内毒素对体外碱性成纤维细胞生长因子mRNA转录表达的影响
作者：刘国建 王正国
单位：第三军医大学野战外科研究所*
关键词：
中华医学杂志920114 血管内皮细胞合成的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)通过自分泌或旁分泌的方式对于维持血管内皮细胞自身的生长起着重要作用[1]。本实验研究内毒素致肺血管内皮细胞损伤手bFGF mRNA转录表达的变化，从基因表达的角度探讨内毒素对肺对血管内皮细胞的扣伤机制。
一、材料与方法
1.主要材料：α-32P-dATP(中国原子能研究院)，大肠杆田径内毒至少O55B5(北京生物制品所)。bFGF-cDNA探针(美国Abraham博士赠送)经扩增制备后，用α-32P标记，放射比活为102cpm/µg cDNA。
, 百拇医药
2.实验方法：无菌分离、培养小牛肺动脉血管内皮细胞。取传代细胞按104细胞/cm2密度接种培养24小时后分为正常组和内毒素损伤组进行实验。内毒素损伤组：内毒素(0.4µg/ml)作用4小时后去除内毒素，再分为4个小组；(1)不加任何处理组；(2)却除内毒素4小时后加放线菌素D组；(3)去除内毒素4小时后加放线菌素D组；(4)单加放线菌酮组。惧各组不同培养时间(去除内毒素后即刻24小时)的细胞做总RNA分离、bFGF mRNA斑点杂交和Northern印迹杂交。正常组除不加内毒素外，所有处理同内毒素组。此外，取部分细胞进行不同培养密度以及不同剂量内毒素损伤后bFGF mRNA转录表达，并同时测定培养基中脱落细胞数量、乳酸脱氢酶(LDH)和6-酮-前列腺素F1αα(6-k-PGF1αα)。
二、结果
1.正常内皮细胞bFGF mRNA转录表达：随细胞生长密度的增加，bFGF mRNA的表达逐渐减少。放线菌素D作用30分钟后完全阻断bFGF mRNA表达。放线菌酮预孵育4小时对bFGF mRNA半衰期没有影响。
, 百拇医药
2.内毒素对内皮细胞bFGF mRNA表达的影响：不同剂量(0.1~0.4µg/ml)内毒素对bFGF mRNA表达均有抑制作用。随着内毒素量的增加，bFGF mRNA表达减少。去除内毒素后，表达可以恢复并再现bFGF mRNA半衰期延长。放线菌酮对bFGF mRNA半衰期没有明显影响。bFGFmRNA片段大小与正常时相同，仍为7.0kb和3.7kb二种类型。
3.bFGF mRNA的变化与其它变化的比较：内毒素0.4µg/ml作用4小时后bFGF mRNA已不能检出，脱落细胞明显啬，但LDH和6-k-PGF1αα在损伤脑筋2小时后才明显增加。
三、讨论
已有研究表明体外培养的牛毛细血管和主动脉内皮细胞均有bFGF mRNA表达[3]。本实验中观察到牛肺动脉内皮细胞亦有bFGF mRNA表达。内毒素可明显抑制bFGF mRNA的表达，表明内毒素损伤内皮细胞后细胞外bFGF含量的增加[4]与bFGF的合成增加无关。bFGF mRNA表达的抑制可能是内毒素致内皮细胞损伤的机制之一。实验结果提示内皮细胞在损伤因素作用时，bFGF合成过程受抑制当年除损伤因素后bFGF合成过程恢复，并有较长半衰期的bFGF mRNA表达，这有助于损伤后的再生修复过程。
, 百拇医药
参考文献
1.Gospodarowica D, et al. Structural characterization and biological function of fibroblast growth factor. Endocr Rev 1987; 8:95.
2.Maniatis T, et al. Molecular Cloning A Laboratory Manual 2nd ed New Youk: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1987.
3.Moscatelli D, et al. Both normal and tumor cells. produce basic fibroblast growth factor J Cell Physiol 1986; 129:273.
4.Gajdusek CM. carbon S. Injury-induced release of basic fibroblast growth factor from bovin aortic endothelium J Cell Physiol 1989; 139:570.
(1990年1月15日收稿 1991年8月10日修回), http://www.100md.com
单位：第三军医大学野战外科研究所*
关键词：
中华医学杂志920114 血管内皮细胞合成的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)通过自分泌或旁分泌的方式对于维持血管内皮细胞自身的生长起着重要作用[1]。本实验研究内毒素致肺血管内皮细胞损伤手bFGF mRNA转录表达的变化，从基因表达的角度探讨内毒素对肺对血管内皮细胞的扣伤机制。
一、材料与方法
1.主要材料：α-32P-dATP(中国原子能研究院)，大肠杆田径内毒至少O55B5(北京生物制品所)。bFGF-cDNA探针(美国Abraham博士赠送)经扩增制备后，用α-32P标记，放射比活为102cpm/µg cDNA。
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2.实验方法：无菌分离、培养小牛肺动脉血管内皮细胞。取传代细胞按104细胞/cm2密度接种培养24小时后分为正常组和内毒素损伤组进行实验。内毒素损伤组：内毒素(0.4µg/ml)作用4小时后去除内毒素，再分为4个小组；(1)不加任何处理组；(2)却除内毒素4小时后加放线菌素D组；(3)去除内毒素4小时后加放线菌素D组；(4)单加放线菌酮组。惧各组不同培养时间(去除内毒素后即刻24小时)的细胞做总RNA分离、bFGF mRNA斑点杂交和Northern印迹杂交。正常组除不加内毒素外，所有处理同内毒素组。此外，取部分细胞进行不同培养密度以及不同剂量内毒素损伤后bFGF mRNA转录表达，并同时测定培养基中脱落细胞数量、乳酸脱氢酶(LDH)和6-酮-前列腺素F1αα(6-k-PGF1αα)。
二、结果
1.正常内皮细胞bFGF mRNA转录表达：随细胞生长密度的增加，bFGF mRNA的表达逐渐减少。放线菌素D作用30分钟后完全阻断bFGF mRNA表达。放线菌酮预孵育4小时对bFGF mRNA半衰期没有影响。
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2.内毒素对内皮细胞bFGF mRNA表达的影响：不同剂量(0.1~0.4µg/ml)内毒素对bFGF mRNA表达均有抑制作用。随着内毒素量的增加，bFGF mRNA表达减少。去除内毒素后，表达可以恢复并再现bFGF mRNA半衰期延长。放线菌酮对bFGF mRNA半衰期没有明显影响。bFGFmRNA片段大小与正常时相同，仍为7.0kb和3.7kb二种类型。
3.bFGF mRNA的变化与其它变化的比较：内毒素0.4µg/ml作用4小时后bFGF mRNA已不能检出，脱落细胞明显啬，但LDH和6-k-PGF1αα在损伤脑筋2小时后才明显增加。
三、讨论
已有研究表明体外培养的牛毛细血管和主动脉内皮细胞均有bFGF mRNA表达[3]。本实验中观察到牛肺动脉内皮细胞亦有bFGF mRNA表达。内毒素可明显抑制bFGF mRNA的表达，表明内毒素损伤内皮细胞后细胞外bFGF含量的增加[4]与bFGF的合成增加无关。bFGF mRNA表达的抑制可能是内毒素致内皮细胞损伤的机制之一。实验结果提示内皮细胞在损伤因素作用时，bFGF合成过程受抑制当年除损伤因素后bFGF合成过程恢复，并有较长半衰期的bFGF mRNA表达，这有助于损伤后的再生修复过程。
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参考文献
1.Gospodarowica D, et al. Structural characterization and biological function of fibroblast growth factor. Endocr Rev 1987; 8:95.
2.Maniatis T, et al. Molecular Cloning A Laboratory Manual 2nd ed New Youk: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1987.
3.Moscatelli D, et al. Both normal and tumor cells. produce basic fibroblast growth factor J Cell Physiol 1986; 129:273.
4.Gajdusek CM. carbon S. Injury-induced release of basic fibroblast growth factor from bovin aortic endothelium J Cell Physiol 1989; 139:570.
(1990年1月15日收稿 1991年8月10日修回), http://www.100md.com