骨基质蛋白基因在骨折愈合过程中的表达
作者：史炜镔 柴本甫
单位：200025 上海第二医科大学附属瑞金医院(史炜镔)；上海市伤骨科研究所(柴本甫)
关键词：
中华创伤杂志980135 在整个骨折愈合过程中，不断有新的细胞外基质蛋白合成，这些蛋白被认为对骨折愈合具有重要的调控作用。现就目前骨折愈合过程中有关细胞外基质蛋白mRNA表达变化方面的研究作一综述，通过对这种骨(软骨)源系细胞表型表达变化与骨折愈合过程间关系的分析，试图探究骨折愈合的一些调控机制。
一、胶原
骨折愈合从骨组织的发生看，又可分为膜内化骨与软骨内化骨，因而Ⅰ型胶原在其间占有同样重要的地位。
Ⅰ型胶原：在骨折后第3天就有表达，至第5天达最大表达量的10%，第7天达最大表达量的50%，继而逐渐下降，软骨内化骨和骨再塑时，继续增加(第9天)，至15天，在软骨内化骨、再建的硬骨痂(hard callus)中达高峰；在软骨骨痂中，第9天可测得其表达，在13天便达高峰，此时，大部分软骨细胞已肥大。
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Ⅱ型胶原：第7天在软骨骨痂中可测得其表达，至第9天达高峰，此时软骨细胞的增殖处主导地位，随之又逐渐下降[1]。
Ⅰ型和Ⅱ型胶原这种在软骨骨痂中此消彼长的表达变化表明，软骨细胞在经历静止、增殖和肥大的过程中，其基因的表达也发生了变化,这与其他一些作者的原位杂交的结果是一致的。Sandberg等[2]认为，由于前胶原mRNA的“半衰期”比较长(大约5～10小时)，而软骨形成如此迅速,在早期软骨细胞中的Ⅰ型胶原mRNA很可能是该细胞先前表达型遗留的产物。当时，虽然在软骨细胞中已检测到Ⅰ型胶原mRNA的存在，但在软骨细胞中没发现有此类胶原的合成。他承认软骨细胞在发生分化过程中，几乎在同时经历了不同的表现型。其实，这两种表现型完全可能在某一特定时期内同时出现于软骨细胞。Hughes等[3]的研究显示，在SD大鼠骨折后第8天，具有软骨细胞形态的细胞中有Ⅰ型胶原和骨钙蛋白基因表达，免疫组化也证实了细胞内骨钙蛋白的存在[4]。说明在成骨细胞与软骨细胞之间，此时存在着共有或重迭的表型表达，也可以说，软骨细胞这种表型表达的改变，先于细胞形态的改变，所以会得出共有表型表达(shared phenotype expression)的结论。因为传统上，以细胞形态识别细胞，其实此时能表达Ⅰ型胶原的肥大软骨细胞可能已走向成骨细胞的一面，即反分化，或走向凋亡，而被新生血管中分化的成骨细胞所取代。这种反分化究竟存在与否、成骨细胞的最终归宿及其调控机制如何，还有待进一步研究。
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Ⅱ型胶原也同样可由软骨细胞和成骨细胞共同表达，它在成骨细胞的表达,主要表现在与软骨内化骨区相邻的未充分分化的编织骨组织中。这种共同表型表达同时也表现在一些非胶原蛋白上，如骨钙蛋白(bone Gla protein， BGP)、骨连接蛋白(osteonectin ON)和骨桥蛋白(osteopontin， OPN)等。一般认为，它们均由成骨细胞合成分泌，但原位杂交结果显示，它们在软骨细胞中同样也有表达[3，5]。
Bolander等[6]的研究表明，骨连接蛋白与骨桥蛋白的早期表达，可能归功于早期肉芽组织中的成纤维细胞和内皮细胞，虽然在表达量上有所差异。随着骨痂的成熟(第21天)，这种共有表型表达便逐渐消失[3]。
Sandell等[7]运用横跨特异外显子[外显子2，编码Ⅱ型胶原α1链N端前肽(propeptide)的一部分]交界的寡核苷酸探针，还发现了Ⅱ型胶原B与Ⅱ型胶原A(由两种不同的Ⅱ型胶原α1链基因的剪接形式所致，其中Ⅱ型胶原B不含有外显子2)在骨组织中的不同表达模式：Ⅱ型胶原B在成熟的软骨细胞中表达，而Ⅱ型胶原A则在前软骨细胞、成纤维细胞样细胞中表达。同时，有研究发现，其在胚胎神经细胞及另一些未分化的间充质细胞中也有表达，这与胚胎组织骨骼发育过程中此类胶原的表达模式相仿。然而，Hughes等[3]的研究表明，在软骨细胞与成骨细胞中同样有Ⅱ型胶原A基因的表达，这进一步证实了前述共有表型表达的存在及两种细胞的同源性，同时也对寻找一种骨或软骨组织绝对特异的表型指标的企图，提出了有力的质疑。
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二、骨连接蛋白
ON是最丰富的非胶原性骨基质蛋白，一般认为是由成骨细胞所合成、分泌。但新近的一些研究发现，在成骨细胞、软骨细胞和成牙质细胞间存在ON的共有表达[8]。
在骨折后第3天时，ON便在膜内化骨区有表达，第5天达最大表达量的55%(在软骨骨痂中，为最大表达量的50%)，继而逐渐下剑⒃诘9天继续增加，至第11天达高峰(在软骨骨痂中，第9天达高峰)[1]。Hirakawa等[5]的原位杂交研究则显示：术后第1天在大鼠股骨骨折处增殖的骨膜就有此mRNA的表达，第3天出现于编织骨中，第5天出现于未成熟的软骨细胞中，第7天出现于骨内膜新形成的小梁骨中的成骨细胞中，第14天起，它又在骨外膜新形成的小梁骨中的成骨细胞中表达。这一切说明，ON在骨折愈合过程中，除可调节骨与软骨形成、矿化及骨再塑外，对成骨细胞和软骨细胞的分化、增殖及成熟可能也具有重要的调节作用。
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三、骨钙蛋白
一般认为，它由骨细胞、成骨细胞合成、分泌，在钙盐沉积、骨吸收或再塑中担任重要角色，是反映成骨细胞活性、骨质形成的重要指标。
在骨折愈合早期(膜内化骨)，BGP只表达最大表达量的2%，但在第9天继续增高，第15天达峰值。在软骨骨痂中，未测得BGP基因的表达[1]。Hirakawa等[5]通过原位杂交研究发现，其表达最早定位于膜内化骨的编织骨郑前述相仿，然后与ON及BGP一起表达于骨内膜新形成的小梁骨中的成骨细胞中(第7天)、第14天的骨外膜新形成的小梁骨中的成骨细胞中。BGP在早期膜内骨化时无显著表达，在矿化与再塑时出现表达高峰，且更主要与骨吸收、再塑有关。原位杂交结果显示，早期成骨细胞表达BGP基因的能力并不低下，它早期表达的不显郑可能与表达此mRNA的细胞的数量较少有关，因为早期增殖中的软骨细胞占主导地位，而成骨细胞与肥大的软骨细胞则较少。先前的研究认为，在胚胎肢体长骨干发育过程中，OPN的表达先于BGP，而从Hirakawa等[5]的研究结果分析，两者几乎同时出现。提示在骨折这样的应激条件下，这些mRNA的表达调控机制在时间上发生了变化，BGP在骨折愈合过程中的较早表达[9，10]，对骨折的愈合是有利的。
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四、骨桥蛋白
OPN为骨涎蛋白(bone sialoprotein)，也能与羟磷灰石结合，在骨细胞与细胞外基质、无机盐之间起桥梁作用。
Hirakawa等[5]的研究表明，OPN除未能在第一天表达外，基本与BGP同步出现于相似的组织、细胞中。在第14天，OPN还与基质Gla蛋白一起表达于新形成的骨外膜肥大的软骨细胞中。在骨折愈合后期，它的表达明显下降，这种时间上的变化，与先前研究结果[11]相仿，也与它目前公认的功能相符。
五、基质Gla蛋白(matrix Gla protein， MGP)
也是一种维生素K依赖蛋白，在胚胎发育过程中，它的表达早于BGP。
Hirakawa等[5]的研究表明，在骨折愈合过程郑琈GP除与OPN共同表达于新形成的骨外膜肥大的软骨细胞中外，自第5天始，它还表达于未成熟的软骨细胞中。这一结果提示，它的表达与软骨细胞的分化发育有关。然叮煌谂咛发育，它的表达晚于BGP，这可能与BGP在骨折愈合过程中的地位有关。因为骨折愈合最终是骨的形成，而非软骨的形成，GBP的较早出现有利于骨折愈合。
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六、蛋白聚糖核心蛋白(proteoglycan core protein， PCP)
PCP是软骨的结构成分，对软骨组织的不可压缩性起重要作用，它还可能在软内化骨过程中调节软骨矿化，在骨折愈合过程中，在软骨骨痂，于骨折后第9天软骨细胞大量增殖时达高峰，它对软骨增殖、成熟与肥大及软骨形成的质量起调节作用[1]。
七、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase， ALP)
ALP是一个成骨性指标，也在骨矿化中起重要作用。它在骨折后第3天便有表达，第5天达高峰量的45%，继而下降，第9天回升，第15天达峰值(在软骨骨痂中，于第13天，大部分软骨细胞肥大时，达峰值)[1]。综合BGP及Ⅰ型胶原的表达模式分析，BGP在膜内化骨时仅有少量表达，而在软骨内化骨时，随着ALP在Ⅰ型胶原中的分泌，其表达量显著增加。这不仅提示BGP在两种化骨形式中的地位，也显示了ALP对BGP的表达和两种化骨形式具有调节作用。 另外，在研究骨折愈合调控机制时，同时应进行一些细胞因子的检测。通过先进的分子生物学技术，已经确认一些生长因子，如胰岛素样生长因子(IGF)[12，13]、转移生长因子β(TGFβ)[14，15]、骨形态发生蛋白(BMP)[11]、酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)[16]，以及血小板衍化生长因子(PDGF)[17]等对骨折愈合起重要的调节作用。这些因子与基质蛋白的相关性研究，有助于深刻揭示骨折愈合乃至骨、软骨形态发生的确切机制，为骨折及一些骨病的治疗提供理论依据。
, 百拇医药
参 考 文 献
1 Jingushi S， Joyce ME， Bolander ME. Genetic expression of extracellular matrix proteins correlates with histologic changes during fracture repair. J Bone Miner Res， 1992， 7∶1045-1055.
2 Sandberg M， Aro H， Multimaki P， et al. In situ localization of collagen production by chondrocytes and osteoblasts in fracture callus. JBJS(Am)， 1989， 71∶69-77.
3 Hughes SS， Hicks DG， O'Keefe RJ， et al. Shared phenotypic expression of osteoblasts and chondrocytes in fracture callus. J Bone Miner Res， 1995， 10∶523-544.
, 百拇医药
4 Stafford HJ， Roberts MT， Oni OOA， et al. Localization of bone-forming cells during fracture healing by osteocalcin immunocytochemistry： An experimental study of the rabbit tibia. J Orthop Res， 1994， 12∶29-39.
5 Hirakawa K， Hirota S， Ikeda T， et al. Localization of the mRNA for bone matrix proteins during fracture healing as determined by in situ hybridization. J Bone Miner Res， 1994， 9∶1551-1557.
6 Bolander ME， Young MF， Fisher LW， et al. Osteonectin cDNA sequence reveals potential binding regions for calcium and hydroxyapatite and shows homologies with both abasement membrane protein (SPARC) and a serine proteinase inhibitor (Ovomucoid). Pro Natl Acad Sci USA. 1988， 85∶2919-2923.
, 百拇医药
7 Sandell LJ， Morris N， Robbins JR， et al. Alternatively spliced type Ⅱ procollagen mRNAs define distinct populations of cells during vertebral development： Differential expression of the amino-propeptide. The Journal of Cell Biology， 1991， 114∶1307-1319.
8 Sommer B， Bickel M， Hofstetter W， et al. Expression of matrix proteins during the development of mineralized tissues. Bone， 1996， 19∶371-380.
9 Weinreb M， Shinar D， Rodan GA. Different pattern of alkaline phosphatase， ostteopontin and osteocalcin expression in developing rat bone visualized by in situ hybridization. J Bone Miner Res， 1990， 5∶831-842.
, 百拇医药
10 Ikeda T， Nomura S， Yamagushi A， et al. In situ hybridization of bone matrix proteins in undecalcified adult rat bone section. J Histochem Cytochem， 1992， 40∶1079-1088.
11 Alberius P， Johnell O. Repair of intramembranous bone fractures and defect in rats. J Craniomaxillofac Surg， 1991， 19∶15.
12 Linkhart TA， Mohan S， Baylink DJ. Growth factors for bone growth and repair： IGF， TGF-β and BMP. Bone， 1996， 19(1s)∶1s-12s.
, 百拇医药
13 Andrew JG， Hoyland J， Freemont AJ， et al. Insulin-like growth factor gene expression in human fracture callus. Calcif Tissue Int， 1993， 53∶97-102.
14 Joyce ME， Jingushi S， Bolander ME. Transforming growth factor-β in the regulation of fracture repair. Orthop Clin North Am， 1990， 21∶199.
15 Andrew JG， Hoyland J， Andrew SM， et al. Demonstration of TGF-β mRNA by in situ hybridization in normal human fracture healing. Calcif Tissue Int， 1993， 52∶74-78.
, 百拇医药
16 Jingushi S， Heydemann A， Kana SK， et al. Acidic fibroblast growth factor (aFGF) injection stimulates cartilage enlargement and inhibits cartilage gene expression in rat fracture healing. J Orthop Res， 1990， 8∶364-371.
17 Andrew JG， Hoyland JA， Freemont AJ， et al. Platelet-derived growth factor expression in normally healing human fractures. Bone， 1995， 16∶455-460.
(收稿：1996-12-19 修回：1997-10-08)
(本文编辑：向勇), http://www.100md.com
单位：200025 上海第二医科大学附属瑞金医院(史炜镔)；上海市伤骨科研究所(柴本甫)
关键词：
中华创伤杂志980135 在整个骨折愈合过程中，不断有新的细胞外基质蛋白合成，这些蛋白被认为对骨折愈合具有重要的调控作用。现就目前骨折愈合过程中有关细胞外基质蛋白mRNA表达变化方面的研究作一综述，通过对这种骨(软骨)源系细胞表型表达变化与骨折愈合过程间关系的分析，试图探究骨折愈合的一些调控机制。
一、胶原
骨折愈合从骨组织的发生看，又可分为膜内化骨与软骨内化骨，因而Ⅰ型胶原在其间占有同样重要的地位。
Ⅰ型胶原：在骨折后第3天就有表达，至第5天达最大表达量的10%，第7天达最大表达量的50%，继而逐渐下降，软骨内化骨和骨再塑时，继续增加(第9天)，至15天，在软骨内化骨、再建的硬骨痂(hard callus)中达高峰；在软骨骨痂中，第9天可测得其表达，在13天便达高峰，此时，大部分软骨细胞已肥大。
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Ⅱ型胶原：第7天在软骨骨痂中可测得其表达，至第9天达高峰，此时软骨细胞的增殖处主导地位，随之又逐渐下降[1]。
Ⅰ型和Ⅱ型胶原这种在软骨骨痂中此消彼长的表达变化表明，软骨细胞在经历静止、增殖和肥大的过程中，其基因的表达也发生了变化,这与其他一些作者的原位杂交的结果是一致的。Sandberg等[2]认为，由于前胶原mRNA的“半衰期”比较长(大约5～10小时)，而软骨形成如此迅速,在早期软骨细胞中的Ⅰ型胶原mRNA很可能是该细胞先前表达型遗留的产物。当时，虽然在软骨细胞中已检测到Ⅰ型胶原mRNA的存在，但在软骨细胞中没发现有此类胶原的合成。他承认软骨细胞在发生分化过程中，几乎在同时经历了不同的表现型。其实，这两种表现型完全可能在某一特定时期内同时出现于软骨细胞。Hughes等[3]的研究显示，在SD大鼠骨折后第8天，具有软骨细胞形态的细胞中有Ⅰ型胶原和骨钙蛋白基因表达，免疫组化也证实了细胞内骨钙蛋白的存在[4]。说明在成骨细胞与软骨细胞之间，此时存在着共有或重迭的表型表达，也可以说，软骨细胞这种表型表达的改变，先于细胞形态的改变，所以会得出共有表型表达(shared phenotype expression)的结论。因为传统上，以细胞形态识别细胞，其实此时能表达Ⅰ型胶原的肥大软骨细胞可能已走向成骨细胞的一面，即反分化，或走向凋亡，而被新生血管中分化的成骨细胞所取代。这种反分化究竟存在与否、成骨细胞的最终归宿及其调控机制如何，还有待进一步研究。
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Ⅱ型胶原也同样可由软骨细胞和成骨细胞共同表达，它在成骨细胞的表达,主要表现在与软骨内化骨区相邻的未充分分化的编织骨组织中。这种共同表型表达同时也表现在一些非胶原蛋白上，如骨钙蛋白(bone Gla protein， BGP)、骨连接蛋白(osteonectin ON)和骨桥蛋白(osteopontin， OPN)等。一般认为，它们均由成骨细胞合成分泌，但原位杂交结果显示，它们在软骨细胞中同样也有表达[3，5]。
Bolander等[6]的研究表明，骨连接蛋白与骨桥蛋白的早期表达，可能归功于早期肉芽组织中的成纤维细胞和内皮细胞，虽然在表达量上有所差异。随着骨痂的成熟(第21天)，这种共有表型表达便逐渐消失[3]。
Sandell等[7]运用横跨特异外显子[外显子2，编码Ⅱ型胶原α1链N端前肽(propeptide)的一部分]交界的寡核苷酸探针，还发现了Ⅱ型胶原B与Ⅱ型胶原A(由两种不同的Ⅱ型胶原α1链基因的剪接形式所致，其中Ⅱ型胶原B不含有外显子2)在骨组织中的不同表达模式：Ⅱ型胶原B在成熟的软骨细胞中表达，而Ⅱ型胶原A则在前软骨细胞、成纤维细胞样细胞中表达。同时，有研究发现，其在胚胎神经细胞及另一些未分化的间充质细胞中也有表达，这与胚胎组织骨骼发育过程中此类胶原的表达模式相仿。然而，Hughes等[3]的研究表明，在软骨细胞与成骨细胞中同样有Ⅱ型胶原A基因的表达，这进一步证实了前述共有表型表达的存在及两种细胞的同源性，同时也对寻找一种骨或软骨组织绝对特异的表型指标的企图，提出了有力的质疑。
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二、骨连接蛋白
ON是最丰富的非胶原性骨基质蛋白，一般认为是由成骨细胞所合成、分泌。但新近的一些研究发现，在成骨细胞、软骨细胞和成牙质细胞间存在ON的共有表达[8]。
在骨折后第3天时，ON便在膜内化骨区有表达，第5天达最大表达量的55%(在软骨骨痂中，为最大表达量的50%)，继而逐渐下剑⒃诘9天继续增加，至第11天达高峰(在软骨骨痂中，第9天达高峰)[1]。Hirakawa等[5]的原位杂交研究则显示：术后第1天在大鼠股骨骨折处增殖的骨膜就有此mRNA的表达，第3天出现于编织骨中，第5天出现于未成熟的软骨细胞中，第7天出现于骨内膜新形成的小梁骨中的成骨细胞中，第14天起，它又在骨外膜新形成的小梁骨中的成骨细胞中表达。这一切说明，ON在骨折愈合过程中，除可调节骨与软骨形成、矿化及骨再塑外，对成骨细胞和软骨细胞的分化、增殖及成熟可能也具有重要的调节作用。
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三、骨钙蛋白
一般认为，它由骨细胞、成骨细胞合成、分泌，在钙盐沉积、骨吸收或再塑中担任重要角色，是反映成骨细胞活性、骨质形成的重要指标。
在骨折愈合早期(膜内化骨)，BGP只表达最大表达量的2%，但在第9天继续增高，第15天达峰值。在软骨骨痂中，未测得BGP基因的表达[1]。Hirakawa等[5]通过原位杂交研究发现，其表达最早定位于膜内化骨的编织骨郑前述相仿，然后与ON及BGP一起表达于骨内膜新形成的小梁骨中的成骨细胞中(第7天)、第14天的骨外膜新形成的小梁骨中的成骨细胞中。BGP在早期膜内骨化时无显著表达，在矿化与再塑时出现表达高峰，且更主要与骨吸收、再塑有关。原位杂交结果显示，早期成骨细胞表达BGP基因的能力并不低下，它早期表达的不显郑可能与表达此mRNA的细胞的数量较少有关，因为早期增殖中的软骨细胞占主导地位，而成骨细胞与肥大的软骨细胞则较少。先前的研究认为，在胚胎肢体长骨干发育过程中，OPN的表达先于BGP，而从Hirakawa等[5]的研究结果分析，两者几乎同时出现。提示在骨折这样的应激条件下，这些mRNA的表达调控机制在时间上发生了变化，BGP在骨折愈合过程中的较早表达[9，10]，对骨折的愈合是有利的。
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四、骨桥蛋白
OPN为骨涎蛋白(bone sialoprotein)，也能与羟磷灰石结合，在骨细胞与细胞外基质、无机盐之间起桥梁作用。
Hirakawa等[5]的研究表明，OPN除未能在第一天表达外，基本与BGP同步出现于相似的组织、细胞中。在第14天，OPN还与基质Gla蛋白一起表达于新形成的骨外膜肥大的软骨细胞中。在骨折愈合后期，它的表达明显下降，这种时间上的变化，与先前研究结果[11]相仿，也与它目前公认的功能相符。
五、基质Gla蛋白(matrix Gla protein， MGP)
也是一种维生素K依赖蛋白，在胚胎发育过程中，它的表达早于BGP。
Hirakawa等[5]的研究表明，在骨折愈合过程郑琈GP除与OPN共同表达于新形成的骨外膜肥大的软骨细胞中外，自第5天始，它还表达于未成熟的软骨细胞中。这一结果提示，它的表达与软骨细胞的分化发育有关。然叮煌谂咛发育，它的表达晚于BGP，这可能与BGP在骨折愈合过程中的地位有关。因为骨折愈合最终是骨的形成，而非软骨的形成，GBP的较早出现有利于骨折愈合。
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六、蛋白聚糖核心蛋白(proteoglycan core protein， PCP)
PCP是软骨的结构成分，对软骨组织的不可压缩性起重要作用，它还可能在软内化骨过程中调节软骨矿化，在骨折愈合过程中，在软骨骨痂，于骨折后第9天软骨细胞大量增殖时达高峰，它对软骨增殖、成熟与肥大及软骨形成的质量起调节作用[1]。
七、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase， ALP)
ALP是一个成骨性指标，也在骨矿化中起重要作用。它在骨折后第3天便有表达，第5天达高峰量的45%，继而下降，第9天回升，第15天达峰值(在软骨骨痂中，于第13天，大部分软骨细胞肥大时，达峰值)[1]。综合BGP及Ⅰ型胶原的表达模式分析，BGP在膜内化骨时仅有少量表达，而在软骨内化骨时，随着ALP在Ⅰ型胶原中的分泌，其表达量显著增加。这不仅提示BGP在两种化骨形式中的地位，也显示了ALP对BGP的表达和两种化骨形式具有调节作用。 另外，在研究骨折愈合调控机制时，同时应进行一些细胞因子的检测。通过先进的分子生物学技术，已经确认一些生长因子，如胰岛素样生长因子(IGF)[12，13]、转移生长因子β(TGFβ)[14，15]、骨形态发生蛋白(BMP)[11]、酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)[16]，以及血小板衍化生长因子(PDGF)[17]等对骨折愈合起重要的调节作用。这些因子与基质蛋白的相关性研究，有助于深刻揭示骨折愈合乃至骨、软骨形态发生的确切机制，为骨折及一些骨病的治疗提供理论依据。
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参 考 文 献
1 Jingushi S， Joyce ME， Bolander ME. Genetic expression of extracellular matrix proteins correlates with histologic changes during fracture repair. J Bone Miner Res， 1992， 7∶1045-1055.
2 Sandberg M， Aro H， Multimaki P， et al. In situ localization of collagen production by chondrocytes and osteoblasts in fracture callus. JBJS(Am)， 1989， 71∶69-77.
3 Hughes SS， Hicks DG， O'Keefe RJ， et al. Shared phenotypic expression of osteoblasts and chondrocytes in fracture callus. J Bone Miner Res， 1995， 10∶523-544.
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4 Stafford HJ， Roberts MT， Oni OOA， et al. Localization of bone-forming cells during fracture healing by osteocalcin immunocytochemistry： An experimental study of the rabbit tibia. J Orthop Res， 1994， 12∶29-39.
5 Hirakawa K， Hirota S， Ikeda T， et al. Localization of the mRNA for bone matrix proteins during fracture healing as determined by in situ hybridization. J Bone Miner Res， 1994， 9∶1551-1557.
6 Bolander ME， Young MF， Fisher LW， et al. Osteonectin cDNA sequence reveals potential binding regions for calcium and hydroxyapatite and shows homologies with both abasement membrane protein (SPARC) and a serine proteinase inhibitor (Ovomucoid). Pro Natl Acad Sci USA. 1988， 85∶2919-2923.
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7 Sandell LJ， Morris N， Robbins JR， et al. Alternatively spliced type Ⅱ procollagen mRNAs define distinct populations of cells during vertebral development： Differential expression of the amino-propeptide. The Journal of Cell Biology， 1991， 114∶1307-1319.
8 Sommer B， Bickel M， Hofstetter W， et al. Expression of matrix proteins during the development of mineralized tissues. Bone， 1996， 19∶371-380.
9 Weinreb M， Shinar D， Rodan GA. Different pattern of alkaline phosphatase， ostteopontin and osteocalcin expression in developing rat bone visualized by in situ hybridization. J Bone Miner Res， 1990， 5∶831-842.
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10 Ikeda T， Nomura S， Yamagushi A， et al. In situ hybridization of bone matrix proteins in undecalcified adult rat bone section. J Histochem Cytochem， 1992， 40∶1079-1088.
11 Alberius P， Johnell O. Repair of intramembranous bone fractures and defect in rats. J Craniomaxillofac Surg， 1991， 19∶15.
12 Linkhart TA， Mohan S， Baylink DJ. Growth factors for bone growth and repair： IGF， TGF-β and BMP. Bone， 1996， 19(1s)∶1s-12s.
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13 Andrew JG， Hoyland J， Freemont AJ， et al. Insulin-like growth factor gene expression in human fracture callus. Calcif Tissue Int， 1993， 53∶97-102.
14 Joyce ME， Jingushi S， Bolander ME. Transforming growth factor-β in the regulation of fracture repair. Orthop Clin North Am， 1990， 21∶199.
15 Andrew JG， Hoyland J， Andrew SM， et al. Demonstration of TGF-β mRNA by in situ hybridization in normal human fracture healing. Calcif Tissue Int， 1993， 52∶74-78.
, 百拇医药
16 Jingushi S， Heydemann A， Kana SK， et al. Acidic fibroblast growth factor (aFGF) injection stimulates cartilage enlargement and inhibits cartilage gene expression in rat fracture healing. J Orthop Res， 1990， 8∶364-371.
17 Andrew JG， Hoyland JA， Freemont AJ， et al. Platelet-derived growth factor expression in normally healing human fractures. Bone， 1995， 16∶455-460.
(收稿：1996-12-19 修回：1997-10-08)
(本文编辑：向勇), http://www.100md.com