海南省汉族和黎族中乙型肝炎病毒前核心基因变异的研究
作者：王华民 屠红 李平洋 占志农 闻玉梅
单位：570102 海口，海南医学院(王华民、占志农)；上海医科大学(屠红、李平洋、闻玉梅)
关键词：
中华传染病杂志980119 乙型肝炎病毒(HBV)前C区第1896位核苷酸突变导致E-阴性变异株多见于远东及地中海地区。为研究E-阴性变异株在我国不同地区的分布情况，最近我们进行了分子流行病学研究，发现海口市HBV株中E-阴性变异率较其他城市显著低下，为阐明这一差别的原因系地区性还是因不同民族间的差别，对海南省59例汉族及66例黎族乙型肝炎患者及无症状HBV携带者中的HBV前C区E-阴性变异株进行了研究，现报告如下。
材料和方法
一、血清标本来源
, 百拇医药
于1996年3月至5月收集我院附属医院及乐东县、白沙县医院门诊或住院乙型肝炎患者及HBsAg阳性无症状携带者血清125份，其中汉族59份(男性40份，女性19份，平均年龄30.5岁)，黎族66份(男性50份，女性16份，平均年龄24.9岁)。将不同民族的血清分成两组，汉族HBeAg阳性组21份，HBeAg阴性组38份；黎族HBeAg阳性组28份，HBeAg阴性组38份。
二、方法
HBV血清标志(HBVM)均用ELISA检测(上海科华公司药盒)，HBV DNA及前C区变异株用聚合酶链反应(PCR)及寡核苷酸探针杂交[1]，试剂由E Merck公司及Boehringer公司提供。
结 果
血清HBV总阳性率为76.8%(96/125)，其中汉族74.6%，黎族78.8%，两民族间的HBV DNA阳性率无差异性。96份血清中的PCR阳性产物与三种寡核苷酸探针杂交(Mo为野毒株基因序列，M1为nt 1896位点突变株序列，M2为nt 1896及1899位双点突变株序列)。其检出有突变株感染的(包括单纯突变株感染及突变株与野生株混合感染)共8例(8.3%)，其中汉族突变株6例(13.6%)，黎族2例(3.8%)。在三种探针杂交均阴性的30例中27例为黎族标本，仅3例为汉族标本，两者杂交阴性率分别为51.9%及6.8%，差异有显著性(P<0.05)。96例HBV DNA阳性标本中HBeAg阳性为47例(48.9%)，抗-HBe阳性37例(38.5%)，HBeAg及抗-HBe均为阴性者12例(12.5%)，抗-HBe阳性组标本的突变为10.8%(4/37)，其中单独M1/M2阳性者为3例，HBeAg阳性组为8.5%(4/47)，其中单独M1/M2阳性者仅1例。HBe系统均阴性组未检出突变株。值得注意的是，抗-HBe阳性的4例出现变异株的患者均为汉族，黎族中未见有变异株。
, 百拇医药
讨 论
本研究发现在海南省黎族与汉族HBV感染中，HBV出现第1896位核苷酸突变的E-阴性毒株(A1896)比例低下，但民族间的变异株发生率并无显著差别。因此，海南省A1896变异株少见的原因可能主要与地区流行毒株相关，而与民族无直接相关性。血清HBV DNA阳性率在两种民族间亦无差别。A1896株在无症状HBV携带者中的存在，不支持这种变异株有更强的致病性。
有文献报道我国不同地区血清抗-HBe阳性HBV感染者标本中A1896突变株的阳性率不同，武汉市为78.9%，海口市为17.6%，上述结果再次证实了此结论。值得注意的是，在海南省HBV感染者中虽然38.5%有病毒复制，但其中仅有10.9%检出A1896株。近来有C基因启动子区变异影响HBeAg表达的报道[2]。可能这些未检出A1896株变异患者的病毒株存在Pre-C区除第1896位外的变异或C基因启动子的变异。此外，还发现海南省30%的PCR阳性标本不与M0、M1/M2探针杂交，然而其他城市则90%以上的PCR阳性标本可与上述探针杂交，结果提示海南省的HBV株基因有不同的核苷酸序列，值得深入研究。
, http://www.100md.com
我们曾报道，我国(上海地区)HBV株PreC区第15位密码子序列多为CCT，而法国毒株该位密码子序列多为CCC。因此我国毒株在第28位密码子中第1896位核苷酸区由G突变为A后，PreC区中的病毒核酸包装信号的二级结构方才稳定。因此，我国多见A1896突变[3]。在海南省标本中多数均未见A1896变异株，提示对比HBV海南株上海株与法国株第15位密码子的异同将可揭示海南省A1896变异株少见的机理。
参考文献
1 屠红，熊思东，兰林，等.快速检测乙型肝炎病毒前核心区基因变异株方法的建立与初步应用.上海医科大学学报，1995，22：161-163..
2 Okamoto H, Tsuda F, Akahane Y, et al. Hepatitis B virus with mutations in the core promoter for an e antigen-negative phenotype in carriers with antibody to e antigen. J Virol, 1994,68:8102-8110.
3 Li JS, Tong SP, Wen YM, et al. Hepatitis B virus genotype A rarely circulates as an HBe-minus mutant:posible contribution of a single nucleotide in the precore region. J Virol, 1993,67:5402-5410., 百拇医药
单位：570102 海口，海南医学院(王华民、占志农)；上海医科大学(屠红、李平洋、闻玉梅)
关键词：
中华传染病杂志980119 乙型肝炎病毒(HBV)前C区第1896位核苷酸突变导致E-阴性变异株多见于远东及地中海地区。为研究E-阴性变异株在我国不同地区的分布情况，最近我们进行了分子流行病学研究，发现海口市HBV株中E-阴性变异率较其他城市显著低下，为阐明这一差别的原因系地区性还是因不同民族间的差别，对海南省59例汉族及66例黎族乙型肝炎患者及无症状HBV携带者中的HBV前C区E-阴性变异株进行了研究，现报告如下。
材料和方法
一、血清标本来源
, 百拇医药
于1996年3月至5月收集我院附属医院及乐东县、白沙县医院门诊或住院乙型肝炎患者及HBsAg阳性无症状携带者血清125份，其中汉族59份(男性40份，女性19份，平均年龄30.5岁)，黎族66份(男性50份，女性16份，平均年龄24.9岁)。将不同民族的血清分成两组，汉族HBeAg阳性组21份，HBeAg阴性组38份；黎族HBeAg阳性组28份，HBeAg阴性组38份。
二、方法
HBV血清标志(HBVM)均用ELISA检测(上海科华公司药盒)，HBV DNA及前C区变异株用聚合酶链反应(PCR)及寡核苷酸探针杂交[1]，试剂由E Merck公司及Boehringer公司提供。
结 果
血清HBV总阳性率为76.8%(96/125)，其中汉族74.6%，黎族78.8%，两民族间的HBV DNA阳性率无差异性。96份血清中的PCR阳性产物与三种寡核苷酸探针杂交(Mo为野毒株基因序列，M1为nt 1896位点突变株序列，M2为nt 1896及1899位双点突变株序列)。其检出有突变株感染的(包括单纯突变株感染及突变株与野生株混合感染)共8例(8.3%)，其中汉族突变株6例(13.6%)，黎族2例(3.8%)。在三种探针杂交均阴性的30例中27例为黎族标本，仅3例为汉族标本，两者杂交阴性率分别为51.9%及6.8%，差异有显著性(P<0.05)。96例HBV DNA阳性标本中HBeAg阳性为47例(48.9%)，抗-HBe阳性37例(38.5%)，HBeAg及抗-HBe均为阴性者12例(12.5%)，抗-HBe阳性组标本的突变为10.8%(4/37)，其中单独M1/M2阳性者为3例，HBeAg阳性组为8.5%(4/47)，其中单独M1/M2阳性者仅1例。HBe系统均阴性组未检出突变株。值得注意的是，抗-HBe阳性的4例出现变异株的患者均为汉族，黎族中未见有变异株。
, 百拇医药
讨 论
本研究发现在海南省黎族与汉族HBV感染中，HBV出现第1896位核苷酸突变的E-阴性毒株(A1896)比例低下，但民族间的变异株发生率并无显著差别。因此，海南省A1896变异株少见的原因可能主要与地区流行毒株相关，而与民族无直接相关性。血清HBV DNA阳性率在两种民族间亦无差别。A1896株在无症状HBV携带者中的存在，不支持这种变异株有更强的致病性。
有文献报道我国不同地区血清抗-HBe阳性HBV感染者标本中A1896突变株的阳性率不同，武汉市为78.9%，海口市为17.6%，上述结果再次证实了此结论。值得注意的是，在海南省HBV感染者中虽然38.5%有病毒复制，但其中仅有10.9%检出A1896株。近来有C基因启动子区变异影响HBeAg表达的报道[2]。可能这些未检出A1896株变异患者的病毒株存在Pre-C区除第1896位外的变异或C基因启动子的变异。此外，还发现海南省30%的PCR阳性标本不与M0、M1/M2探针杂交，然而其他城市则90%以上的PCR阳性标本可与上述探针杂交，结果提示海南省的HBV株基因有不同的核苷酸序列，值得深入研究。
, http://www.100md.com
我们曾报道，我国(上海地区)HBV株PreC区第15位密码子序列多为CCT，而法国毒株该位密码子序列多为CCC。因此我国毒株在第28位密码子中第1896位核苷酸区由G突变为A后，PreC区中的病毒核酸包装信号的二级结构方才稳定。因此，我国多见A1896突变[3]。在海南省标本中多数均未见A1896变异株，提示对比HBV海南株上海株与法国株第15位密码子的异同将可揭示海南省A1896变异株少见的机理。
参考文献
1 屠红，熊思东，兰林，等.快速检测乙型肝炎病毒前核心区基因变异株方法的建立与初步应用.上海医科大学学报，1995，22：161-163..
2 Okamoto H, Tsuda F, Akahane Y, et al. Hepatitis B virus with mutations in the core promoter for an e antigen-negative phenotype in carriers with antibody to e antigen. J Virol, 1994,68:8102-8110.
3 Li JS, Tong SP, Wen YM, et al. Hepatitis B virus genotype A rarely circulates as an HBe-minus mutant:posible contribution of a single nucleotide in the precore region. J Virol, 1993,67:5402-5410., 百拇医药