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编号:10220534
细胞信号传导分子P36在人肝细胞癌中的表达
http://www.100md.com 《第二军医大学学报》 1998年第4期
     作者:顾广玉 朱明华 王文亮△ 黄高升△ 詹洲

    单位:

    关键词:肝肿瘤;细胞信号传导分子;免疫组织化学

    摘要 目的摘要 目的:探讨细胞信号传导分子P36与肝细胞癌发生、发展的关系。方法:采用SP免疫细胞化学方法,检测70例肝细胞癌组织中P36的分布和表达。结果:40例P36表达阳性,占57.1%,阳性物质主要位于胞浆内,少数位于胞核或胞膜上。肿瘤分化越差,其阳性染色越强。P36在HBxAg阳性病例中的检出率高于HBxAg阴性病例中的检出率(P<0.05)。结论:P36有可能成为判定肝细胞癌恶性程度的标记物,P36的异常表达与肝细胞癌的发生、发展关系密切,并可能与HBV感染有关。

    中国图书资料分类法分类号 R735.7

    Expression of cell signal conducting molecule P36 in human hepatocellular carcinoma
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    Gu Guangyu, Zhu Minghua, Wang Wenliang, Huang Gaosheng, Zhan Rongzhou (Department of Pathology, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai, 200433)

    Abstract Objective: To explore the relationship between cell signal conducting molecule P36 and occurrence and development of hepatocellular carcinoma. Methods: SP immunocytochemical techniques were used to detect the distribution and expression of P36 in 70 cases of hepatocellular carcinoma. Results: The findings showed the total positive rate of P36 was 57.1%(40/70), and P36 located mainly in cytoplasm with a small amount in cellular membrane and nuclei. In the patients whose tumors differentiated more poorly,the positive colorations were stronger. Tumor tissues conceived higher positive rate for P36 in the positive HBxAg cases as compared with the negative HBxAg cases. Conclusion: P36 is an essential marker for judging the malignance of hepatocellular carcinoma,and closely related to transformation of hepatocellular carcinoma.High expression of P36 may be related to the infection of HBV.
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    Key words hepatoma; cell signal conducting molecule; immunohistochemistry

    信号传导分子P36是PP60v-src的底物,在联系细胞膜和细胞骨架及在DNA合成中具有重要作用,相对分子质量为3.6万。其全部生理功能尚不清楚,有关P36在人类肿瘤中表达的报道尚少。我们应用鼠抗人P36蛋白单克隆抗体,采用SP免疫细胞化学法检测了70例肝细胞癌标本中P36的表达与分布。

    1 材料和方法

    1.1 标本 病理诊断证实的肝细胞癌标本70例,其中54例具有癌旁肝组织。按WHO标准分为3级,Ⅰ级15例,Ⅱ级38例,Ⅲ级17例。30例肝硬化标本作为对照。

    1.2 抗体与试剂 鼠抗人P36单克隆抗体由美国哈佛大学医学院Bhavani博士惠赠。兔抗HBxAg多克隆抗体由美国费城Fox Chase癌症中心提供。免疫细胞化学SP试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。
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    1.3 方法 切片常规脱蜡,0.1% H2O2阻断内源酶,加一抗,4℃冰箱过夜。加生物素标记的二抗,室温15 min,链酶菌抗生物素蛋白-过氧化物酶,室温10 min,DAB显色,光镜下观察。以上各步均用PBS液振洗。分别以PBS液、正常鼠血清及兔血清代替一抗做空白对照、替代对照。

    1.4 结果判定 细胞无着色记为阴性(-),少数细胞淡黄色记为可疑阳性(±),较多细胞呈棕黄色记为(+),大量细胞深棕色记为(++)。

    1.5 统计学处理 以(-)~(±)为阴性,(+)~(++)为阳性,计算出肝细胞癌各病理分级中的阳性率及HBxAg阳性组、阴性组中的阳性率,用χ2检验进行组间比较。

    2 结 果

    2.1 P36蛋白在细胞内定位及分布 P36蛋白表达阳性细胞染色部位主要在胞浆, 少部分位于胞膜(图1), 阳性细胞分布呈弥漫型(阳性细胞弥漫分布于组织中)或局灶型(阳性细胞呈团灶状分布)。drjy4-11.gif (46735 bytes)
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    图 1 肝细胞癌P36阳性染色 (×400)

    Fig 1 Positive staining of P36 in hepatocellular

    carcinoma (×400)

    2.2 癌组织、癌旁肝组织及肝硬化组织中P36的表达 3种组织中P36表达的阳性率分别为57.1%(40/70), 48.1%(26/54)和46.7%(14/30),差异均无显著性意义。

    2.3 P36阳性染色在病理各级间的比较 病理学分级Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ级肝细胞癌P36蛋白表达阳性率分别为46.7%(7/15),47.3%(18/38),88.2%(15/17),Ⅰ与Ⅱ比较差异无显著意义,Ⅰ与Ⅲ比较、Ⅱ与Ⅲ比较差异均有显著意义(P<0.05)。

    2.4 P36阳性染色在HBxAg阳性组与阴性组间的比较 HBxAg阳性组(n=48)与阴性组(n=12)肝细胞癌P36蛋白表达阳性率分别为66.7%(32/48)与25.0%(3/12),两组相比差异有显著意义(P<0.05)。
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    3 讨 论

    目前,已观察到P36有许多重要功能,它不仅是表皮生长因子受体激酶的底物,而且也是PKC底物[1,2]。Frohlich等[3]研究表明P36参与细胞分裂增殖的调控:在人肝癌细胞中及叙利亚仓鼠胰腺癌细胞中表达明显增高,但在大鼠肝切除术后,增生肝细胞中的P36水平并不增高,显示P36可能是肝细胞转化的一个重要特征。还有证据表明,P36与3-磷酸甘油脂酶的复合物作为引物识别蛋白,可使DNA聚合酶α高效率地利用引物,促进DNA合成;当用P36反义mRNA处理HeLa细胞后, DNA的合成降低85.7%~87.5%[4]。Masaki等[5]研究发现在增生或再生的肝细胞中,P36可作为肝细胞活动性增殖或增殖前后状态的标志。P36表达还与膀胱癌的分化程度及预后相关[6]。本研究结果显示, P36在肝细胞癌组织、 癌旁肝组织及肝硬化组织中的阳性检出率无显著差异, 但肝细胞癌各病理分级间差异有显著意义, 分化程度越低的病例,P36表达水平越高, 提示P36在肝细胞癌的发展过程中可能具有重要作用, 这对于了解肝细胞癌的恶性潜能或许有帮助。
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    本研究结果还显示,P36在HBxAg阳性病例中的检出率高于HBxAg阴性病例中的检出率,提示P36表达增高与HBV感染有关。有研究证实HBV感染与肝细胞癌的发生密切相关,特别是HBV X 基因表达产物的反式激活作用,在肝细胞癌发生中的作用更为突出[7]。因此进一步从基因水平上研究P36表达与HBV感染的关系,必将进一步阐明肝细胞癌的发生机制。肝细胞癌中P36 表达是否与患者的预后有关尚有待进一步研究。

    参 考 文 献

    1 Crompton MR, Moss SE, Crumpton MJ. Diversity in the lipocortin/ calpactin family. Cell,1988,55(1):1

    2 Klee CB. Ca2+-dependent phospholipid-(and membrane) binding proteins. Biochemistry, 1988,27(18):6645
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    3 Frohlich M, Motte P, Galvin K, et al. Enhanced expression of the protein kinase substrate P36 in human hepatocellular carcinoma. Mol Cell Biol, 1990,10(6):3216

    4 Bhavani K, Brown NV, Carlson RI, et al. The effect of ethanol and extracellular matrix on induction of P36 protein kinase substrate expression in rat hepatocytes. Biochem Biophys Res Commun, 1993,196(3): 1454

    5 Masaki T, Tokuda M, Fujimura T. Invovement of annexin Ⅰ and annexin Ⅱ in hepatocyte proliferation: can annexin Ⅰ and Ⅱ be markers for proliferative hepatocytes? Hepatology, 1994,20(2):425

    6 顾广玉, 谢晓冬, 施 炯, 等. 蛋白激酶底物P36在人膀胱肿瘤中的表达及意义. 第四军医大学学报, 1995,16(3):181

    7 Zahm P, Hofschneider PH, Koshy R. The HBV X ORF encodes a transactivator: a potential factor in viral hepatocarcinogenesis. Oncogene, 1988,3(2):169

    (1997-11-30收稿, 1998-03-21修回)

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