积雪草挥发油成分分析及其抗抑郁作用研究
作者：秦路平 丁如贤 张卫东△ 郑水庆 管阳太▲ 胡耀铭□
单位：第二军医大学药学院生药学教研室,上海,200433; △第二军医大学药学院天然药物化学教研室;▲第二军医大学长海医院神经内科; □复旦大学中心实验室
关键词：
第二军医大学学报980231 积雪草为伞形科植物积雪草[Centella asiatica (L.) Urban]的干燥全草，首载于《神农本草经》,具清热利湿、解毒消肿之功效,用于湿热黄疸、痈肿疮毒、 跌打损伤等症。最近的研究表明，积雪草的提取物具有很好的抗抑郁和抗肿瘤作用[1,2]。本实验对积雪草挥发油成分进行气质联用(GC-MS)分析,并对挥发油进行了抗抑郁作用研究。
1 材料和方法
1.1 挥发油的GC-MS分析
, 百拇医药
1.1.1 材料 积雪草购自上海市药材公司, 经鉴定为伞形科植物积雪草的干燥全草。
1.1.2 挥发油的提取 按《中国药典》(1995年版)附录挥发油测定项进行,水蒸气蒸馏而得。
1.1.3 实验条件 仪器: Finnigan MAT ITD 800 GC/MS/DS。GC条件: HP-5MS石英毛细管柱(30 m×0.25 mm), 进样口温度260℃，柱温150℃(3 min)～250 ℃(10 min),升温速度4℃/min,载气He气,载气压力0.25 MPa;进样量0.1 μl。MS条件:电离方式EI,电离电压70 eV,灯丝电流80 μA,倍增器电压2 200 V,离子焰温度220℃;传输线温度230℃。
1.1.4 数据处理及联机检索 利用气质联用仪计算机的NBS谱库自动检索各组分的质谱数据,并对机检结果参考有关标准图谱进行核对和补充检索,经色谱峰面积归一化法计算,得出各组分的相对含量。
, 百拇医药
1.2 挥发油的抗抑郁作用研究
1.2.1 药品 挥发油:取积雪草挥发油加等量吐温-80,研匀,加蒸馏水稀释成1%,2%的乳浊液。米帕明(Imipramine)用蒸馏水配制作为阳性对照药。 阴性对照组采用等容积的1%或2%的吐温-80水溶液。
1.2.2 动物 Wistar大鼠和昆明种小鼠均由第二军医大学实验动物中心提供。
1.2.3 利舍平眼睑下垂及降温试验 参考文献[3]方法,取体重150～200 g大鼠40只,雌雄各半,按表2随机分组。各受试药物灌胃,给药后2 h,皮下注射利舍平3.0 mg/kg,30 min后观察记录大鼠眼睑下垂情况,并测肛温。
1.2.4 电刺激小鼠角膜法 取体重20～25 g昆明种小鼠40只,随机分为4组: 对照组、米帕明25 mg/kg组、积雪草挥发油100，200 μl/kg组, 用受试药物灌胃,连续7 d。末次给药后2 h,按文献[4]方法, 用电极脉冲刺激仪刺激小鼠角膜，观察5 min内小鼠角膜最长持续不动状态时间。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 挥发油成分的GC-MS分析 挥发油成分的GC-MS分析结果见表1，从中分离鉴定出45个成分，其中含量较高的成分有石竹烯(Caryophyllene)、法呢醇(Farnesol)、 3，7，11-trimethyl-(E, E)-2,6,10-dodecatrien-1-ol、 3-二十烷炔
表1 积雪草挥发油成分 No.
Constituents
Formula
Content(%)
1
3,7-dimethyl-1,6-octadien-3-ol
, 百拇医药
C10H18O
0.038
2
3-nonen-2-one
C 9H16O
0.027
3
α,α,4-trimethyl-3-cyc-
C10H18O
0.110
lohexene-1-methanol
, 百拇医药
4
2,7,7-trimethyl-bicyclo-
C12H18O2
0.024
[3,1,1]hept-2-en-6-ol
5
5-methyl-2-(1-methyl-
C10H18O
0.059
ethenyl)-(R)-4-hexen-1-ol
, 百拇医药
6
(Z)-3-hexadecene
C16H32
0.042
7
4-methyl-1-(1-methylethyl)-
C10H18O
-
bicyclo[3,1,0]hexan-3-ol
8
bornyl actate
, 百拇医药
C12H20O2
0.248
9
α-cubebene
C15H24
0.454
10
copaene
C15H24
5.625
11
, 百拇医药
elemene
C15H24
4.419
12
6,9-octadecadiynoic
C19H30O2
0.267
acid methyl ester
13
caryophyllene
C15H24
, 百拇医药
19.358
14
longifolene
C15H24
4.209
15
farnesol
C15H26O
17.664
16
decahydro-4,8,8-
, http://www.100md.com
C15H24
2.758
trimethyl-9-methylene-
1,4-methanoazulene
17
octahydro-1,9,9-
C15H24
1.955
trimethyl-4-methylene-1H-
3a,7-methanoazulene
, 百拇医药
18
1,2,4α,5,6,8α-hexahydro-
C15H24
3.815
4,7-dimethyl-1-(1-methylethyl)-
naphthalene
19
decahydro-1,6-bis(methylene)-
C15H24
0.594
, http://www.100md.com
4-(1-methylethyl)-naphthalene
20
1,2,3,4,4α,5,6,8α-octahydro-
C15H24
1.801
7-methyl-4-methylene-1-(1-
methylethyl)-naphthalene
21
1,1α,4,4α,5,5,7,8-octahy-
C15H24
, 百拇医药
-
dro-2,4α,8,8-tetramethyl-
cyclopropa[d]naphthalene
22
1α,2,3,4,4α,5,6,7b-octahydro-
C15H24
0.105
1,1,,4,7-tetramethyl-1H-
cycloprop[e]azulene
23
, 百拇医药
decahydro-1,1,7-trimethyl-
C15H24
1.509
4-methylene-cyclopro(E)azulene
24
ledol
C15H26O
1.142
25
3,7,11-trimethyl-(E,E)-
, 百拇医药
C15H26O
12.167
2,6,10-dodecatrien-1-ol
26
(E)-6-hexadecen-4-yne
C16H28
0.299
27
thujopsene
C15H24
, 百拇医药
0.576
28
3-eicosyne
C20H38
8.069
29
cedrol
C15H26O
0.535
30
(E)-4-hexadecene-6-yne
, 百拇医药
C16H28
0.903
31
4,4α,5,6,7,8-hexahydro-4,C15H22O
0.932
4α-dimethyl-6-(1-methylethyl)-
2(3H)-naphthalenone
32
3,7,11-trimethyl-(E,E)-
C15H26O
, http://www.100md.com
-
2,6,10-dodecatrien-1-ol
33
1,2,3,4,4α,7,8,8α-octahydro-
C15H26O
1.727
1,6-dimethyl-4-(1-methylethyl)-
1-naphthalenol
34
decahydro-1,1,7-trimethyl-
, 百拇医药
C15H24
1.629
4-methylene-4-1H-
cycloprop[e]azulene
35
1,1α,4,5,6,7,7α,7b-octahydro-
C15H22O
0.578
1,1,7,7α-tetramethyl-2H-
cyclopropa[a]naphthalen-2-one
, 百拇医药
36
1-(1,3α,4,5,6,7-hexahydro-4-
C14H20O2
0.566
hydroxy-3,8-dimethyl-5-azulenyl)-
ethanone
37
7-ethynyl-4α,5,6,7,8,8α-
C14H18O
0.315
, 百拇医药
hexahydro-1,4α-dimethyl-
2(1H)-naphthalemone
38
1,3,3-trimethyl-2-(3-methyl-2-
C15H24O
0.570
methylene-3-butenylidene)-
cyclohexanol
39
5-decyloctahydro-1H-indene
, http://www.100md.com
C19H36
0.475
40
2,6,10-trimethyl-(E,E,E)-
C15H22O
-
2,6,9,11-dodecatetraenal
41
9-eicosyne
C20H38
, 百拇医药
0.376
42
6,10,14-trimethyl-2-pentadecanone
C18H36O
0.178
43
hexadecanoic acid
C15H32O2
0.232
44
, http://www.100md.com 1-heptadecanol
C17H36O
3.464
45
3-octyl-oxiraneoctanoic-
C19H36O3
0.183
acid methyl ester
(3-eicosyne)、 榄香烯(Elemene)和长叶烯(Longifolene)等。
, 百拇医药 2.2 挥发油的抗抑郁作用
2.2.1 对利舍平引起的眼睑下垂及体温下降的影响 积雪草挥发油(50，100 μl/kg)及米帕明(20 mg/kg)具有明显预防利舍平3.0 mg/kg 引起的大鼠眼睑下垂及体温下降作用(表2)。
表2 眼睑下垂率及体温下降比较(n=10,
±s) 分组
眼睑下垂(%)
体温下降(℃)
对照
90
0.92±0.14
米帕明(20 mg/kg)
, 百拇医药
30**
0.25±0.05**
挥发油(50 μl/kg)
40**
0.26±0.06**
挥发油(100 μl/kg)
30**
0.25±0.05**
**P<0.01与对照组比较
2.2.2 对小鼠角膜最长持续不动状态时间的影响 与对照组(200.1±35.2)s相比, 积雪草挥发油(100,200 μl/kg)及米帕明(25 mg/kg)使电刺激小鼠角膜引起的最长持续不动状态时间分别缩短至(150.4±50.3) s(P<0.05), (118.6±40.3) s(P<0.05), (85.2±42.1) s (P<0.01),差异显著。
, http://www.100md.com
3 讨 论
关于积雪草化学成分的研究,国外已从中分离鉴定出数种三萜皂甙和三萜酸类。积雪草为伞形科植物,该科植物大多含挥发油,具芳香气味, 因此我们对积雪草的挥发油成分进行了GC-MS分析,从中分离鉴定出45种成分，为该药用植物的进一步研究积累了资料。 本实验对积雪草挥发油抗抑郁作用的初步研究表明, 积雪草挥发油对利舍平引起的大鼠眼睑下垂和体温下降具有明显的拮抗作用; 可明显缩短电刺激小鼠角膜引起的最长持续不动状态时间,说明积雪草挥发油具有抗实验性抑郁作用。
关键词 积雪草; 挥发油; 安定药，弱
中国图书资料分类法分类号 R 284.1
秦路平,男,1966年7月生,博士,讲师
参 考 文 献
, 百拇医药
1 Sakina MR, Dandiya PC. A psychoneuropharmacological profile of Centella asiatica extract. Fitoterapia, 1990,61(4):291
2 Babu TD, Kuttan G, Padikkala J. Cytotoxic and anti- tumour properties of certain taxa of Umberlliferae with special reference to Centella asiatica (L.) Urban. J Ethnopharmacol, 1995,48(1):53
3 Burkard WP, Bonetri EP, Prada MD, et al. Pharmacological profile of moclobemide, a short acting and reversible inhibitor of monamine oxidase type A. J Pharmacol Exp Ther, 1989,248(1):391
4 吕俊华,库宝善. 电刺激小鼠角膜诱发的不动状态——一种新的抗抑郁药研究动物模型. 北京医科大学学报,1990,22(5):354
5 徐淑云. 药理实验方法学. 第2版,北京:人民卫生出版社,1991.641～642
(1997-08-10收稿, 1997-12-15修回), 百拇医药
单位：第二军医大学药学院生药学教研室,上海,200433; △第二军医大学药学院天然药物化学教研室;▲第二军医大学长海医院神经内科; □复旦大学中心实验室
关键词：
第二军医大学学报980231 积雪草为伞形科植物积雪草[Centella asiatica (L.) Urban]的干燥全草，首载于《神农本草经》,具清热利湿、解毒消肿之功效,用于湿热黄疸、痈肿疮毒、 跌打损伤等症。最近的研究表明，积雪草的提取物具有很好的抗抑郁和抗肿瘤作用[1,2]。本实验对积雪草挥发油成分进行气质联用(GC-MS)分析,并对挥发油进行了抗抑郁作用研究。
1 材料和方法
1.1 挥发油的GC-MS分析
, 百拇医药
1.1.1 材料 积雪草购自上海市药材公司, 经鉴定为伞形科植物积雪草的干燥全草。
1.1.2 挥发油的提取 按《中国药典》(1995年版)附录挥发油测定项进行,水蒸气蒸馏而得。
1.1.3 实验条件 仪器: Finnigan MAT ITD 800 GC/MS/DS。GC条件: HP-5MS石英毛细管柱(30 m×0.25 mm), 进样口温度260℃，柱温150℃(3 min)～250 ℃(10 min),升温速度4℃/min,载气He气,载气压力0.25 MPa;进样量0.1 μl。MS条件:电离方式EI,电离电压70 eV,灯丝电流80 μA,倍增器电压2 200 V,离子焰温度220℃;传输线温度230℃。
1.1.4 数据处理及联机检索 利用气质联用仪计算机的NBS谱库自动检索各组分的质谱数据,并对机检结果参考有关标准图谱进行核对和补充检索,经色谱峰面积归一化法计算,得出各组分的相对含量。
, 百拇医药
1.2 挥发油的抗抑郁作用研究
1.2.1 药品 挥发油:取积雪草挥发油加等量吐温-80,研匀,加蒸馏水稀释成1%,2%的乳浊液。米帕明(Imipramine)用蒸馏水配制作为阳性对照药。 阴性对照组采用等容积的1%或2%的吐温-80水溶液。
1.2.2 动物 Wistar大鼠和昆明种小鼠均由第二军医大学实验动物中心提供。
1.2.3 利舍平眼睑下垂及降温试验 参考文献[3]方法,取体重150～200 g大鼠40只,雌雄各半,按表2随机分组。各受试药物灌胃,给药后2 h,皮下注射利舍平3.0 mg/kg,30 min后观察记录大鼠眼睑下垂情况,并测肛温。
1.2.4 电刺激小鼠角膜法 取体重20～25 g昆明种小鼠40只,随机分为4组: 对照组、米帕明25 mg/kg组、积雪草挥发油100，200 μl/kg组, 用受试药物灌胃,连续7 d。末次给药后2 h,按文献[4]方法, 用电极脉冲刺激仪刺激小鼠角膜，观察5 min内小鼠角膜最长持续不动状态时间。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 挥发油成分的GC-MS分析 挥发油成分的GC-MS分析结果见表1，从中分离鉴定出45个成分，其中含量较高的成分有石竹烯(Caryophyllene)、法呢醇(Farnesol)、 3，7，11-trimethyl-(E, E)-2,6,10-dodecatrien-1-ol、 3-二十烷炔
表1 积雪草挥发油成分 No.
Constituents
Formula
Content(%)
1
3,7-dimethyl-1,6-octadien-3-ol
, 百拇医药
C10H18O
0.038
2
3-nonen-2-one
C 9H16O
0.027
3
α,α,4-trimethyl-3-cyc-
C10H18O
0.110
lohexene-1-methanol
, 百拇医药
4
2,7,7-trimethyl-bicyclo-
C12H18O2
0.024
[3,1,1]hept-2-en-6-ol
5
5-methyl-2-(1-methyl-
C10H18O
0.059
ethenyl)-(R)-4-hexen-1-ol
, 百拇医药
6
(Z)-3-hexadecene
C16H32
0.042
7
4-methyl-1-(1-methylethyl)-
C10H18O
-
bicyclo[3,1,0]hexan-3-ol
8
bornyl actate
, 百拇医药
C12H20O2
0.248
9
α-cubebene
C15H24
0.454
10
copaene
C15H24
5.625
11
, 百拇医药
elemene
C15H24
4.419
12
6,9-octadecadiynoic
C19H30O2
0.267
acid methyl ester
13
caryophyllene
C15H24
, 百拇医药
19.358
14
longifolene
C15H24
4.209
15
farnesol
C15H26O
17.664
16
decahydro-4,8,8-
, http://www.100md.com
C15H24
2.758
trimethyl-9-methylene-
1,4-methanoazulene
17
octahydro-1,9,9-
C15H24
1.955
trimethyl-4-methylene-1H-
3a,7-methanoazulene
, 百拇医药
18
1,2,4α,5,6,8α-hexahydro-
C15H24
3.815
4,7-dimethyl-1-(1-methylethyl)-
naphthalene
19
decahydro-1,6-bis(methylene)-
C15H24
0.594
, http://www.100md.com
4-(1-methylethyl)-naphthalene
20
1,2,3,4,4α,5,6,8α-octahydro-
C15H24
1.801
7-methyl-4-methylene-1-(1-
methylethyl)-naphthalene
21
1,1α,4,4α,5,5,7,8-octahy-
C15H24
, 百拇医药
-
dro-2,4α,8,8-tetramethyl-
cyclopropa[d]naphthalene
22
1α,2,3,4,4α,5,6,7b-octahydro-
C15H24
0.105
1,1,,4,7-tetramethyl-1H-
cycloprop[e]azulene
23
, 百拇医药
decahydro-1,1,7-trimethyl-
C15H24
1.509
4-methylene-cyclopro(E)azulene
24
ledol
C15H26O
1.142
25
3,7,11-trimethyl-(E,E)-
, 百拇医药
C15H26O
12.167
2,6,10-dodecatrien-1-ol
26
(E)-6-hexadecen-4-yne
C16H28
0.299
27
thujopsene
C15H24
, 百拇医药
0.576
28
3-eicosyne
C20H38
8.069
29
cedrol
C15H26O
0.535
30
(E)-4-hexadecene-6-yne
, 百拇医药
C16H28
0.903
31
4,4α,5,6,7,8-hexahydro-4,C15H22O
0.932
4α-dimethyl-6-(1-methylethyl)-
2(3H)-naphthalenone
32
3,7,11-trimethyl-(E,E)-
C15H26O
, http://www.100md.com
-
2,6,10-dodecatrien-1-ol
33
1,2,3,4,4α,7,8,8α-octahydro-
C15H26O
1.727
1,6-dimethyl-4-(1-methylethyl)-
1-naphthalenol
34
decahydro-1,1,7-trimethyl-
, 百拇医药
C15H24
1.629
4-methylene-4-1H-
cycloprop[e]azulene
35
1,1α,4,5,6,7,7α,7b-octahydro-
C15H22O
0.578
1,1,7,7α-tetramethyl-2H-
cyclopropa[a]naphthalen-2-one
, 百拇医药
36
1-(1,3α,4,5,6,7-hexahydro-4-
C14H20O2
0.566
hydroxy-3,8-dimethyl-5-azulenyl)-
ethanone
37
7-ethynyl-4α,5,6,7,8,8α-
C14H18O
0.315
, 百拇医药
hexahydro-1,4α-dimethyl-
2(1H)-naphthalemone
38
1,3,3-trimethyl-2-(3-methyl-2-
C15H24O
0.570
methylene-3-butenylidene)-
cyclohexanol
39
5-decyloctahydro-1H-indene
, http://www.100md.com
C19H36
0.475
40
2,6,10-trimethyl-(E,E,E)-
C15H22O
-
2,6,9,11-dodecatetraenal
41
9-eicosyne
C20H38
, 百拇医药
0.376
42
6,10,14-trimethyl-2-pentadecanone
C18H36O
0.178
43
hexadecanoic acid
C15H32O2
0.232
44
, http://www.100md.com 1-heptadecanol
C17H36O
3.464
45
3-octyl-oxiraneoctanoic-
C19H36O3
0.183
acid methyl ester
(3-eicosyne)、 榄香烯(Elemene)和长叶烯(Longifolene)等。
, 百拇医药 2.2 挥发油的抗抑郁作用
2.2.1 对利舍平引起的眼睑下垂及体温下降的影响 积雪草挥发油(50，100 μl/kg)及米帕明(20 mg/kg)具有明显预防利舍平3.0 mg/kg 引起的大鼠眼睑下垂及体温下降作用(表2)。
表2 眼睑下垂率及体温下降比较(n=10,
±s) 分组眼睑下垂(%)
体温下降(℃)
对照
90
0.92±0.14
米帕明(20 mg/kg)
, 百拇医药
30**
0.25±0.05**
挥发油(50 μl/kg)
40**
0.26±0.06**
挥发油(100 μl/kg)
30**
0.25±0.05**
**P<0.01与对照组比较
2.2.2 对小鼠角膜最长持续不动状态时间的影响 与对照组(200.1±35.2)s相比, 积雪草挥发油(100,200 μl/kg)及米帕明(25 mg/kg)使电刺激小鼠角膜引起的最长持续不动状态时间分别缩短至(150.4±50.3) s(P<0.05), (118.6±40.3) s(P<0.05), (85.2±42.1) s (P<0.01),差异显著。
, http://www.100md.com
3 讨 论
关于积雪草化学成分的研究,国外已从中分离鉴定出数种三萜皂甙和三萜酸类。积雪草为伞形科植物,该科植物大多含挥发油,具芳香气味, 因此我们对积雪草的挥发油成分进行了GC-MS分析,从中分离鉴定出45种成分，为该药用植物的进一步研究积累了资料。 本实验对积雪草挥发油抗抑郁作用的初步研究表明, 积雪草挥发油对利舍平引起的大鼠眼睑下垂和体温下降具有明显的拮抗作用; 可明显缩短电刺激小鼠角膜引起的最长持续不动状态时间,说明积雪草挥发油具有抗实验性抑郁作用。
关键词 积雪草; 挥发油; 安定药，弱
中国图书资料分类法分类号 R 284.1
秦路平,男,1966年7月生,博士,讲师
参 考 文 献
, 百拇医药
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(1997-08-10收稿, 1997-12-15修回), 百拇医药