原发性高血压家系人白细胞抗原研究
作者：于桂兰 金玉华 孙逸平 陈曼华 陈维昌 王新 孙超英 姚鉴棣
单位：110003 沈阳市第七人民医院检验科(于桂兰、陈曼华、姚鉴棣)，内科(金玉华、王新、孙超英)；中日友好医院临床医学研究所(孙逸平、陈维昌)
关键词：高血压；人白细胞抗原；单倍型
中华医学杂志940308
摘要 利用人白细胞抗原(HLA)单倍型分析法对沈阳地区10个高血压多发家系进行了研究，家系选择符合同胞对分析法和Lods分析法两种计算条件。计算显示，本病患病同胞共亨单倍型比例(2：1：0)为28.6%：52.4%：19.0%，P>0.9，符合随机分配模式；Lods分析为Q=0.40，Lods=0.046，Pr=1.112。研究结果不支持原发性高血压患者有易感基因与HLA连锁。
, 百拇医药 高血压往往有家族性，但机理不清。本病是否与人白细胞抗原(HLA)有关，文献报道不一[1～5]。因此，我们对沈阳地区10个高血压多发家系进行了研究，以探讨原发性高血压与HLA有无连锁关系。
对象与方法
一、对象
选取沈阳地区原发性高血压家系10个，选择标准要求每个家庭双亲中有1个(1家例外)及同胞中有2个以上发病并有无病同胞，以便同时进行同胞对照和Lods分析。其中同时符合同胞对和Lods分析的家庭7个。全部家系均由B超、心电图、X线胸透、血脂、血尿常规等临床指标确诊。共研究患者30例，健康亲属25名，个别已死亡病例的单倍型根据家系其他成员推测而得。
二、方法
1、标准血清：使用全国第四届HLA会议标准血清加部分北京儿科研究所提供的HLA-A、B、C位点血清。
, 百拇医药
2、家兔补体：分别取20只以上家兔心脏血或断头血，低温离心，混合血清，-80℃保存，可用半年。
3、国际标准微量淋巴细胞毒试验：取肝素抗凝血3ml，加1%甲基纤维素1ml和羰基铁粉5～10mg，混匀。置37℃水浴中20分钟后用磁铁将铁粉吸至管底，再置37℃水浴30～40分钟，取上清液。将相当于上清液二分之一时的1640液加入上清液中，混匀后加入装有分层液的试管内，以1700r/min离心20分钟。吸取淋巴细胞层，加Hank's液或1640液，摇匀，以800～1000r/min离心10分钟。弃上清液，留管底细胞，调淋巴细胞密度为2×106个/ml。
将细胞悬液1μl点于HLA-A、B、C位点标准血清板上，于灯光下观察细胞和血清是否混合，如未混合，可用细金属丝搅拌，于20～25℃室温下孵育30分钟。每孔加入补体5μl，保温1小时后加5%伊红Y溶液2μl，作用2～5分钟，再加17%甲醛溶液5μl，放置2小时，待细胞下沉后用倒置显微镜观察。
, http://www.100md.com
4、结果判断：在倒置显微镜下观察计录活细胞和死亡细胞数。评分标准：1分为死亡细胞数占总细胞数1%～10%；2分为11%～25%；4分为26%～50%；6分为51%～75%；8分为76%～100%。
三、HLA分型
按国际标准微量淋巴细胞毒试验方法分型，能检出HLA-A、B、C位点抗原共22种。根据分型结果在家系内分析HLA单倍型。
四、计算
采用患病同胞对分析法[6]和Lods分析法[7]分别计算，判别是否有疾病易感基因与单倍型连锁。
结 果
一、患病同胞对分析
, http://www.100md.com 10个家系每家均有2例以上同胞患病，符合同胞对分析条件。将每家患病同胞间共享单倍型相加得总单倍型分布(表1)。按两条单倍型相同(2)、一条单倍型相同(1)、两条单倍型都不相同(0)的比例为6：11：4。此比例十分接近单倍型的随机分布频率(表2)，提示本病并无疾病易感基因与HLA单倍型连锁。
表1 原发性高血压家系患病同胞的HLA单倍型分布 家系号
同胞患病例数
单倍型
共享单倍型例数
(2)
(1)
(0)
1
, 百拇医药
2
ac bc
0
2
0
2
2
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2
0
0
3
2
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0
0
2
4
2
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2
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5
2
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2
1
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0
6
2
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7
2
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0
2
0
8
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2
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0
2
0
9
2
bd ac
0
0
2
10
2
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, 百拇医药
0
2
0
合 计
21
6
11
4
表2 患病同胞对共享HLA单倍型的分布与随机分布模型比较
疾病基因概率
pd=1.0
共享单倍型例数分布(%)
(20)
, http://www.100md.com
(1)
(0)
观察值
6(29)
11(52)
4(19)
期望值
5.25(25)
10.5(50)
5.25(25)
x2
0.068
, 百拇医药 0.024
0.217
∑x2=0.309，df=2，P>0.9
二、Lods分析
10个家系中有7家(1，2，5，6，7，8，10)满足Lods分析的条件，经中日友好医院临床医学研究所编制计算机程序计算。结果得重组率θ=0.40，Lods=0.046，相对连锁概率Pr=1.112，连锁图距D=54.936cmol/L(分摩)。根据Lods判别连锁标准：Lods<-2否定连锁，Lods<1，可进一步收集资料再作分析。本研究是属于后一种情况，但从连锁图距D值看，倾向于不支持连锁。
讨 论
本组10个原发性高血压家系经过严格的选择，符合同胞对和Lods两种分析的条件，病例十分难得。同胞对分析的理论根据是假设疾病基因和标记遗传基因(本组为HLA单倍型的编码基因复合物)无关时，两患病同胞间共享HLA单倍型应服从随机分配的规律，如按共享单倍型两条、共享单倍型一条、无共享单倍型三种情况的比例计算，应为25%：50%：25%。若为显性遗传，这个比例应为50%：50%：0；若为隐性遗传应为100%：0：0。本研究的统计结果符合随机分配模式，因此不支持疾病易感基因与HLA连锁。
, 百拇医药
Lods分析的原理是统计亲代与子代在疾病与标记基因间的重组率，采用对数记分法计分。重组率越大，越接近随机。本研究7个家系中有6个家系不支持连锁，唯6号家系表现出高度连锁，使Lods的总分有所上升。但我们认为6号家系的情况可能是属于机遇的性质。Lods分析的优点是允许多个家系分析的数据相加，在不能作出连锁与否的判别时宜增加研究的家系数，再作分析。
综上两种分析，本研究倾向于原发性高血压并无疾病易感基因与HLA的编码基因连锁。
参考文献
1 Luqae Otero M, Martell Claros N, Llorente Perez L, et al, Severe hypertension in the Spanish population. Association with specific HLA antigens, Hypertension, 1983,5(6 pt 3):V149.
, http://www.100md.com
2 Sengar DPS, Couture RA, Jindal SL, Histocompatibility antigens in essential hypertension and myocardial infarction. Tissue Antigens, 1985,26:168.
3 Forberg B, Lon B, Malignant hypertension and HLA antigens, Tissue Antigens, 1983,22:155.
4 王增慧，何旦莎，郭秋霞，等，HLA和原发性高血压、脑中风调查，全国第四届白细胞抗原协作组仁义文件汇编，1987，146。
5 Jawahar LT, Paul IT, HLA and disease associationsm NEW York: Springer-Verlag, 1985,354.
6 Thomson G. The genetic analysis of HLA and disease associations. In:Dausset J, Svejgaard A, eds. HLA and Disease. Baltimore: Williams & Wilkins Co, 1977,84.
7 蔡选青(综述)，一种简易、准确和有效的人类基因定位分析方法——Lods法，国外医学*遗传学分册，1982，5：113。, 百拇医药
单位：110003 沈阳市第七人民医院检验科(于桂兰、陈曼华、姚鉴棣)，内科(金玉华、王新、孙超英)；中日友好医院临床医学研究所(孙逸平、陈维昌)
关键词：高血压；人白细胞抗原；单倍型
中华医学杂志940308
摘要 利用人白细胞抗原(HLA)单倍型分析法对沈阳地区10个高血压多发家系进行了研究，家系选择符合同胞对分析法和Lods分析法两种计算条件。计算显示，本病患病同胞共亨单倍型比例(2：1：0)为28.6%：52.4%：19.0%，P>0.9，符合随机分配模式；Lods分析为Q=0.40，Lods=0.046，Pr=1.112。研究结果不支持原发性高血压患者有易感基因与HLA连锁。
, 百拇医药 高血压往往有家族性，但机理不清。本病是否与人白细胞抗原(HLA)有关，文献报道不一[1～5]。因此，我们对沈阳地区10个高血压多发家系进行了研究，以探讨原发性高血压与HLA有无连锁关系。
对象与方法
一、对象
选取沈阳地区原发性高血压家系10个，选择标准要求每个家庭双亲中有1个(1家例外)及同胞中有2个以上发病并有无病同胞，以便同时进行同胞对照和Lods分析。其中同时符合同胞对和Lods分析的家庭7个。全部家系均由B超、心电图、X线胸透、血脂、血尿常规等临床指标确诊。共研究患者30例，健康亲属25名，个别已死亡病例的单倍型根据家系其他成员推测而得。
二、方法
1、标准血清：使用全国第四届HLA会议标准血清加部分北京儿科研究所提供的HLA-A、B、C位点血清。
, 百拇医药
2、家兔补体：分别取20只以上家兔心脏血或断头血，低温离心，混合血清，-80℃保存，可用半年。
3、国际标准微量淋巴细胞毒试验：取肝素抗凝血3ml，加1%甲基纤维素1ml和羰基铁粉5～10mg，混匀。置37℃水浴中20分钟后用磁铁将铁粉吸至管底，再置37℃水浴30～40分钟，取上清液。将相当于上清液二分之一时的1640液加入上清液中，混匀后加入装有分层液的试管内，以1700r/min离心20分钟。吸取淋巴细胞层，加Hank's液或1640液，摇匀，以800～1000r/min离心10分钟。弃上清液，留管底细胞，调淋巴细胞密度为2×106个/ml。
将细胞悬液1μl点于HLA-A、B、C位点标准血清板上，于灯光下观察细胞和血清是否混合，如未混合，可用细金属丝搅拌，于20～25℃室温下孵育30分钟。每孔加入补体5μl，保温1小时后加5%伊红Y溶液2μl，作用2～5分钟，再加17%甲醛溶液5μl，放置2小时，待细胞下沉后用倒置显微镜观察。
, http://www.100md.com
4、结果判断：在倒置显微镜下观察计录活细胞和死亡细胞数。评分标准：1分为死亡细胞数占总细胞数1%～10%；2分为11%～25%；4分为26%～50%；6分为51%～75%；8分为76%～100%。
三、HLA分型
按国际标准微量淋巴细胞毒试验方法分型，能检出HLA-A、B、C位点抗原共22种。根据分型结果在家系内分析HLA单倍型。
四、计算
采用患病同胞对分析法[6]和Lods分析法[7]分别计算，判别是否有疾病易感基因与单倍型连锁。
结 果
一、患病同胞对分析
, http://www.100md.com 10个家系每家均有2例以上同胞患病，符合同胞对分析条件。将每家患病同胞间共享单倍型相加得总单倍型分布(表1)。按两条单倍型相同(2)、一条单倍型相同(1)、两条单倍型都不相同(0)的比例为6：11：4。此比例十分接近单倍型的随机分布频率(表2)，提示本病并无疾病易感基因与HLA单倍型连锁。
表1 原发性高血压家系患病同胞的HLA单倍型分布 家系号
同胞患病例数
单倍型
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合 计
21
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表2 患病同胞对共享HLA单倍型的分布与随机分布模型比较
疾病基因概率
pd=1.0
共享单倍型例数分布(%)
(20)
, http://www.100md.com
(1)
(0)
观察值
6(29)
11(52)
4(19)
期望值
5.25(25)
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0.217
∑x2=0.309，df=2，P>0.9
二、Lods分析
10个家系中有7家(1，2，5，6，7，8，10)满足Lods分析的条件，经中日友好医院临床医学研究所编制计算机程序计算。结果得重组率θ=0.40，Lods=0.046，相对连锁概率Pr=1.112，连锁图距D=54.936cmol/L(分摩)。根据Lods判别连锁标准：Lods<-2否定连锁，Lods<1，可进一步收集资料再作分析。本研究是属于后一种情况，但从连锁图距D值看，倾向于不支持连锁。
讨 论
本组10个原发性高血压家系经过严格的选择，符合同胞对和Lods两种分析的条件，病例十分难得。同胞对分析的理论根据是假设疾病基因和标记遗传基因(本组为HLA单倍型的编码基因复合物)无关时，两患病同胞间共享HLA单倍型应服从随机分配的规律，如按共享单倍型两条、共享单倍型一条、无共享单倍型三种情况的比例计算，应为25%：50%：25%。若为显性遗传，这个比例应为50%：50%：0；若为隐性遗传应为100%：0：0。本研究的统计结果符合随机分配模式，因此不支持疾病易感基因与HLA连锁。
, 百拇医药
Lods分析的原理是统计亲代与子代在疾病与标记基因间的重组率，采用对数记分法计分。重组率越大，越接近随机。本研究7个家系中有6个家系不支持连锁，唯6号家系表现出高度连锁，使Lods的总分有所上升。但我们认为6号家系的情况可能是属于机遇的性质。Lods分析的优点是允许多个家系分析的数据相加，在不能作出连锁与否的判别时宜增加研究的家系数，再作分析。
综上两种分析，本研究倾向于原发性高血压并无疾病易感基因与HLA的编码基因连锁。
参考文献
1 Luqae Otero M, Martell Claros N, Llorente Perez L, et al, Severe hypertension in the Spanish population. Association with specific HLA antigens, Hypertension, 1983,5(6 pt 3):V149.
, http://www.100md.com
2 Sengar DPS, Couture RA, Jindal SL, Histocompatibility antigens in essential hypertension and myocardial infarction. Tissue Antigens, 1985,26:168.
3 Forberg B, Lon B, Malignant hypertension and HLA antigens, Tissue Antigens, 1983,22:155.
4 王增慧，何旦莎，郭秋霞，等，HLA和原发性高血压、脑中风调查，全国第四届白细胞抗原协作组仁义文件汇编，1987，146。
5 Jawahar LT, Paul IT, HLA and disease associationsm NEW York: Springer-Verlag, 1985,354.
6 Thomson G. The genetic analysis of HLA and disease associations. In:Dausset J, Svejgaard A, eds. HLA and Disease. Baltimore: Williams & Wilkins Co, 1977,84.
7 蔡选青(综述)，一种简易、准确和有效的人类基因定位分析方法——Lods法，国外医学*遗传学分册，1982，5：113。, 百拇医药