抗肌萎缩蛋白基因5′及3′区域CA重复序列多态性分析及其在基因诊断中的应用
作者：许顺滨 黄尚志 卢珊 罗会元
单位：100005北京中国医学科学院基础医学研究所医学遗传室
关键词：
中华医学杂志930514 进行性假肥大型肌营养不良症(DMD/BMD)是同一位点的不同等位基因决定的X连锁的隐性遗传病，发病率高达1/3 500活产男婴。约60%的患者是由于基因缺失造成的，目前应用外显子多重引物PCR的方法可以对98%以上的缺失型病例进行快速灵敏的诊断。然而对于非缺失型家系尚缺乏高效简便的基因诊断的方法。应用限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)单体型连锁分析仍然是携带者及其产前诊断的基本手段。由于RFLP连锁分析程序繁琐，而且目前采用的基因两端的RFLP位点与抗肌萎缩蛋白基因本身的遗传学距离大，多态性信息量较低；再者RFLP需要的DNA量大，难以高效快速地进行携带者的检出及其产前诊断。
我们应用两对寡核苷酸引物，通过PCR方法分别扩增抗肌萎缩蛋白基因5′脑组织特异性启动子附近及3′非翻译区的两个CA重复序列，检测这两个位点在中国人中的多态性，并用于对两个DMD家系的单体型分析，旨在建立更为有效便捷的非缺失型家系中的产前诊断及携带者的检出方法。
具体方法：首先在适宜的条件下，应用两对寡核苷酸引物，采取α-32dCTP掺入的PCR方法分别扩增这两个位点的CA重复序列；扩增产物在6%的聚丙烯酰胺测序胶电泳4小时；电泳后的胶置于-70℃放射自显影24～48小时；最后读片，进行多态性及单体型分析。采取绒毛DNA进行的中国人群体多态性分析表明：5′CA重复序列位点具有6种不同的等位片段：A1～A6，频率为0.033～0.433，多态性信息含量(PIC)0.750；3′CA重复序列位点具有两种长度的等位片段：B1、B2，频率分别为0.75、0.25，PCI0.375。
结果表明：我们检测的抗肌萎缩蛋白基因两端的两个CA重复序列在中国人中具有长度多态性，信息量较高，尤其是5′端的CA重复序列；而且可有效地应用于DMD家系的基因诊断。我们建立的Amp-FLP的方法灵敏快速，对建立完善的非缺失型DMD/BMD家系的基因诊断的方法有一定意义。
(收稿：1992-10-22 修回：1993-01-28), http://www.100md.com
单位：100005北京中国医学科学院基础医学研究所医学遗传室
关键词：
中华医学杂志930514 进行性假肥大型肌营养不良症(DMD/BMD)是同一位点的不同等位基因决定的X连锁的隐性遗传病，发病率高达1/3 500活产男婴。约60%的患者是由于基因缺失造成的，目前应用外显子多重引物PCR的方法可以对98%以上的缺失型病例进行快速灵敏的诊断。然而对于非缺失型家系尚缺乏高效简便的基因诊断的方法。应用限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)单体型连锁分析仍然是携带者及其产前诊断的基本手段。由于RFLP连锁分析程序繁琐，而且目前采用的基因两端的RFLP位点与抗肌萎缩蛋白基因本身的遗传学距离大，多态性信息量较低；再者RFLP需要的DNA量大，难以高效快速地进行携带者的检出及其产前诊断。
我们应用两对寡核苷酸引物，通过PCR方法分别扩增抗肌萎缩蛋白基因5′脑组织特异性启动子附近及3′非翻译区的两个CA重复序列，检测这两个位点在中国人中的多态性，并用于对两个DMD家系的单体型分析，旨在建立更为有效便捷的非缺失型家系中的产前诊断及携带者的检出方法。
具体方法：首先在适宜的条件下，应用两对寡核苷酸引物，采取α-32dCTP掺入的PCR方法分别扩增这两个位点的CA重复序列；扩增产物在6%的聚丙烯酰胺测序胶电泳4小时；电泳后的胶置于-70℃放射自显影24～48小时；最后读片，进行多态性及单体型分析。采取绒毛DNA进行的中国人群体多态性分析表明：5′CA重复序列位点具有6种不同的等位片段：A1～A6，频率为0.033～0.433，多态性信息含量(PIC)0.750；3′CA重复序列位点具有两种长度的等位片段：B1、B2，频率分别为0.75、0.25，PCI0.375。
结果表明：我们检测的抗肌萎缩蛋白基因两端的两个CA重复序列在中国人中具有长度多态性，信息量较高，尤其是5′端的CA重复序列；而且可有效地应用于DMD家系的基因诊断。我们建立的Amp-FLP的方法灵敏快速，对建立完善的非缺失型DMD/BMD家系的基因诊断的方法有一定意义。
(收稿：1992-10-22 修回：1993-01-28), http://www.100md.com