巯甲丙脯酸对培养心肌细胞脂质过氧化的拮抗作用*
作者：邢德智 张钧华 汪丽蕙 吴建明 唐朝枢 汤健
单位：北京医科大学第一医院心内科△ 邢德智 张钧华 汪丽蕙；北京医科大学心肺内分泌研究室 吴建明 唐朝枢 汤健
关键词：
中华医学杂志920214 近年来,大量实验资料提示巯甲丙脯酸除对血管紧张素转换酶具有抑制作用外,还具有拮抗脂质过氧化(LPO),增强内皮细胞舒张因子(EDRF)生物效应的作用.本实验旨在观察巯甲丙脯酸对自由基引起细胞损伤的影响,以探讨其作用机制,为临床治疗提供理论依据。
一.材料和方法
按James等方法[Cir Res .1985;56:72]培养乳鼠心肌细胞,培养液为1640,将第4代细胞悬液分置于预先硅化的试管内,按下述分组加入不同试剂,总反应体积为1ml,细胞终浓度5×10-5个/ml,在37℃恒温振荡水浴上孵育.对照组仅加入1640培养液.巯甲丙脯酸组:加入巯甲丙脯酸终浓度为160umol/L.氧化组:加入自由基发生系统(FRGS),为氯化亚铁和抗坏血酸(终浓度分别为0.1和0.5mmol/L).氧化+巯甲丙脯酸组:分为4个亚组,各亚组除加入上述FRGS之外,分别加入20,40,,80和160umol/L.巯甲丙脯酸.测定孵育15,30,45和60分时细胞存活率(1%台盼蓝染料排斥试验),乳酸脱氢酶(LDT)漏出率[培养液内LDH活性/(细胞LDH活性+培养液LDH活性)×100%]和细胞LPO终产物丙二醛(MDA)含量.蛋白定量用考马斯亮蓝(Comma ssie Brillant Blue)法测量.重复4次实验,每次作双平行管,结果用均值±标准差(
s)表示,t检验作统计学处理。
, 百拇医药
巯甲丙脯酸,硫代巴比妥酸和1640培养液为美国Sigma Ca产品,其它试剂为市售分析纯商品。
二.结果
巯甲丙脯酸组心肌细胞孵育1小时,所观察的指标与对照组相比无明显差异(附表)。
附表 巯甲丙脯酸160umol/L对 FRGS细胞损伤的影响(s)
组别
细胞存活率(%)
乳酸脱氢酶
漏出率(%)
丙二醛含量
, 百拇医药
(nmol/mg蛋白)
对照组
96±2.5
7±1.4
1.14±0.20
巯甲丙脯酸组
96±1.8
7±1.7
1.39±0.36
氧化组
15＇
62±6.0
, http://www.100md.com 21±2.4
2.21±0.57
30＇
42±3.2
31±3.5
2.5±0.27
45＇
29±2.6
40±8.6
3.18±0.69
60＇
22±3.8
44±8.5
, http://www.100md.com
3.68±0.92
氧化+巯甲丙脯酸组
15＇
85±4.6**
13±2.2**
1.42±0.32
30＇
75±5.0△
23±2.6*
1.91±0.23*
45＇
59±5.4△
, http://www.100md.com
19±3.1**
2.03±0.43*
60＇
56±7.7△
23±3.5**
2.28±0.24*
注:n=4,与氧化组相比 *P<0.05 **P<0.01 △P<0.001
氧化组心肌细胞孵育后,细胞存活率随时间延长进行性降低,LDH漏出率及丙二醛含量进行性增加(附表).膜LPO与细胞损伤密切相关.本实验心肌丙二醛含量与细胞存活率呈负相关(r=-0.943,P<0.001),而与细胞LDH漏出率呈正相关(r=0.973,P<0.001),巯甲丙脯酸明显抑制FRGS的细胞损伤作用。氧化+巯组(160umol/L)孵育1小时后,其丙二醛含量较氧化组低能33.9%(P<0.05,氧化+巯组∑氧化组∑
/氧化组∑
100%),LDH 漏出率低43.1%(P<0.05),而细胞存活率高中77.5%(P<0.05)。巯甲丙脯酸抑制丙二醛产生呈剂量依赖关系(附图)。
, 百拇医药
巯甲丙脯酸(umol/L)
附表 不同浓度的巯甲丙脯酸对MDA产生的影响
三.讨论
本实验结果证明,巯甲丙脯酸具有清除自由基。拮抗LPO的细胞保护作用。这种作用可能与其含有大量巯基(-SH)有关.Weetlin 和Mullane 曾比较含-SH的血管紧张素转换酶抑制剂与不含-SH的血管紧张素转换酶抑制剂对
2生成系统(嘌呤-黄嘌呤氧化酶)对白细胞体外产生2的影响,发现只有含-SH的血管紧张素转换酶抑制剂才有清除自由基的作用[Circulation 1988;77(SuppI 1):30]。
氧自由基损伤在组织缺血.缺氧及缺血再灌注损伤等许多病理过程中都具有重要意义.本工作在培养的心肌细胞上证实了巯甲丙脯酸的抗LPO作用,提示巯甲丙脯酸作为自由基清除剂,在防治O2损伤的过程中,对细胞具有保护作用。
*国家自然科学基金资助课题
△邮政编码 100034, 百拇医药
单位：北京医科大学第一医院心内科△ 邢德智 张钧华 汪丽蕙；北京医科大学心肺内分泌研究室 吴建明 唐朝枢 汤健
关键词：
中华医学杂志920214 近年来,大量实验资料提示巯甲丙脯酸除对血管紧张素转换酶具有抑制作用外,还具有拮抗脂质过氧化(LPO),增强内皮细胞舒张因子(EDRF)生物效应的作用.本实验旨在观察巯甲丙脯酸对自由基引起细胞损伤的影响,以探讨其作用机制,为临床治疗提供理论依据。
一.材料和方法
按James等方法[Cir Res .1985;56:72]培养乳鼠心肌细胞,培养液为1640,将第4代细胞悬液分置于预先硅化的试管内,按下述分组加入不同试剂,总反应体积为1ml,细胞终浓度5×10-5个/ml,在37℃恒温振荡水浴上孵育.对照组仅加入1640培养液.巯甲丙脯酸组:加入巯甲丙脯酸终浓度为160umol/L.氧化组:加入自由基发生系统(FRGS),为氯化亚铁和抗坏血酸(终浓度分别为0.1和0.5mmol/L).氧化+巯甲丙脯酸组:分为4个亚组,各亚组除加入上述FRGS之外,分别加入20,40,,80和160umol/L.巯甲丙脯酸.测定孵育15,30,45和60分时细胞存活率(1%台盼蓝染料排斥试验),乳酸脱氢酶(LDT)漏出率[培养液内LDH活性/(细胞LDH活性+培养液LDH活性)×100%]和细胞LPO终产物丙二醛(MDA)含量.蛋白定量用考马斯亮蓝(Comma ssie Brillant Blue)法测量.重复4次实验,每次作双平行管,结果用均值±标准差(
s)表示,t检验作统计学处理。, 百拇医药
巯甲丙脯酸,硫代巴比妥酸和1640培养液为美国Sigma Ca产品,其它试剂为市售分析纯商品。
二.结果
巯甲丙脯酸组心肌细胞孵育1小时,所观察的指标与对照组相比无明显差异(附表)。
附表 巯甲丙脯酸160umol/L对 FRGS细胞损伤的影响(
s)组别
细胞存活率(%)
乳酸脱氢酶
漏出率(%)
丙二醛含量
, 百拇医药
(nmol/mg蛋白)
对照组
96±2.5
7±1.4
1.14±0.20
巯甲丙脯酸组
96±1.8
7±1.7
1.39±0.36
氧化组
15＇
62±6.0
, http://www.100md.com 21±2.4
2.21±0.57
30＇
42±3.2
31±3.5
2.5±0.27
45＇
29±2.6
40±8.6
3.18±0.69
60＇
22±3.8
44±8.5
, http://www.100md.com
3.68±0.92
氧化+巯甲丙脯酸组
15＇
85±4.6**
13±2.2**
1.42±0.32
30＇
75±5.0△
23±2.6*
1.91±0.23*
45＇
59±5.4△
, http://www.100md.com
19±3.1**
2.03±0.43*
60＇
56±7.7△
23±3.5**
2.28±0.24*
注:n=4,与氧化组相比 *P<0.05 **P<0.01 △P<0.001
氧化组心肌细胞孵育后,细胞存活率随时间延长进行性降低,LDH漏出率及丙二醛含量进行性增加(附表).膜LPO与细胞损伤密切相关.本实验心肌丙二醛含量与细胞存活率呈负相关(r=-0.943,P<0.001),而与细胞LDH漏出率呈正相关(r=0.973,P<0.001),巯甲丙脯酸明显抑制FRGS的细胞损伤作用。氧化+巯组(160umol/L)孵育1小时后,其丙二醛含量较氧化组低能33.9%(P<0.05,氧化+巯组∑
氧化组∑/氧化组∑100%),LDH 漏出率低43.1%(P<0.05),而细胞存活率高中77.5%(P<0.05)。巯甲丙脯酸抑制丙二醛产生呈剂量依赖关系(附图)。, 百拇医药
巯甲丙脯酸(umol/L)
附表 不同浓度的巯甲丙脯酸对MDA产生的影响
三.讨论
本实验结果证明,巯甲丙脯酸具有清除自由基。拮抗LPO的细胞保护作用。这种作用可能与其含有大量巯基(-SH)有关.Weetlin 和Mullane 曾比较含-SH的血管紧张素转换酶抑制剂与不含-SH的血管紧张素转换酶抑制剂对
2生成系统(嘌呤-黄嘌呤氧化酶)对白细胞体外产生2的影响,发现只有含-SH的血管紧张素转换酶抑制剂才有清除自由基的作用[Circulation 1988;77(SuppI 1):30]。氧自由基损伤在组织缺血.缺氧及缺血再灌注损伤等许多病理过程中都具有重要意义.本工作在培养的心肌细胞上证实了巯甲丙脯酸的抗LPO作用,提示巯甲丙脯酸作为自由基清除剂,在防治O2损伤的过程中,对细胞具有保护作用。
*国家自然科学基金资助课题
△邮政编码 100034, 百拇医药