白细胞介素2和LAK细胞治疗微小残留白血病的实验研究
作者：张乐萍 殷慧君 毛宁 周生
单位：100044北京医科大学附属人民医院儿科(张乐萍、殷慧君)，军事医学科学院基础医学研究所(毛宁、周生)
关键词：
中华医学杂志940524.htm
淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)与白细胞介素2(IL2)合用治疗部分晚期实体肿瘤已取得显著效果。我们曾在建立小鼠淋巴细胞白血病L7811微小残留病变模型的基础上观察到单用IL2对该模型鼠有一定治疗效果。现加用(LAK细胞)以期得到更好效果。
一、材料及方法
1.动物模型及615小鼠脾细胞LAK活性的诱导检测：按文献[Leukemia,1989,3:9]、[中国应用生理学杂志，1990，(6)：7]进行。
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2.L7811微小残留白血病模型的建立：
采用移植生物试验(也称测量时间曲线)，这是目前动物残留白血病检测最敏感的方法。以101～106个L7811细胞分别腹腔接种6组健康615小鼠，每组10只，观察发病率及死亡时间，绘出剂量-生存时间曲线，并测定引起50%小鼠发生白血病所需接种白血病细胞数(ED50)。取16只健康615小鼠腹腔接种L7811细胞5×106/只后第4天(已发病)，腹腔注射200mg/kg环磷酰胺(Cy)1次，注射Cy后48小时取6只小鼠做外周血骨髓、脾细胞悬液涂片染色镜检，另10只观察生存期。
3.IL2和LAK细胞治疗L7811微小残留白血病：将49只健康615小鼠腹腔接种L7811白血病细胞5 ×106/只，接种后第4天腹腔注射Cy200mg/kg1次，将小鼠分成4组：(1)对照组(14只)，仅注射RPMI1640培养液；(2)IL2治疗组(14只)，腹腔注射IL22×l04U/次，每天2次，连续10天；(3)LAK细胞治疗组(7只)，腹腔注射细胞5×107/次，每隔3天1次，共3次；(4)IL2加LAK细胞治疗组(14只小鼠)，腹腔注射IL2与LAK细胞，用法同上。观察比较各组生存期。
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4.不同时期注射IL2与LAK细胞的疗效比较：20只小鼠接种L7811白血病细胞5×106/只后第4天，腹腔注射Cy200mg/kg1次，将小鼠分成两组：(1)10只小鼠在Cy注射后48小时，再腹腔注射IL2及LAK细胞，用法同上。(2)10只小鼠在注射Cy后120小时再腹腔注射IL2和LAK细胞，用法同上。观察比较两组小鼠生存期。
5.统计分析：采用Neman-keuls检验与t检验。
二、结果
1.615小鼠脾细胞的LAK活性：615小鼠脾细胞在含1000U/mlIL2的培养液中培养3天后，对同种非杀伤细胞(NK)敏感的yac-1细胞、同种NK不敏感的P815、B16、L7811细胞均具有杀伤活性，即为具有广谱杀伤活性的LAK细胞。
2.L7811微小残留白血病模型的建立：615小鼠腹腔接种L7811白血病细胞5×l06/只后第4天(已发病)腹腔注射Cy200mg/kg1次，从Cy注射48小时后算超小鼠平均存活14.2天，约相当于接种103L7811细胞时小鼠的存活时间，此时外周血、骨髓、脾细胞涂片染色镜检未见到白血病细胞，表明此对小鼠可以视为微小残留白血病。
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三、IL2与LAK细胞治疗小鼠L7811微小残留白血病：单独IL2治疗组小鼠平均生存23.6±4.1天，比对照组19.4±0.8天有显著延长(P<0.05)，但无1例生存超过40天。单独LAK细胞治疗组小鼠平均生存22.9±2.2天，与对照组相比差异无显著意义(P>0.05)，但IL2加LAK细胞治疗组小鼠平均生存36.9±14.2天，与前3组相比差异均有显著意义(P<0.01)，且该组14只小鼠中，2只生存期已超过80天，可望长期生存。
4.不同时间开始IL2及LAK细胞治疗的比较：注射Cy后48小时即开始IL2加LAK细胞治疗的10只小鼠平均生存37.1±17.0夭，其中2只小鼠存活超过80天。而Cy注射后120小时再开始IL2及LAK细胞治疗的10只小鼠平均存活24.4±5.0天，两组相比差异有显著意义(P<0.05)。用生存期推算，前组开始IL2和LAK细胞治疗时，体内残留白血病细胞约为103/只，而后组约为106/只，说明IL2加LAK细胞在白血病细胞负荷量小时疗效好。
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三、讨论
一般认为经化疗完全缓解后骨髓中白血病细胞低于5%时(普通形态学方法难以测出)即为微小残留白血病。本实验在建立L7811微小残留白血病模型时考虑了如下特点：(1)化疗处理时已发生白血病；(2)机体经受了化疗损伤，因为单纯给动物接种少量白血病细胞不太符合临床情况；(3)化疗后用一般形态学方法难以测出骨髓中白血病细胞的存在(<5%)，动物自下而上期延长，但最终均死于白血病复发。该模型鼠经IL2和LAK细胞联合治疗取得了比二者单独应用更好的效果。单用LAK细胞效果不佳，原因可能是：(1)LAK细胞输入后尚需足够的IL2来维持其活性；(2)LAK细胞数量不足；(3)样本数量不够，不跳以显示统计学差别。尽管单用IL2显示一定疗效，但却无1例生存超过40天，原因可能是化疗后骨髓抑制，体内淋巴细胞数量不足，而IL2作用的发挥主要依赖于体内淋巴细胞的存在，加大IL2剂量可能会增加疗效，但毒副作用也会增中，二者全用则克服了单用的缺点。此外实验发现IL2与LAK细胞在白血病细胞负荷量小时效果好，提示临床治疗时可先以化疗药最大限度地杀灭白血病细胞，再以IL2和LAK细胞消除化疗药难以杀灭的残留白血病细胞，从而减少或避免白血病复发。
(收稿：1993-03-13 修回：1993-12-15), http://www.100md.com
单位：100044北京医科大学附属人民医院儿科(张乐萍、殷慧君)，军事医学科学院基础医学研究所(毛宁、周生)
关键词：
中华医学杂志940524.htm
淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)与白细胞介素2(IL2)合用治疗部分晚期实体肿瘤已取得显著效果。我们曾在建立小鼠淋巴细胞白血病L7811微小残留病变模型的基础上观察到单用IL2对该模型鼠有一定治疗效果。现加用(LAK细胞)以期得到更好效果。
一、材料及方法
1.动物模型及615小鼠脾细胞LAK活性的诱导检测：按文献[Leukemia,1989,3:9]、[中国应用生理学杂志，1990，(6)：7]进行。
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2.L7811微小残留白血病模型的建立：
采用移植生物试验(也称测量时间曲线)，这是目前动物残留白血病检测最敏感的方法。以101～106个L7811细胞分别腹腔接种6组健康615小鼠，每组10只，观察发病率及死亡时间，绘出剂量-生存时间曲线，并测定引起50%小鼠发生白血病所需接种白血病细胞数(ED50)。取16只健康615小鼠腹腔接种L7811细胞5×106/只后第4天(已发病)，腹腔注射200mg/kg环磷酰胺(Cy)1次，注射Cy后48小时取6只小鼠做外周血骨髓、脾细胞悬液涂片染色镜检，另10只观察生存期。
3.IL2和LAK细胞治疗L7811微小残留白血病：将49只健康615小鼠腹腔接种L7811白血病细胞5 ×106/只，接种后第4天腹腔注射Cy200mg/kg1次，将小鼠分成4组：(1)对照组(14只)，仅注射RPMI1640培养液；(2)IL2治疗组(14只)，腹腔注射IL22×l04U/次，每天2次，连续10天；(3)LAK细胞治疗组(7只)，腹腔注射细胞5×107/次，每隔3天1次，共3次；(4)IL2加LAK细胞治疗组(14只小鼠)，腹腔注射IL2与LAK细胞，用法同上。观察比较各组生存期。
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4.不同时期注射IL2与LAK细胞的疗效比较：20只小鼠接种L7811白血病细胞5×106/只后第4天，腹腔注射Cy200mg/kg1次，将小鼠分成两组：(1)10只小鼠在Cy注射后48小时，再腹腔注射IL2及LAK细胞，用法同上。(2)10只小鼠在注射Cy后120小时再腹腔注射IL2和LAK细胞，用法同上。观察比较两组小鼠生存期。
5.统计分析：采用Neman-keuls检验与t检验。
二、结果
1.615小鼠脾细胞的LAK活性：615小鼠脾细胞在含1000U/mlIL2的培养液中培养3天后，对同种非杀伤细胞(NK)敏感的yac-1细胞、同种NK不敏感的P815、B16、L7811细胞均具有杀伤活性，即为具有广谱杀伤活性的LAK细胞。
2.L7811微小残留白血病模型的建立：615小鼠腹腔接种L7811白血病细胞5×l06/只后第4天(已发病)腹腔注射Cy200mg/kg1次，从Cy注射48小时后算超小鼠平均存活14.2天，约相当于接种103L7811细胞时小鼠的存活时间，此时外周血、骨髓、脾细胞涂片染色镜检未见到白血病细胞，表明此对小鼠可以视为微小残留白血病。
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三、IL2与LAK细胞治疗小鼠L7811微小残留白血病：单独IL2治疗组小鼠平均生存23.6±4.1天，比对照组19.4±0.8天有显著延长(P<0.05)，但无1例生存超过40天。单独LAK细胞治疗组小鼠平均生存22.9±2.2天，与对照组相比差异无显著意义(P>0.05)，但IL2加LAK细胞治疗组小鼠平均生存36.9±14.2天，与前3组相比差异均有显著意义(P<0.01)，且该组14只小鼠中，2只生存期已超过80天，可望长期生存。
4.不同时间开始IL2及LAK细胞治疗的比较：注射Cy后48小时即开始IL2加LAK细胞治疗的10只小鼠平均生存37.1±17.0夭，其中2只小鼠存活超过80天。而Cy注射后120小时再开始IL2及LAK细胞治疗的10只小鼠平均存活24.4±5.0天，两组相比差异有显著意义(P<0.05)。用生存期推算，前组开始IL2和LAK细胞治疗时，体内残留白血病细胞约为103/只，而后组约为106/只，说明IL2加LAK细胞在白血病细胞负荷量小时疗效好。
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三、讨论
一般认为经化疗完全缓解后骨髓中白血病细胞低于5%时(普通形态学方法难以测出)即为微小残留白血病。本实验在建立L7811微小残留白血病模型时考虑了如下特点：(1)化疗处理时已发生白血病；(2)机体经受了化疗损伤，因为单纯给动物接种少量白血病细胞不太符合临床情况；(3)化疗后用一般形态学方法难以测出骨髓中白血病细胞的存在(<5%)，动物自下而上期延长，但最终均死于白血病复发。该模型鼠经IL2和LAK细胞联合治疗取得了比二者单独应用更好的效果。单用LAK细胞效果不佳，原因可能是：(1)LAK细胞输入后尚需足够的IL2来维持其活性；(2)LAK细胞数量不足；(3)样本数量不够，不跳以显示统计学差别。尽管单用IL2显示一定疗效，但却无1例生存超过40天，原因可能是化疗后骨髓抑制，体内淋巴细胞数量不足，而IL2作用的发挥主要依赖于体内淋巴细胞的存在，加大IL2剂量可能会增加疗效，但毒副作用也会增中，二者全用则克服了单用的缺点。此外实验发现IL2与LAK细胞在白血病细胞负荷量小时效果好，提示临床治疗时可先以化疗药最大限度地杀灭白血病细胞，再以IL2和LAK细胞消除化疗药难以杀灭的残留白血病细胞，从而减少或避免白血病复发。
(收稿：1993-03-13 修回：1993-12-15), http://www.100md.com