金属硫蛋白在乳腺癌组织中过表达的临床病理意义
作者：丁华野 皋岚湘 邓永江 田玉旺 黄晓南
单位：100700 北京军区总医院病理科
关键词：
中华医学杂志971121 金属硫蛋白(MTs)是一种含有半胱胺酸的低分子量蛋白，存在于许多正常细胞中[1，2]。最近发现乳腺浸润性导管癌细胞中有MTs过表达[1～4]，且与临床预后关系密切。为了进一步弄清MTs在乳腺癌中过表达的意义，我们应用免疫组织化学法，观察了乳腺癌组织中MTs表达情况，及其与常用的临床病理参数和患者生存期之间的关系。
一、对象和方法
1.对象：收集我院1986～1995年间乳腺癌手术标本107例，乳腺癌并有淋巴结转移37例。患者均为女性，年龄26～78岁，平均年龄49岁。术前未做过任何化疗和放疗。全部病例均进 行随访。
, 百拇医药
2.病理分型和组织分级：按着世界卫生组织分类标准进行病理分型。参照Elston和Ellis改良的Scarff-Bloom-Richardson分级法[5]，对浸润性导管癌进行定量分级。
3.免疫组织化学染色：切片厚4μm。单克隆抗MTs抗体(E9，美国ZYMED公司产品)为 1∶100。采用LSAB法染色，染色步骤按试剂盒(丹麦DAKO公司产品)说明书。滴加抗体前将切片进行微波抗原修复。用已知阳性切片作阳性对照；不加第一抗体为阴性对照。
4.阳性结果判断：由2名医师在不知道任何临床和病理资料的情况下，分别对免疫组织化学切片进行评估。肿瘤细胞胞核或/和胞浆内可见明确的棕黄色颗粒，则判为阳性细胞；用高倍视野在每张切片上计算1 000个以上癌细胞，阳性细胞数≥10%为MTs过表达，否则为阴性[3]。
5.统计学分析：采用卡方检验和生存资料的乘积-极限法统计分析，使用SAS软件进行统计学处理。
, http://www.100md.com
二、结果
1.MTs在乳腺癌组织中的表达情况：MTs在癌旁乳腺组织的肌上皮细胞核中有很强的表达，显示出连续的肌上皮层，极少数导管上皮细胞核亦有表达(表达率<5%)；其中14例癌旁见腺病成分、2例腺瘤成分和1例见到导管内乳头状瘤，MTs均在肌上皮内表达；有86例(80.4%)原发性癌组织表达MTs，29例(93.5%)腋下淋巴结转移灶中MTs阳性，阳性物质既存在癌细胞胞核中，也存在胞浆内，但胞核表达强度高于胞浆表达。本组有50例切片中可见原位癌结构，其中37例(72.5%)在原位癌周边的肌上皮细胞核内有MTs表达，但表达强度弱于正常导管肌上皮细胞层。原位癌结构的癌细胞内亦有MTs表达，其表达强度越高，周边的肌上皮细胞表达越弱。
2.MTs的表达与乳腺癌临床和病理参数之间的关系：见附表。本组因除浸润性导管癌(86.0%)以外其它类型较少，故未进行统计学处理。
3.MTs在乳腺癌中的表达与患者预后的关系：本组术后3年以上者获得随访信息55例(随访率为51.4%)，其中有 21例(38.2%)死亡，生存最长时间为9年。在生存者中MTs过表达为23例(67.6%)，死亡者中MTs过表达为20例(95.2%)。MTs过表达和无过表达的两组生存曲线经Log-rank检验差异有显著意义(χ2=3.9480，P<0.05)。
, 百拇医药
附表 金属硫蛋白表达与乳腺癌临床病理指标的关系 组别
例数
金属硫蛋白表达
P值
例数
%
年龄(岁)
≤50
63
54
85.7
>0.05
>50
, 百拇医药
44
32
72.7
分型
浸润性导管癌
92
74
80.4
浸润性小叶癌
6
5
5/6
髓样癌
, 百拇医药
4
4
4/4
粘液癌
4
2
2/4
管状癌
1
1
1/1
肿瘤大小(cm)
≤2.0
, 百拇医药 24
15
62.5
<0.02
>2.0
83
71
85.5
核分裂(10HPF)
≤10
53
35
66.0
, 百拇医药
<0.01
>10
54
51
94.4
肿瘤坏死
有
44
37
84.1
>0.05
无
63
, 百拇医药
49
77.8
病理分级
Ⅰ
25
16
64.0
Ⅱ
38
32
84.2*
<0.05
Ⅲ
, 百拇医药
29
26
89.7*
淋巴结转移
无
52
39
75.0
>0.05
有
55
47
85.5
, 百拇医药
注：* 与I级比较
三、讨论
本组MTs在乳腺癌和癌旁组织的表达状况与文献报道一致[1～4]，表明癌细胞与正常腺上皮细胞在分化和表型上有很大的不同。一般认为在正常组织中MTs的合成由金属离子及一些激素等内源性因子诱导[2]，但在癌细胞中合成的机制尚不清楚。有研究发现MTs在乳腺导管癌中有表达，而在小叶癌(除外某些亚型，如多形型小叶癌)中无表达，在粘液癌中也很少表达，显示MTs与癌的发生有关[2，3]。本组除导管癌外其它类型较少。小叶癌中虽然有4例有MTs表达，但其中2例同时伴有导管癌存在，另外2例为弱阳性(阳性细胞少于40%)；2例MTs阳性的粘液癌中也有导管癌的结构。MTs表达是否确与乳腺癌分型有关，还需要进一步证实。
本组MTs在乳腺癌中的表达与肿瘤的体积大、核分裂多、组织分级高有明显联系，这些均为预示乳腺癌预后差的临床常用的传统病理指标。有文献表明MTs过表达与淋巴结转移亦有明显关系[3]，但本组未得到同样结果，可能与回顾性材料中部分病例淋巴结检出个数较少有关，有待今后继续研究。此外，本组随访材料显示有MTs过表达的患者其生存期明显短于无MTs表达者，进一步证明MTs的表达可作为一个预示乳腺癌进展性生物学行为和预后差的标志。
, 百拇医药
参考文献
1 Schmid KW, Ellis IO, Gee JMW, et al. Presence and possible significance of immunocytochemically demonstrable metallothionein over-expression in primary invasive ductal carcinoma of the breast. Virchow Archiv A Pathol Anat, 1993, 422：153.
2 Bert-Bier, Douglas-Jones A, Tötsch M, et al. Immunohistochemical demonstration of metallothionein in normal human breast tissue and benign and malignant breast lesions. Breast Cancer res Treat, 1994, 30：213.
, 百拇医药
3 Haerslev T, Jacobsen GK, Zedeler K. The prognostic significance of immunohistochemically detectable metallothionein in primary breast carcinomas. APMIS, 1995, 103：279.
4 Fresno M, Wu W, Rodriguez JM, et al. Localization of metallothionein in breast carcinomas. An immunohistochemical study. Virchows Arch A Pathol Anat, 1993, 423：215.
5 Elston CW, Ellis JO. Pathological prognositic factor in breast cancer, In: the value of histological grade in breast cancer: experience from a long study with long-term follow-up. Histopathology, 1991, 19：403.
(收稿：1997-01-10 修回：1997-08-20), 百拇医药
单位：100700 北京军区总医院病理科
关键词：
中华医学杂志971121 金属硫蛋白(MTs)是一种含有半胱胺酸的低分子量蛋白，存在于许多正常细胞中[1，2]。最近发现乳腺浸润性导管癌细胞中有MTs过表达[1～4]，且与临床预后关系密切。为了进一步弄清MTs在乳腺癌中过表达的意义，我们应用免疫组织化学法，观察了乳腺癌组织中MTs表达情况，及其与常用的临床病理参数和患者生存期之间的关系。
一、对象和方法
1.对象：收集我院1986～1995年间乳腺癌手术标本107例，乳腺癌并有淋巴结转移37例。患者均为女性，年龄26～78岁，平均年龄49岁。术前未做过任何化疗和放疗。全部病例均进 行随访。
, 百拇医药
2.病理分型和组织分级：按着世界卫生组织分类标准进行病理分型。参照Elston和Ellis改良的Scarff-Bloom-Richardson分级法[5]，对浸润性导管癌进行定量分级。
3.免疫组织化学染色：切片厚4μm。单克隆抗MTs抗体(E9，美国ZYMED公司产品)为 1∶100。采用LSAB法染色，染色步骤按试剂盒(丹麦DAKO公司产品)说明书。滴加抗体前将切片进行微波抗原修复。用已知阳性切片作阳性对照；不加第一抗体为阴性对照。
4.阳性结果判断：由2名医师在不知道任何临床和病理资料的情况下，分别对免疫组织化学切片进行评估。肿瘤细胞胞核或/和胞浆内可见明确的棕黄色颗粒，则判为阳性细胞；用高倍视野在每张切片上计算1 000个以上癌细胞，阳性细胞数≥10%为MTs过表达，否则为阴性[3]。
5.统计学分析：采用卡方检验和生存资料的乘积-极限法统计分析，使用SAS软件进行统计学处理。
, http://www.100md.com
二、结果
1.MTs在乳腺癌组织中的表达情况：MTs在癌旁乳腺组织的肌上皮细胞核中有很强的表达，显示出连续的肌上皮层，极少数导管上皮细胞核亦有表达(表达率<5%)；其中14例癌旁见腺病成分、2例腺瘤成分和1例见到导管内乳头状瘤，MTs均在肌上皮内表达；有86例(80.4%)原发性癌组织表达MTs，29例(93.5%)腋下淋巴结转移灶中MTs阳性，阳性物质既存在癌细胞胞核中，也存在胞浆内，但胞核表达强度高于胞浆表达。本组有50例切片中可见原位癌结构，其中37例(72.5%)在原位癌周边的肌上皮细胞核内有MTs表达，但表达强度弱于正常导管肌上皮细胞层。原位癌结构的癌细胞内亦有MTs表达，其表达强度越高，周边的肌上皮细胞表达越弱。
2.MTs的表达与乳腺癌临床和病理参数之间的关系：见附表。本组因除浸润性导管癌(86.0%)以外其它类型较少，故未进行统计学处理。
3.MTs在乳腺癌中的表达与患者预后的关系：本组术后3年以上者获得随访信息55例(随访率为51.4%)，其中有 21例(38.2%)死亡，生存最长时间为9年。在生存者中MTs过表达为23例(67.6%)，死亡者中MTs过表达为20例(95.2%)。MTs过表达和无过表达的两组生存曲线经Log-rank检验差异有显著意义(χ2=3.9480，P<0.05)。
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附表 金属硫蛋白表达与乳腺癌临床病理指标的关系 组别
例数
金属硫蛋白表达
P值
例数
%
年龄(岁)
≤50
63
54
85.7
>0.05
>50
, 百拇医药
44
32
72.7
分型
浸润性导管癌
92
74
80.4
浸润性小叶癌
6
5
5/6
髓样癌
, 百拇医药
4
4
4/4
粘液癌
4
2
2/4
管状癌
1
1
1/1
肿瘤大小(cm)
≤2.0
, 百拇医药 24
15
62.5
<0.02
>2.0
83
71
85.5
核分裂(10HPF)
≤10
53
35
66.0
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<0.01
>10
54
51
94.4
肿瘤坏死
有
44
37
84.1
>0.05
无
63
, 百拇医药
49
77.8
病理分级
Ⅰ
25
16
64.0
Ⅱ
38
32
84.2*
<0.05
Ⅲ
, 百拇医药
29
26
89.7*
淋巴结转移
无
52
39
75.0
>0.05
有
55
47
85.5
, 百拇医药
注：* 与I级比较
三、讨论
本组MTs在乳腺癌和癌旁组织的表达状况与文献报道一致[1～4]，表明癌细胞与正常腺上皮细胞在分化和表型上有很大的不同。一般认为在正常组织中MTs的合成由金属离子及一些激素等内源性因子诱导[2]，但在癌细胞中合成的机制尚不清楚。有研究发现MTs在乳腺导管癌中有表达，而在小叶癌(除外某些亚型，如多形型小叶癌)中无表达，在粘液癌中也很少表达，显示MTs与癌的发生有关[2，3]。本组除导管癌外其它类型较少。小叶癌中虽然有4例有MTs表达，但其中2例同时伴有导管癌存在，另外2例为弱阳性(阳性细胞少于40%)；2例MTs阳性的粘液癌中也有导管癌的结构。MTs表达是否确与乳腺癌分型有关，还需要进一步证实。
本组MTs在乳腺癌中的表达与肿瘤的体积大、核分裂多、组织分级高有明显联系，这些均为预示乳腺癌预后差的临床常用的传统病理指标。有文献表明MTs过表达与淋巴结转移亦有明显关系[3]，但本组未得到同样结果，可能与回顾性材料中部分病例淋巴结检出个数较少有关，有待今后继续研究。此外，本组随访材料显示有MTs过表达的患者其生存期明显短于无MTs表达者，进一步证明MTs的表达可作为一个预示乳腺癌进展性生物学行为和预后差的标志。
, 百拇医药
参考文献
1 Schmid KW, Ellis IO, Gee JMW, et al. Presence and possible significance of immunocytochemically demonstrable metallothionein over-expression in primary invasive ductal carcinoma of the breast. Virchow Archiv A Pathol Anat, 1993, 422：153.
2 Bert-Bier, Douglas-Jones A, Tötsch M, et al. Immunohistochemical demonstration of metallothionein in normal human breast tissue and benign and malignant breast lesions. Breast Cancer res Treat, 1994, 30：213.
, 百拇医药
3 Haerslev T, Jacobsen GK, Zedeler K. The prognostic significance of immunohistochemically detectable metallothionein in primary breast carcinomas. APMIS, 1995, 103：279.
4 Fresno M, Wu W, Rodriguez JM, et al. Localization of metallothionein in breast carcinomas. An immunohistochemical study. Virchows Arch A Pathol Anat, 1993, 423：215.
5 Elston CW, Ellis JO. Pathological prognositic factor in breast cancer, In: the value of histological grade in breast cancer: experience from a long study with long-term follow-up. Histopathology, 1991, 19：403.
(收稿：1997-01-10 修回：1997-08-20), 百拇医药