山莨菪碱对大肠杆菌脑膜炎兔脑脊液的影响
作者：刘一心 虞佩兰 李芳 舒明星 余平 周永刚
单位：410008长沙市，湖南医科大学附属湘雅医院儿科(刘一心、虞佩兰、周永刚)，湖南医科大学附设卫校(李芳)，微生物教研室(舒明星、余平)
关键词：山莨菪碱；大肠杆菌；脑膜炎
中华医学杂志930511 摘要 将具有K1抗原大肠杆菌接种于中国家兔小脑延髓池后24与27小时，兔脑脊液中细菌数、内毒素、丙二醛、乳酸和乳酸脱氢酶浓度均明显增高。在单用氨苄青霉素治疗3小时后，除细菌数减少，乳酸脱氢酶升高外，余值无明显变化。当同时加用山莨菪碱时，脑脊液内毒素从3.2±0.6降到2.1±0.9log10IU/ml，乳酸从8.6±2.0降到6.5±1.8mmol/L，丙二醛0.31±0.07明显低于菌液组0.59±0.25或单用氨苄组0.59±0.21nmol/ml，P均<0.01或0.05。提示在有效抗生素治疗的同时，加用山莨菪碱治疗大肠杆菌脑膜炎是有益的。
, 百拇医药
化脓性脑膜炎的病死率近30年来一直在20%左右，后遗症发生率也很高，尤其是新生儿更高。大肠杆菌是新生儿脑膜炎的常见病原菌。本研究旨在进一步了解大肠杆菌脑膜炎的脑损伤机制，探讨山莨菪碱的治疗作用与机制。
材料与方法
1.大肠杆菌脑膜炎模型：将冻干具有K1抗原大肠杆菌复活(菌种由北京卫生部药品生物制品检定所提供，菌号44607，血清型O7∶K1∶H-)，培养繁殖16～18小时，用无热原生理盐水配制成8×107细胞/ml。取健康白毛红眼中国家兔63只(雌雄不限，雌兔无孕，体重1.5～2.3kg)，以苯巴比妥钠30mg/kg耳缘静脉麻醉，俯卧位固定，去毛消毒枕颈部皮肤，用7号腰穿针穿刺小脑延髓池，取脑脊液(CSF)0.4ml，继之注入大肠杆菌生理盐水混悬液0.25ml。于接种后24与27小时，用同样方法分别取CSF各0.5ml待测。
, 百拇医药
2.动物分组：(1)生理盐水对照组14只(对照组)。(2)菌液注入组15只(菌液组)。(3)菌液注处24小时后，耳缘静脉推注氨苄青霉素100mg/kg，每小时1次，连用3次，共16只(氨苄组)。(4)菌液注入24小时后，氨苄青霉素剂量用法同(3)，另加山莨菪碱5mg/kg耳缘静脉推注，每30分钟1次，连用6次，共18只(氨+山组)。
3.脑脊液指标测定方法：细菌菌落形成单位数(CFU/ml)：取0.1mlCSF以无热原生理盐水稀释10倍，分别取0.1ml接种于2个普通琼脂培养平皿中，经37℃恒温培养16～20小时，统计计算菌落数CFU/ml。内毒素浓度用
珠溶解物凝胶反应法测定。丙二醛用硫代巴比妥酸反应荧光分析法测定〔1〕。乳酸与乳酸脱氢酶(LDH)用比色法测定。
4.统计学处理：测定数据以
±s表示，组内差别以配对t检验，两组间差别以t检验，多组间差别以方差分析处理。
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结 果
1.脑脊液菌落形成单位数与内毒素浓度的变化见表1。接种后27小时与24小时值比较，菌落形成单位数在氨苄组与氨+山组均明显减少，内毒素浓度仅在氨+山组下降，P均<0.01。
表1 脑脊液CFU与内毒素浓度的变化(+s) 组别
例数
接种24小时
接种27小时*
内毒素(log10CFU/ml)
脑脊(log10CFU/ml
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内毒素(log10CFU/ml)
脑脊(log10CFU/ml)
对照组
9
-
-
-
-
菌液组
9
3.4±0.5
3.9±1.0
3.3±0.5
, http://www.100md.com
4.1±0.8
氨苄组
9
2.3±1.6
3.3±1.1
2.4±1.0
1.2±1.6
氨+山组
11
3.2±0.6
4.0±0.9
2.1±0.9
2.5±1.5
, 百拇医药
*药物治疗组均为接种24小时后治疗3小时值
2.脑脊液乳酸及LDH浓度的变化见表2。由表2可见对照组注入生理盐水前后和各组接种菌液前的脑脊液乳酸及LDH浓度均明显低于各组感染后24及27小时的浓度(P<0.01或<0.001)。对照组内不同时间的乳酸及LDH浓度无明显变化。菌液组接种后27小时与氨苄组治疗3小时后，LDH浓度明显高于接种后24小时值，P<0.05与<0.01。氨+山组LDH浓度治疗3小时后值亦有增高趋势，但统计学分析无显著性差异，P>0.05；而乳酸浓度治疗后值则比治疗前明显降低，P<0.05。
表2 脑脊液乳酸及乳酸脱氢酶浓度的变化(+s) 组别
兔数
乳酸(mmol/L)
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乳酸脱氢酶(mmol/s)
接种前
接种24h
接种27h*
接种前
接种24h
接种27h
对照组
5
3.2±0.7
2.9±0.4
2.8±0.6
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136.7±95.0
205.0±121.7
256±111.7
菌液组
6
3.4±1.7
10.4±4.8
10.0±5.5
393.4±368.4
3404.0±2218.8
4367.5±2242.1
氨苄组
, 百拇医药
7
3.0±1.5
8.9±5.0
8.1±4.0
250.1±158.4
3750.8±1311.9
5052.7±1103.5
氨+山组
7
3.1±2.2
8.6±2.0
6.5±1.8
, 百拇医药
375.1±313.4
2888.9±1703.7
4367.5±2270.4
注:乳酸1mg/dl=0.001mmol/L；乳酸脱氢酶1IU=16.67nmol/s
*药物治疗组均为接种24小时后治疗3小时值
3.各组脑脊液丙二醛浓度(nmol/ml)比较：氨+山组(0.31±0.07)明显低于菌液组(0.59±0.25)和氨苄组(0.59±0.21)，P<0.01；但高于对照组(0.10±0.09)，P<0.05。
讨 论
近年来，国内外学者一方面在研究更新的有效抗生素来治疗化脓性脑膜炎，另一方面在研究探讨如何防治化脓性脑膜炎的脑损伤〔2〕，以降低其病死率与后遗症发生率。本研究探讨了在应用有效抗生素的同时加用山莨菪碱对于大肠杆菌脑膜炎兔脑脊液的影响，发现单用氨苄青霉素治疗大肠杆菌脑膜炎兔3小时，其脑脊液细胞数明显降低，而LDH明显升高，内毒素与乳酸浓度无明显变化，丙二醛浓度较菌液组亦无明显差异。当同时加用山莨菪碱治疗时，除脑脊液细菌数明显减少外，内毒素和乳酸浓度均明显下降。其机理可能主要与山莨菪碱的微血管调节作用有关〔3〕。由于解除了血管痉挛，改善了微循环，一方面有利于乳酸和内毒素的清除；另一方面增加了组织的供血供氧，使血糖进入脑内含量增加，以及葡萄糖有氧代谢途径的恢复，无氧酵解减少，乳酸产生减少，以致脑脊液乳酸浓度下降。另外，还可能与山莨菪碱能够在细胞膜水平上，抑制宿主细胞与内毒素相结合〔4〕，还能够增强巨噬细胞吞噬功能，促进巨噬细胞系统清除内毒素等有关〔3〕。
, 百拇医药
同时还发现氨+山组脊液丙二醛浓度明显低于菌液组与氨苄组，说明山莨菪碱有降低大肠杆菌脑膜炎兔脑脊液丙二醛浓度的能力。这可能与山莨菪碱有稳定细胞膜的作用〔5〕，抑制花生四烯酸代谢产物的生成〔6〕，钙拮抗样作用〔7〕，以及改善微循环，减轻组织缺血缺氧〔3〕，以致减少氧自由基的来源，阻断细胞膜等脂质过氧化反应有关〔8，9〕。以上结果提示：在有效抗生素应用的同时加用山莨菪碱，是大肠杆菌脑膜炎有益的辅助治疗之一，其机制还有待进一步探讨。
参考文献
1 周翔，辛中国，孙国光，等.血清过氧化脂质的测定.白求恩医科大学学报，1985，11：358.
2 Saez-Llorens X,Ramilo O,Mustafa MM,et al.Molecucepts and therapeutic implications.J Pediatr,1990,116:671.
, http://www.100md.com
3 杨国栋，吴蠡荪，姚新民，主编.微循环障碍与莨菪类药的临床应用.北京：人民卫生出版社，1989：167-181.
4 唐朝枢，齐鸣，李兆萍，等.山莨菪碱对内毒素与大鼠离体心脏及肝细胞结合的抑制作用.中国病理生理杂志，1989，5：70.
5 苏静怡.山莨菪碱抗休克作用机制的研究进展.生理科学进展，1985，16：317.
6 Xiao DM,Wang XL.Chen HC.Inhibitory effects of anisodamine on endotoxin-induced prostaglandin production by cell in culture.Chin Med J,1988,101:871.
7 杨晓红，唐朝枢，苏静怡.山莨菪碱保护缺血小肠的机理探讨.中国病理生理杂志，1988，4：134.
8 Lucchesi BR,Mickelson JK,Homeister JW,et al.Interaction of the formed elements of blood with the coronary vasculature in vivo.Fed Proc,1987,46:63.
9 土屋雅春.微小循环障害における细胞间相互反应，医学のあゆみ，1987，140：717。
(收稿：992-07-31 修回：1992-02-20), http://www.100md.com
单位：410008长沙市，湖南医科大学附属湘雅医院儿科(刘一心、虞佩兰、周永刚)，湖南医科大学附设卫校(李芳)，微生物教研室(舒明星、余平)
关键词：山莨菪碱；大肠杆菌；脑膜炎
中华医学杂志930511 摘要 将具有K1抗原大肠杆菌接种于中国家兔小脑延髓池后24与27小时，兔脑脊液中细菌数、内毒素、丙二醛、乳酸和乳酸脱氢酶浓度均明显增高。在单用氨苄青霉素治疗3小时后，除细菌数减少，乳酸脱氢酶升高外，余值无明显变化。当同时加用山莨菪碱时，脑脊液内毒素从3.2±0.6降到2.1±0.9log10IU/ml，乳酸从8.6±2.0降到6.5±1.8mmol/L，丙二醛0.31±0.07明显低于菌液组0.59±0.25或单用氨苄组0.59±0.21nmol/ml，P均<0.01或0.05。提示在有效抗生素治疗的同时，加用山莨菪碱治疗大肠杆菌脑膜炎是有益的。
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化脓性脑膜炎的病死率近30年来一直在20%左右，后遗症发生率也很高，尤其是新生儿更高。大肠杆菌是新生儿脑膜炎的常见病原菌。本研究旨在进一步了解大肠杆菌脑膜炎的脑损伤机制，探讨山莨菪碱的治疗作用与机制。
材料与方法
1.大肠杆菌脑膜炎模型：将冻干具有K1抗原大肠杆菌复活(菌种由北京卫生部药品生物制品检定所提供，菌号44607，血清型O7∶K1∶H-)，培养繁殖16～18小时，用无热原生理盐水配制成8×107细胞/ml。取健康白毛红眼中国家兔63只(雌雄不限，雌兔无孕，体重1.5～2.3kg)，以苯巴比妥钠30mg/kg耳缘静脉麻醉，俯卧位固定，去毛消毒枕颈部皮肤，用7号腰穿针穿刺小脑延髓池，取脑脊液(CSF)0.4ml，继之注入大肠杆菌生理盐水混悬液0.25ml。于接种后24与27小时，用同样方法分别取CSF各0.5ml待测。
, 百拇医药
2.动物分组：(1)生理盐水对照组14只(对照组)。(2)菌液注入组15只(菌液组)。(3)菌液注处24小时后，耳缘静脉推注氨苄青霉素100mg/kg，每小时1次，连用3次，共16只(氨苄组)。(4)菌液注入24小时后，氨苄青霉素剂量用法同(3)，另加山莨菪碱5mg/kg耳缘静脉推注，每30分钟1次，连用6次，共18只(氨+山组)。
3.脑脊液指标测定方法：细菌菌落形成单位数(CFU/ml)：取0.1mlCSF以无热原生理盐水稀释10倍，分别取0.1ml接种于2个普通琼脂培养平皿中，经37℃恒温培养16～20小时，统计计算菌落数CFU/ml。内毒素浓度用
珠溶解物凝胶反应法测定。丙二醛用硫代巴比妥酸反应荧光分析法测定〔1〕。乳酸与乳酸脱氢酶(LDH)用比色法测定。4.统计学处理：测定数据以
±s表示，组内差别以配对t检验，两组间差别以t检验，多组间差别以方差分析处理。, http://www.100md.com
结 果
1.脑脊液菌落形成单位数与内毒素浓度的变化见表1。接种后27小时与24小时值比较，菌落形成单位数在氨苄组与氨+山组均明显减少，内毒素浓度仅在氨+山组下降，P均<0.01。
表1 脑脊液CFU与内毒素浓度的变化(
+s) 组别例数
接种24小时
接种27小时*
内毒素(log10CFU/ml)
脑脊(log10CFU/ml
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内毒素(log10CFU/ml)
脑脊(log10CFU/ml)
对照组
9
-
-
-
-
菌液组
9
3.4±0.5
3.9±1.0
3.3±0.5
, http://www.100md.com
4.1±0.8
氨苄组
9
2.3±1.6
3.3±1.1
2.4±1.0
1.2±1.6
氨+山组
11
3.2±0.6
4.0±0.9
2.1±0.9
2.5±1.5
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*药物治疗组均为接种24小时后治疗3小时值
2.脑脊液乳酸及LDH浓度的变化见表2。由表2可见对照组注入生理盐水前后和各组接种菌液前的脑脊液乳酸及LDH浓度均明显低于各组感染后24及27小时的浓度(P<0.01或<0.001)。对照组内不同时间的乳酸及LDH浓度无明显变化。菌液组接种后27小时与氨苄组治疗3小时后，LDH浓度明显高于接种后24小时值，P<0.05与<0.01。氨+山组LDH浓度治疗3小时后值亦有增高趋势，但统计学分析无显著性差异，P>0.05；而乳酸浓度治疗后值则比治疗前明显降低，P<0.05。
表2 脑脊液乳酸及乳酸脱氢酶浓度的变化(
+s) 组别兔数
乳酸(mmol/L)
, 百拇医药
乳酸脱氢酶(mmol/s)
接种前
接种24h
接种27h*
接种前
接种24h
接种27h
对照组
5
3.2±0.7
2.9±0.4
2.8±0.6
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136.7±95.0
205.0±121.7
256±111.7
菌液组
6
3.4±1.7
10.4±4.8
10.0±5.5
393.4±368.4
3404.0±2218.8
4367.5±2242.1
氨苄组
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7
3.0±1.5
8.9±5.0
8.1±4.0
250.1±158.4
3750.8±1311.9
5052.7±1103.5
氨+山组
7
3.1±2.2
8.6±2.0
6.5±1.8
, 百拇医药
375.1±313.4
2888.9±1703.7
4367.5±2270.4
注:乳酸1mg/dl=0.001mmol/L；乳酸脱氢酶1IU=16.67nmol/s
*药物治疗组均为接种24小时后治疗3小时值
3.各组脑脊液丙二醛浓度(nmol/ml)比较：氨+山组(0.31±0.07)明显低于菌液组(0.59±0.25)和氨苄组(0.59±0.21)，P<0.01；但高于对照组(0.10±0.09)，P<0.05。
讨 论
近年来，国内外学者一方面在研究更新的有效抗生素来治疗化脓性脑膜炎，另一方面在研究探讨如何防治化脓性脑膜炎的脑损伤〔2〕，以降低其病死率与后遗症发生率。本研究探讨了在应用有效抗生素的同时加用山莨菪碱对于大肠杆菌脑膜炎兔脑脊液的影响，发现单用氨苄青霉素治疗大肠杆菌脑膜炎兔3小时，其脑脊液细胞数明显降低，而LDH明显升高，内毒素与乳酸浓度无明显变化，丙二醛浓度较菌液组亦无明显差异。当同时加用山莨菪碱治疗时，除脑脊液细菌数明显减少外，内毒素和乳酸浓度均明显下降。其机理可能主要与山莨菪碱的微血管调节作用有关〔3〕。由于解除了血管痉挛，改善了微循环，一方面有利于乳酸和内毒素的清除；另一方面增加了组织的供血供氧，使血糖进入脑内含量增加，以及葡萄糖有氧代谢途径的恢复，无氧酵解减少，乳酸产生减少，以致脑脊液乳酸浓度下降。另外，还可能与山莨菪碱能够在细胞膜水平上，抑制宿主细胞与内毒素相结合〔4〕，还能够增强巨噬细胞吞噬功能，促进巨噬细胞系统清除内毒素等有关〔3〕。
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同时还发现氨+山组脊液丙二醛浓度明显低于菌液组与氨苄组，说明山莨菪碱有降低大肠杆菌脑膜炎兔脑脊液丙二醛浓度的能力。这可能与山莨菪碱有稳定细胞膜的作用〔5〕，抑制花生四烯酸代谢产物的生成〔6〕，钙拮抗样作用〔7〕，以及改善微循环，减轻组织缺血缺氧〔3〕，以致减少氧自由基的来源，阻断细胞膜等脂质过氧化反应有关〔8，9〕。以上结果提示：在有效抗生素应用的同时加用山莨菪碱，是大肠杆菌脑膜炎有益的辅助治疗之一，其机制还有待进一步探讨。
参考文献
1 周翔，辛中国，孙国光，等.血清过氧化脂质的测定.白求恩医科大学学报，1985，11：358.
2 Saez-Llorens X,Ramilo O,Mustafa MM,et al.Molecucepts and therapeutic implications.J Pediatr,1990,116:671.
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3 杨国栋，吴蠡荪，姚新民，主编.微循环障碍与莨菪类药的临床应用.北京：人民卫生出版社，1989：167-181.
4 唐朝枢，齐鸣，李兆萍，等.山莨菪碱对内毒素与大鼠离体心脏及肝细胞结合的抑制作用.中国病理生理杂志，1989，5：70.
5 苏静怡.山莨菪碱抗休克作用机制的研究进展.生理科学进展，1985，16：317.
6 Xiao DM,Wang XL.Chen HC.Inhibitory effects of anisodamine on endotoxin-induced prostaglandin production by cell in culture.Chin Med J,1988,101:871.
7 杨晓红，唐朝枢，苏静怡.山莨菪碱保护缺血小肠的机理探讨.中国病理生理杂志，1988，4：134.
8 Lucchesi BR,Mickelson JK,Homeister JW,et al.Interaction of the formed elements of blood with the coronary vasculature in vivo.Fed Proc,1987,46:63.
9 土屋雅春.微小循环障害における细胞间相互反应，医学のあゆみ，1987，140：717。
(收稿：992-07-31 修回：1992-02-20), http://www.100md.com