脐血移植研究现状
作者：刘 平
单位：广西百色地区人民医院 (百色 533000)
关键词：
右江民族医学院学报9903118 骨髓移植(BMT)是治疗骨髓衰竭、白血病、恶性肿瘤、重症免疫缺陷等最有效的方法之一，它的有效性已为世人所公认[1，2]，BMT为白血病等恶性肿瘤患者提供长期无病存活或根治的机会最多[3]。但BMT因受供者HLA配型的限制和供者年龄、心理、病情、经济能力以及医疗机构条件等限制，实际上获得这种治疗机会患者人数是很少的。随着计划生育在我国的开展及深入，能获得HLA匹配相合的机会更少。自从70年代初Kudtzon等[4]发现人脐血体外培养粒单系集落形成单位(CFU—GM)产率，明显高于成人外周血，富含造血祖细胞成为可代替骨髓的另一个造血干细胞来源。经Gluckman首次应用于临床获得成功[5]。现将脐血研究作以下综述。
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1 脐血实验室研究
脐血中含有大量的造血干/祖细胞和各向造血祖细胞，其浓度大于或近似骨髓，脐血中粒单系集落形成单位(CFU—GM)、红系爆或落形单位(BFU—E)、混合系集落形成单位(CFU—Mix)产率近似或大于骨髓。国内的多项研究亦证实脐血(CFU-GM、BFU-5,CFU-GEMM(粒、红、巨噬、巨核细胞集落形成单位)近似或大于骨髓[6～10]。张林生等报道，脐血经体外培养21天初始造血祖细胞(SCFU-BI)含量可达骨髓的10倍左右[10]，脐血中CD+34、CD+34CD+38、CD+34CD+33和CD-3445RA-细胞的比例与骨髓相似；脐血的CD+3445RO-细胞明显高于骨髓[11]。CD+34CD-38在脐血CD+34中占4%，在骨髓CD+34中占1%[2]，沈柏均认为[12]：①脐血不但存在骨髓所含有的各种类型的造血干/祖细胞，而且可培养出更原始的造血细胞。CFU-CGMM数量较骨髓多2倍；②脐血造血细胞对集落刺激因子更敏感；③脐血中CFU-F产率比骨髓少但比周围血多，具备支持造血的特性；④脐血CFU-GM有更强的增殖能力，每个集落所含的子细胞更多；⑤脐血造血干/祖细胞二次集落形成率比骨髓细胞大30倍，形成的二次集落仍具多能性，单个CD+34可再植传5代以上；⑥脐血中造血刺激因子CSF-G、CSF-GM、EPO浓度较成人血高，脐血浆可增强骨髓或脐血造血干/祖细胞的再植率，而成人周围血无此作用。所以脐血可作为造血干细胞移植的另一个来源。
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2 脐血的采集、分离、保存
2.1 供者的选择 母亲及新生儿均应健康，有下列情况者不能采集[2]：①妊娠不足32周；②胎盘剥离超过12h；③羊水内混有胎粪；④产妇发热或贫血；⑤胎儿有呼吸窘迫症；⑥产前羊水细胞和胎盘绒毛膜检查证明有遗传病、传染病。
2.2 采集 在胎儿娩出结扎脐带后，在第三产程于胎盘端作脐静脉穿刺，借助宫缩可使脐血顺利流入贮血袋中。沈柏均等已采血100余次，可收集血量±100ml(30～280m)[12]。Thierry等报道[2]胎儿娩出后，立即距脐5～7cm处断脐，从脐静脉、胎盘表面小血管内采血，在167份血样中收集到±112ml(30～280m)，未见对母婴有任何影响。汪赤宇等报道[6]胎儿娩出2min后断脐，可避免过早断脐引起新生儿血压上升诱发脑室出血。若不采用密闭采集法，而扩大到全胎盘血，采血量可扩大一倍，但污染的可能性也要重视和处理[13]。
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2.3 保存和分离 在4℃、25℃存放24h的脐血祖细胞集落数无明显减少，超过3天的减少30%～50%，若在37℃有核细胞和造血细胞逐日减少，第3日降到零[12]。脐血在4℃开始发生溶血的时间为29.8±13.9天[14]。沈柏均等报道[12]采血后分离提取单个核细胞，经程控降温至-80℃后移至液氮中。单纯离心分离、白膜、不同密度梯度离心分离法均有造血祖细胞的丢失，CFU-GM的回收率为16%～60%；用羟乙基淀粉法或氯化铵溶解法去除红细胞时也有造血干细胞的丢失[2]。故多数作者均主张采血后不作任何处理全血冻存。
有研究显示经离心后-80℃冻存的脐血，4个月后仍有相当大的回收率和细胞活力[1,15]。为了适应脐血库的建立，制成脐血单细胞悬液在液氮冻存5年以上仍有85%细胞保持活力和功能[9]。有的说单细胞悬液可有效地保存10年以上[1]。
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3 脐血移植的临床研究
1989年9月Gluckman等对1例范可尼氏贫血的患儿进行脐血移植，术前6天予静滴环磷酰胺5mg/kg*天×4天，同时进行水化；术前1天予50Y胸腹部照射，肺脏、肝脏右叶屏敝，冷冻保存的脐血融化后不作进一步处理输给患儿。输入有核细胞1.18×104/kg、CFU-CM4.37×106。术后22天网织红细胞和粒细胞计数上升；术后120天CFU-CM、BFU-E、CFU-GEMM数目正常，骨髓分类正常；发生Ⅰ度GVHD[5]。国际脐脐血移植登记处的34例病例[2]包括急性淋巴细胞性白血病、急性、慢性髓细胞白血病、神经母细胞瘤、范可尼氏贫血、再障、地贫等。
沈柏均报道[12]脐血移植先天性纯红再障1例、急性白血病4例、恶性实体瘤4例。国内部分机构限于骨髓移植所需条件，以脐血静脉输注，在某些疾病治疗上有效，现一起介绍。苏荣等用脐血输注治疗再障6例，总有效率83.3%[16]。候俊卿等用脐血输注治疗慢性再障5例、4例明显缓解、1例明显进步[17]。马晓苗等用脐血输注治疗急性造血停滞5例均有效[18]。张志敏等用脐血输注治疗15例再障总有效率83.3%[21]。忻丁贵等用脐血输注治疗不同贫血72例。均有不同程度的改善[22]。总结国内部分病例：①脐血输注未作预处理少的输2次，多的达20次；②年龄不限；③无VGHD。脐血移植是一种造血干细胞移植，它所需的临床适应症，预处理方案，移植后所应注意的问题应参考BMT。脐血静脉输注的疗效是否能达到BMT的效果是值得关注的。
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4 问题
4.1 脐血细胞的体外扩增 目前脐血移植多在37kg体重以下[2]，国外的有限资料输入有核细胞<1×108/kg体重，少于异体骨髓移植3×108/kg体重NC的要求[23]。为了解决成人脐血移植的NC不足，需要解决脐血造血细胞的体外扩增问题。LuLi认为EPO+SF+CM-CSF+G-CSF+IL-3方案刺激效果为最佳[24]。梁辉等用SCF+IL-3+GM-CSF方案LTC+TC(长期培养起始细胞)有明显的扩增，对CFC(克隆形成细胞)形成CFU-GM、CFU-mix集落产率比对照组高13倍[25]。裴雪涛等用SCF+IL-3+IL-6+G-CSF+EPO组成对CD+34细胞扩增效率为最高[26]。隋星卫等用SCF+IL-6+IL-3+EPO组合对脐血CD+34细胞体外扩增为最高[27]。
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4.2 脐血库的建立 为了更广泛利用脐血移植，国外已建立数个脐血库。我国有必要建立脐血库，但脐血库的建立需要解决一系列问题[1]。
4.3 随着研究的深入，脐血移植需注意解决如下问题[23]：①如何建立一套有效的脐血采集、登记、库存及各项指标监测的程序，以适应基础研究和临床应用的需要；②脐血移植，造血细胞是暂时的替代还是永久的植入，进而完全取代原来的造血和免疫功能，是否对内环境有影响；③单个脐血是否包含足够量的造血细胞，重建成人的造血和免疫功能；混合脐血移植将产生什么效果，脐血移植的远期效果。另外，脐血的所有权问题[14]。
参考文献
1 沈柏均.脐血库筹建的现状和存在问题.中华血液学杂志，1995；16(7)：339
2 韩明哲.脐血造血干细胞移植研究进展.中华血液学杂志，1995；16(7)：379
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3 陆道培，主编.白血病治疗学.北京：科学出版社，1995：312
4 Knudtfzon S. In Vitro growth of granulocytic colonies from cirlating cells in human cord blood Blood，1974；43：357
5 Gluckman E, Broxmcyer HE, Auerbach AD, et al. Hematopoietic reconstitution in a Patient with Fanconi anemia by means of umbilical cord blood from an HLA-identical sibling New Engj J Med，1989；26：1174
6 汪亦宇，谢毅.脐血造血脐细胞培养及T淋巴细胞亚群的研究.中华血液学杂志，1994；15(4)：178
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7 尹振尧，王瑜，郭瑞清.脐血造血祖细胞培养及细胞周期的研究.中华血液学杂志，1994；15(4)：181
8 马立群，覃汉君，冉崇蓉.人脐血造血干、祖细胞体外培养的实验研究.中华血液学杂志，1994；15(4)：583
9 张洪泉，傅曾矩，沈柏均，等.脐血造血细胞的分离与保存.中华血液学杂志，1992；13：180
10 张林生，王逸兰，陆道培.脐血造血干祖细胞集落产率的研究.中华血液学杂志，1996；17(5)：233
11 张晓红.人脐血造血干细胞的研究.中华血液学杂志，1994；15(10)：551
12 沈柏均.脐血移植的基础和临床研究.中国实用儿科杂志，1994；9(5)：282
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13 郑景熙.脐带血造血细胞生物学特性及移植.解放军医学杂志，1993；18(5)：396
14 郑景熙.胎盘血有关成分和性质的检测.第一军医大学学报，1990；10(3)：551
15 朱为国，邢献忠，吴霭，等.人脐血造血干细胞深低温保存效果观察.中华血液学杂志，1994；15(4)：201
16 苏荣，孟学敏，韩艳秋，等.脐带血输注康力龙治疗再障性贫血临床观察.临床血液学杂志，1996；9(10)：24
17 候俊卿，段玉龙，史中州.脐带血单个全新多次输注治疗慢性再障.临床血液学杂志，1994；7(2)：92
18 马晓苗，武国胜，刘晓梅，等.脐血输注治疗急性造血功能停滞5例观察.临床血液学杂志，1996；9(1)：27
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19 张志敏，冀淑惠，张萍，等.脐血输注辅助治疗再生障碍性贫血.中华血液学杂志，1996；17(2)：100
20 郑国春，程久芬.脐血和红细胞生成素联合丙酸睾丸酮、山莨菪碱、地塞米松治疗再生障碍性贫血疗效初步观察.中华血液学杂志，1996；17(8)：425
21 许忠仁，沈玉琪，王国华，等.脐血造血活性和治疗再生障碍性贫血初步研究.中华血液学杂志，1992；13(10)：546
22 忻丁贵，朱伟民，李本华，等.人体胎盘血封闭式采集及临床应用.浙江医学，1992；14(3)：57
23 张洪泉.脐血造血细胞移植.国外医学(儿科学分册)，1993；20(2)：84
24 沈柏均.国际脐血生物学和免疫学及脐血移植会议概况.中华血液学杂志，1994；15(10)：554
25 梁辉，黄未未，王耀平，等.6种细胞因子对脐血的CFC和LTC-IC的刺激作用.中华血液学杂志，1996；17(2)：76
26 裴雪涛，王立生，徐黎，等.造血生长因子对脐血CD+34细胞的体外扩增作用.中华血液学杂志，1996；17(6)：304
27 隋星卫，张洪泉，沈柏均.脐血CD+34细胞体外扩增的研究.中华血液学杂志，1995；16(11)：538
(1998-01-01收稿), http://www.100md.com
单位：广西百色地区人民医院 (百色 533000)
关键词：
右江民族医学院学报9903118 骨髓移植(BMT)是治疗骨髓衰竭、白血病、恶性肿瘤、重症免疫缺陷等最有效的方法之一，它的有效性已为世人所公认[1，2]，BMT为白血病等恶性肿瘤患者提供长期无病存活或根治的机会最多[3]。但BMT因受供者HLA配型的限制和供者年龄、心理、病情、经济能力以及医疗机构条件等限制，实际上获得这种治疗机会患者人数是很少的。随着计划生育在我国的开展及深入，能获得HLA匹配相合的机会更少。自从70年代初Kudtzon等[4]发现人脐血体外培养粒单系集落形成单位(CFU—GM)产率，明显高于成人外周血，富含造血祖细胞成为可代替骨髓的另一个造血干细胞来源。经Gluckman首次应用于临床获得成功[5]。现将脐血研究作以下综述。
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1 脐血实验室研究
脐血中含有大量的造血干/祖细胞和各向造血祖细胞，其浓度大于或近似骨髓，脐血中粒单系集落形成单位(CFU—GM)、红系爆或落形单位(BFU—E)、混合系集落形成单位(CFU—Mix)产率近似或大于骨髓。国内的多项研究亦证实脐血(CFU-GM、BFU-5,CFU-GEMM(粒、红、巨噬、巨核细胞集落形成单位)近似或大于骨髓[6～10]。张林生等报道，脐血经体外培养21天初始造血祖细胞(SCFU-BI)含量可达骨髓的10倍左右[10]，脐血中CD+34、CD+34CD+38、CD+34CD+33和CD-3445RA-细胞的比例与骨髓相似；脐血的CD+3445RO-细胞明显高于骨髓[11]。CD+34CD-38在脐血CD+34中占4%，在骨髓CD+34中占1%[2]，沈柏均认为[12]：①脐血不但存在骨髓所含有的各种类型的造血干/祖细胞，而且可培养出更原始的造血细胞。CFU-CGMM数量较骨髓多2倍；②脐血造血细胞对集落刺激因子更敏感；③脐血中CFU-F产率比骨髓少但比周围血多，具备支持造血的特性；④脐血CFU-GM有更强的增殖能力，每个集落所含的子细胞更多；⑤脐血造血干/祖细胞二次集落形成率比骨髓细胞大30倍，形成的二次集落仍具多能性，单个CD+34可再植传5代以上；⑥脐血中造血刺激因子CSF-G、CSF-GM、EPO浓度较成人血高，脐血浆可增强骨髓或脐血造血干/祖细胞的再植率，而成人周围血无此作用。所以脐血可作为造血干细胞移植的另一个来源。
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2 脐血的采集、分离、保存
2.1 供者的选择 母亲及新生儿均应健康，有下列情况者不能采集[2]：①妊娠不足32周；②胎盘剥离超过12h；③羊水内混有胎粪；④产妇发热或贫血；⑤胎儿有呼吸窘迫症；⑥产前羊水细胞和胎盘绒毛膜检查证明有遗传病、传染病。
2.2 采集 在胎儿娩出结扎脐带后，在第三产程于胎盘端作脐静脉穿刺，借助宫缩可使脐血顺利流入贮血袋中。沈柏均等已采血100余次，可收集血量±100ml(30～280m)[12]。Thierry等报道[2]胎儿娩出后，立即距脐5～7cm处断脐，从脐静脉、胎盘表面小血管内采血，在167份血样中收集到±112ml(30～280m)，未见对母婴有任何影响。汪赤宇等报道[6]胎儿娩出2min后断脐，可避免过早断脐引起新生儿血压上升诱发脑室出血。若不采用密闭采集法，而扩大到全胎盘血，采血量可扩大一倍，但污染的可能性也要重视和处理[13]。
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2.3 保存和分离 在4℃、25℃存放24h的脐血祖细胞集落数无明显减少，超过3天的减少30%～50%，若在37℃有核细胞和造血细胞逐日减少，第3日降到零[12]。脐血在4℃开始发生溶血的时间为29.8±13.9天[14]。沈柏均等报道[12]采血后分离提取单个核细胞，经程控降温至-80℃后移至液氮中。单纯离心分离、白膜、不同密度梯度离心分离法均有造血祖细胞的丢失，CFU-GM的回收率为16%～60%；用羟乙基淀粉法或氯化铵溶解法去除红细胞时也有造血干细胞的丢失[2]。故多数作者均主张采血后不作任何处理全血冻存。
有研究显示经离心后-80℃冻存的脐血，4个月后仍有相当大的回收率和细胞活力[1,15]。为了适应脐血库的建立，制成脐血单细胞悬液在液氮冻存5年以上仍有85%细胞保持活力和功能[9]。有的说单细胞悬液可有效地保存10年以上[1]。
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3 脐血移植的临床研究
1989年9月Gluckman等对1例范可尼氏贫血的患儿进行脐血移植，术前6天予静滴环磷酰胺5mg/kg*天×4天，同时进行水化；术前1天予50Y胸腹部照射，肺脏、肝脏右叶屏敝，冷冻保存的脐血融化后不作进一步处理输给患儿。输入有核细胞1.18×104/kg、CFU-CM4.37×106。术后22天网织红细胞和粒细胞计数上升；术后120天CFU-CM、BFU-E、CFU-GEMM数目正常，骨髓分类正常；发生Ⅰ度GVHD[5]。国际脐脐血移植登记处的34例病例[2]包括急性淋巴细胞性白血病、急性、慢性髓细胞白血病、神经母细胞瘤、范可尼氏贫血、再障、地贫等。
沈柏均报道[12]脐血移植先天性纯红再障1例、急性白血病4例、恶性实体瘤4例。国内部分机构限于骨髓移植所需条件，以脐血静脉输注，在某些疾病治疗上有效，现一起介绍。苏荣等用脐血输注治疗再障6例，总有效率83.3%[16]。候俊卿等用脐血输注治疗慢性再障5例、4例明显缓解、1例明显进步[17]。马晓苗等用脐血输注治疗急性造血停滞5例均有效[18]。张志敏等用脐血输注治疗15例再障总有效率83.3%[21]。忻丁贵等用脐血输注治疗不同贫血72例。均有不同程度的改善[22]。总结国内部分病例：①脐血输注未作预处理少的输2次，多的达20次；②年龄不限；③无VGHD。脐血移植是一种造血干细胞移植，它所需的临床适应症，预处理方案，移植后所应注意的问题应参考BMT。脐血静脉输注的疗效是否能达到BMT的效果是值得关注的。
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4 问题
4.1 脐血细胞的体外扩增 目前脐血移植多在37kg体重以下[2]，国外的有限资料输入有核细胞<1×108/kg体重，少于异体骨髓移植3×108/kg体重NC的要求[23]。为了解决成人脐血移植的NC不足，需要解决脐血造血细胞的体外扩增问题。LuLi认为EPO+SF+CM-CSF+G-CSF+IL-3方案刺激效果为最佳[24]。梁辉等用SCF+IL-3+GM-CSF方案LTC+TC(长期培养起始细胞)有明显的扩增，对CFC(克隆形成细胞)形成CFU-GM、CFU-mix集落产率比对照组高13倍[25]。裴雪涛等用SCF+IL-3+IL-6+G-CSF+EPO组成对CD+34细胞扩增效率为最高[26]。隋星卫等用SCF+IL-6+IL-3+EPO组合对脐血CD+34细胞体外扩增为最高[27]。
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4.2 脐血库的建立 为了更广泛利用脐血移植，国外已建立数个脐血库。我国有必要建立脐血库，但脐血库的建立需要解决一系列问题[1]。
4.3 随着研究的深入，脐血移植需注意解决如下问题[23]：①如何建立一套有效的脐血采集、登记、库存及各项指标监测的程序，以适应基础研究和临床应用的需要；②脐血移植，造血细胞是暂时的替代还是永久的植入，进而完全取代原来的造血和免疫功能，是否对内环境有影响；③单个脐血是否包含足够量的造血细胞，重建成人的造血和免疫功能；混合脐血移植将产生什么效果，脐血移植的远期效果。另外，脐血的所有权问题[14]。
参考文献
1 沈柏均.脐血库筹建的现状和存在问题.中华血液学杂志，1995；16(7)：339
2 韩明哲.脐血造血干细胞移植研究进展.中华血液学杂志，1995；16(7)：379
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3 陆道培，主编.白血病治疗学.北京：科学出版社，1995：312
4 Knudtfzon S. In Vitro growth of granulocytic colonies from cirlating cells in human cord blood Blood，1974；43：357
5 Gluckman E, Broxmcyer HE, Auerbach AD, et al. Hematopoietic reconstitution in a Patient with Fanconi anemia by means of umbilical cord blood from an HLA-identical sibling New Engj J Med，1989；26：1174
6 汪亦宇，谢毅.脐血造血脐细胞培养及T淋巴细胞亚群的研究.中华血液学杂志，1994；15(4)：178
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7 尹振尧，王瑜，郭瑞清.脐血造血祖细胞培养及细胞周期的研究.中华血液学杂志，1994；15(4)：181
8 马立群，覃汉君，冉崇蓉.人脐血造血干、祖细胞体外培养的实验研究.中华血液学杂志，1994；15(4)：583
9 张洪泉，傅曾矩，沈柏均，等.脐血造血细胞的分离与保存.中华血液学杂志，1992；13：180
10 张林生，王逸兰，陆道培.脐血造血干祖细胞集落产率的研究.中华血液学杂志，1996；17(5)：233
11 张晓红.人脐血造血干细胞的研究.中华血液学杂志，1994；15(10)：551
12 沈柏均.脐血移植的基础和临床研究.中国实用儿科杂志，1994；9(5)：282
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13 郑景熙.脐带血造血细胞生物学特性及移植.解放军医学杂志，1993；18(5)：396
14 郑景熙.胎盘血有关成分和性质的检测.第一军医大学学报，1990；10(3)：551
15 朱为国，邢献忠，吴霭，等.人脐血造血干细胞深低温保存效果观察.中华血液学杂志，1994；15(4)：201
16 苏荣，孟学敏，韩艳秋，等.脐带血输注康力龙治疗再障性贫血临床观察.临床血液学杂志，1996；9(10)：24
17 候俊卿，段玉龙，史中州.脐带血单个全新多次输注治疗慢性再障.临床血液学杂志，1994；7(2)：92
18 马晓苗，武国胜，刘晓梅，等.脐血输注治疗急性造血功能停滞5例观察.临床血液学杂志，1996；9(1)：27
, 百拇医药
19 张志敏，冀淑惠，张萍，等.脐血输注辅助治疗再生障碍性贫血.中华血液学杂志，1996；17(2)：100
20 郑国春，程久芬.脐血和红细胞生成素联合丙酸睾丸酮、山莨菪碱、地塞米松治疗再生障碍性贫血疗效初步观察.中华血液学杂志，1996；17(8)：425
21 许忠仁，沈玉琪，王国华，等.脐血造血活性和治疗再生障碍性贫血初步研究.中华血液学杂志，1992；13(10)：546
22 忻丁贵，朱伟民，李本华，等.人体胎盘血封闭式采集及临床应用.浙江医学，1992；14(3)：57
23 张洪泉.脐血造血细胞移植.国外医学(儿科学分册)，1993；20(2)：84
24 沈柏均.国际脐血生物学和免疫学及脐血移植会议概况.中华血液学杂志，1994；15(10)：554
25 梁辉，黄未未，王耀平，等.6种细胞因子对脐血的CFC和LTC-IC的刺激作用.中华血液学杂志，1996；17(2)：76
26 裴雪涛，王立生，徐黎，等.造血生长因子对脐血CD+34细胞的体外扩增作用.中华血液学杂志，1996；17(6)：304
27 隋星卫，张洪泉，沈柏均.脐血CD+34细胞体外扩增的研究.中华血液学杂志，1995；16(11)：538
(1998-01-01收稿), http://www.100md.com