(附表)。
附表 脑缺血时脑区β-内啡肽含量的动态变化(
± pg/mg), 百拇医药
对照
15min
30min
60min
120min
大脑皮层
对照组
13.75±0.53
16.0±1.4
20.6±2.1
15.4±1.2
24.8±2.1
, 百拇医药 实验组
22.0±1.3**
13.6±1.1**
25.5±3.3*
35.9±4.4*
桥脑-延髓部
对照组
10.82±0.88
11.0±0.8
13.6±1.2
9.7±1.2
17.2±1.6
, 百拇医药
实验组
10.0±1.1
10.6±0.8
11.7±0.8
15.0±1.0
3. 侧脑室注射纳洛酮20μg/4μl，脑缺血60分钟后的皮层比重较对照组明显增加，即水肿减轻(P<0.01)。纳洛酮剂量在5～40μg时表现出明显的剂量-效应关系(附图)。
附图 侧脑室注射纳洛酮对脑缺血60分钟皮层比重的影响(**P<0.01)
4. 侧脑室注射不同剂量的抗β-EP血清，使缺血60分的皮层比重有不同程度增加，并显示明显的量-效关系，即表现出类似纳洛酮减轻或缓解缺血性脑水肿的作用。当注射剂量为2：1/4μl时，皮层比重从对照的1.0446±3.24-4增加到1.0470±3.82-4(P<0.01)。
, 百拇医药
5. 侧脑室注射β-EP 4μg/μl后，脑缺血30分后的皮层比重(1.0459±5.59-4)较注射生理盐水的对照组(1.0480±3.77-4)明显降低(P<0.05)，即水肿明显加重。生理盐水对照组和单纯缺血组相比，皮层比重没有明显变化。
三、讨论
本实验应用Marmarou等[3]溴代苯-煤油密度梯度法定量测定急性脑缺血后皮层水肿情况，表明在一定时间内，皮层水肿随着脑缺血时间的延长而进行性加重。由于沙土鼠脑动脉独特的解剖学特征，结扎动脉比侧颈总动脉后，大脑两半球发生完全性脑缺血，而脑干和小脑没有明显缺血现象。本实验表明，明显缺血的大脑皮层β-EP含量显著升高，没有明显缺血现象的桥延部，β-EP含量没有变化。皮层β-EP含量和相应时间皮层水肿程度相关。提示了β-EP在缺血性脑水肿中的潜在作用。测定脑或CSF中β-EP含量的变化，可以反映脑水肿情况。对于纳洛酮治疗脑缺血的作用尚存在争议[5]。本实验结果表明，侧脑室注射纳洛酮或抗β-EP血清，均可使脑缺血后的皮层水肿减轻，而β-EP显著加重缺血60分钟后的皮层水肿。提示β-EP可能参与了缺血性脑水肿的病理生理过程。阻断μ受体或消除体内β-EP的病理作用可能是纳洛酮治疗脑缺血的作用机制之一。
, 百拇医药
参考文献
1. Faden AI. Neuropeptides and stroke: cusrrent status and potential application. Stroke 1983；14：169.
2. Baskin DS, et al. Naloxone reversal of ischemia neurologic defictis in man. Lancent 1981；2：272.
3. Marmarou A, et al. A simple gravimetric technique for measurement of cerebral edema. J Neurosurg 1978；49：530.
4. 祝元祥，等.β-内啡肽的抗血清制备及其放射免疫测定.第二军医大学学报 1986；7：332.
5. Jabaily J, et al. Naloxone administration to patients with acute stroke. Stroke 1984；15：36.
(1988年8月9日收稿 1989年11月2日修回), 百拇医药