原发性肝细胞癌组织中P16蛋白表达的意义
作者:王 影1 杨素琼1 王在国2 蒲晓东1 孙维纲1 刘光中2
单位:四川省肿瘤医院 1病理科 2肝胆外科 四川省成都市 610041
关键词:肝肿瘤;癌,肝细胞;P16蛋白;肿瘤转移;免疫组织化学;预后
华人消化杂志/980515.htm Significance of P16 protein expression in hepatocellular carcinoma tissues
WANG Ying1, YANG Su-Qiong1, WANG Zai-Guo2, PU Xiao-Dong1, SUN Wei-GANG1 and LIU Guang-Zhong2
, 百拇医药
Department of 1Pathology and 2Hepatobiliary Surgery, Sichuan Provincial Cancer Hospital, Chengdu 610041, Sichuan Province, China
Subject headings liver neoplasms; carcinoma, hepatocellular; P16 protein; neoplasm metastasis; immunohistochemistry; prognosis
Abstract
AIM To study the relation of P16 protein expression in hepatocellular carcinoma (HCC) with metastasis and prognosis.
, http://www.100md.com
METHODS P16 protein expression was studied in 45 patients with HCC by using immunohistochemical LSAB method and compared with clinical materials.
RESULTS P16 protein positive expression in the tumors and their neighboring regions was 40.0% and 84.4%, with a significant difference (P<0.05). The positive expression of P16 protein was 20.0% in the carcinoma with metastasis and 60.5% without metastasis. P16 protein expression in highly, moderately and poorly differentiated HCC was 50.0%, 27.8% and 22.2%, with an obvious difference between patients with highly differentiated and poorly differentiated HCC (P<0.05), between groups with and without metastasis (P<0.01).
, http://www.100md.com
CONCLUSION P16 protein expression is closely related to proliferation, malignant potential and prognosis of HCC.
中国图书资料分类号 R735.7
摘 要
目的 研究原发性肝细胞癌中P16蛋白的表达程度与转移及预后的关系.
方法 应用免疫组织化学LSAB法对45例原发性肝细胞癌组织及癌旁组织进行P16蛋白表达的检测,并结合临床资料进行分析.
结果 肝癌肿瘤区及癌旁区P16蛋白阳性表达率分别为40.0%和84.4%,两组比较,有显著性差异(P<0.05). P16蛋白阳性表达率在无转移的肝癌中为60.5%,有转移组为20.0%;高、中和低分化的肝癌分别为50.0%,27.8%和22.2%. 故P16蛋白阳性表达在肝癌患者高分化与中和低分化比较有显著性差异(P<0.05),转移与非转移组比较有极显著性差异(P<0.01).
, 百拇医药
结论 P16蛋白表达与肝细胞癌增殖、分化程度及预后有关.
0 引言
抑癌基因的缺失和功能丧失在肿瘤发生发展中起着十分重要的作用. p16基因是近年发现的一个参与细胞周期调控的抑癌基因,其抑癌作用和在恶性肿瘤中的高频率突变[1],提示参与了肿瘤的发生过程. 作者应用免疫组织化学技术研究了p16基因产物在人原发性肝细胞癌组织中的表达及其与肝癌生物学行为的关系.
1 材料和方法
1.1 材料 收集四川省肿瘤医院肝胆外科1988/1994手术切除,并经病理证实为原发性肝细胞癌的肝癌标本45例,每例取癌组织及癌旁肝组织各一块. 癌组织的分化程度按中国常见恶性肿瘤诊治规范(1993年)的标准判定[2]. 在45例中已有转移者25例,乃指门静脉内有癌栓或肝门淋巴结内有癌细胞浸润,或有远处转移(如肺内出现转移灶)者;未转移者20例则指术中未见癌组织侵犯肝周围组织,X线和B超检查亦未见肝外转移者. 所有标本均经100mL/L福尔马林固定,石蜡包埋,5μm厚连续切片.
, 百拇医药
1.2 方法 应用LSAB免疫组织化学方法染色. 兔抗人P16多克隆抗血清(1∶50)为Santa Cruz公司产品. 以正常兔血清代替一抗作阴性对照,用已知的阳性切片作阳性对照,最后,DAB显色,苏木素复染,常规脱水,透明封片.
结果判断:以细胞呈清晰棕色为阳性. 每张切片分别观察10个高倍视野,每个高倍视野计数100个肿瘤细胞或非肿瘤肝细胞内免疫染色阳性细胞数,计算出每张切片的阳性细胞百分数,按阳性细胞百分数分为5个等级,低于1%为阴性(-),1%~25%为+,26%~50%为+ +,51%~75%为+ + +,76%以上为+ + + +.
统计学处理 实验数据的统计分析采用卡方检验.
2 结果
2.1 P16蛋白在肝癌及癌旁组织中的表达 P16蛋白位于肝细胞和肝癌细胞质内,呈弥散性或颗粒性分布,偶见细胞核内着色. 在45例肝细胞癌组织P16蛋白染色阳性18例,表达总阳性率为40.0%(表1),其中阳性强度以(+)~(+ +)为主;癌旁组织阳性率为84.4%(38/45),其中阳性强度以(+ +)~(+ + + +)为主,癌组织与癌旁组织阳性率差异有显著性(P<0.05).
, 百拇医药
表1 HCC及癌旁组织中P16蛋白的表达 分组
P16蛋白
阳性率
(%)
-
+
+ +
+ + +
+ + + +
肝癌组织
27
3
8
, 百拇医药
4
3
40.0a
癌旁组织
7
6
9
16
7
84.4
aP<0.05,vs 癌旁组织.
2.2 P16蛋白表达与肝细胞癌分化的关系 P16蛋白阳性表达18例肝癌的高、中和低分化阳性例数分别为9,5和4例,阳性率分别为50.0%,27.8%和22.2%. P16蛋白表达的阳性率随肝细胞癌分化程度降低而减少. 高分化与中分化比较、高分化与低分化比较、高分化与中分化+低分化比较,差别显著(P<0.05). 中分化与低分化比较,无明显差别(P>0.05). P16蛋白表达阳性率在高分化中明显高于中分化及低分化者.
, 百拇医药
2.3 P16蛋白表达与肝细胞癌转移的关系 将未转移组与转移组作比较,未转移组肝癌中P16蛋白的阳性率为60.5%;已转移组则为20%,两组比较,差异有极显著性(P<0.01,表2).
表2 P16蛋白表达与HCC转移的关系 分组
n
P16蛋白
阳性率
(%)
-
+
+ +
+ + +
+ + + +
, 百拇医药
未转移组
20
7
1
6
3
3
60.5
已转移组
25
20
2
2
1
, http://www.100md.com
0
20.0b
bP<0.01,vs 未转移组.
3 讨论
p16基因,又名MTS1/CDKN2,定位于人染色体9p21区位,由三个外显子组成[1]. 研究发现,p16基因在众多人类肿瘤中存在相当频繁的突变率和复杂多样的突变形式[1]. 据统计,75%的癌细胞株中有p16基因缺失和突变,超过了p53基因50%的突变率[3]. 这一事实提示p16基因在肿瘤发生过程中扮演着相当重要的角色. P16蛋白为MTS1基因编码蛋白,氨基酸序列分析表明,成熟p16分子 Mr 15 800的单链多肽. 它是细胞周期的一种负性调控因子,可与细胞周期素D(cyclin D)竞争结合细胞周期素依赖性激酶4(CDK4),抑制cyclin D/CDK4复合物对细胞周期G1期转化所必需的一些关键底物(如Rb)的磷酸化作用,阻止细胞从G1期进入S期,从而抑制细胞增殖[1]. 所以,当p16基因MTS1突变致结构和功能缺失时,对CDK4的抑制作用解除,cyclin D/CDK4复合物活性增强,刺激细胞旺盛分裂,最终失去控制,并向癌变发展.
, 百拇医药
目前,P16蛋白在肿瘤组织中的表达水平与肿瘤生物学行为的相关性的研究在国内已兴起,但报道尚少. Reed et al[4]曾用兔抗人P16多克隆抗体对能代表黑素瘤各期病变的(包括正常组织、非典型增生、原位癌、浸润性癌和转移性癌)103例黑素瘤组织中的P16蛋白进行免疫组化检测. 结果显示,浸润性癌阳性率为91%,转移性癌为56%,而原位癌、非典型增生和正常组织为100%,认为P16的表达缺失与黑素瘤恶性转变的早期始动阶段无关,但可能对浸润性癌和转移性癌的发展提供了某种选择性的生长优势. 我们的研究结果显示,P16蛋白在癌旁组织表达总阳性率为84.4%,而在肝细胞癌组织表达的总阳性率为40.0%,阳性率相比差异有显著性. P16蛋白的阳性率随着肝细胞癌分化程度降低而减少,说明P16低表达与肿瘤的恶性度关系较大,而且转移组P16蛋白的阳性率明显低于未转移组(P<0.01),提示,p16基因的缺失和突变主要在肝细胞癌的中~晚期发挥作用,这与Reed的观点一致. 因此,作者认为P16蛋白缺失,可致肿瘤增生活跃,恶性发展加速,患者预后差.
, 百拇医药
p16作为一种新的肿瘤抑制基因,人们对它的探索还刚刚开始,很多问题需要进一步研究. Yan et al[5]提出人体内存在着一个包括p16,CDK和pRb的细胞周期负反馈调节环路,提示p16在抑制细胞增殖的过程中并非单一发挥作用,而是与体内其他基因(如p53,pRb,cyclin D等)有密切的联系. 因此,要想全面了解p16在肿瘤发生、发展中的作用,还需对多个基因进行综合分析、研究.
王影,女,1962-10-28生,浙江省宁波市人,汉族. 1984年重庆医科大学医学系毕业,学士学位,病理科主治医师,主要从事肝胆病理诊断和科研工作,发表论文13篇.
通讯作者 王影,610041,四川省肿瘤医院病理科,四川省成都市人民南路4段55号.
Correspondence to:WANG Ying, Department of Pathology, Sichuan Provincial Cancer Hospital, Chengdu 610041, Sichuan Province, China
, 百拇医药
Tel. +86*28*5222212-3343或3588 Fax.+86*28*5554506
收稿日期 1998-01-20 修回日期 1998-03-06
4 参考文献
1 Serrano M, Hannon GJ, Beach DA. New regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of cyclin D/CDK4. Nature, 1993;366(6456):704-707
2 中华人民共和国卫生部医政司编. 中国常见恶性肿瘤诊治规范(原发性肝癌). 第2分册. 北京:人民卫生出版社,1993:14-20
3 Marx J. New tumor suppressor may rival p53. Science, 1994;264(3):344-348
, 百拇医药
4 Reed JA, Loganzo FJr, Shea CR, Walker GJ, Flores JF, Glendening JM et al. Loss of expression of thep16/cyclin-dependent kinase inhibitor 2 tumor suppressor gene in melanocytic lesions correlates with invasive stage of tumor progression. Cancer Res, 1995;55(13):2713-2718
5 Yan L, Nichols MA, Jerry WS, Yue X. Transcriptional repression of the D-type cyclin-dependent kinase inhibitor p16 by the retinoblastoma susceptibility gene product pRb. Cancer Res, 1994;54(23):6078-6082
, 百拇医药
四川省肿瘤医院 1病理科 2肝胆外科 四川省成都市 610041
王影,女,1962-10-28生,浙江省宁波市人,汉族. 1984年重庆医科大学医学系毕业,学士学位,病理科主治医师,主要从事肝胆病理诊断和科研工作,发表论文13篇.
通讯作者 王影,610041,四川省肿瘤医院病理科,四川省成都市人民南路4段55号.
Correspondence to:WANG Ying, Department of Pathology, Sichuan Provincial Cancer Hospital, Chengdu 610041, Sichuan Province, China
Tel. +86*28*5222212-3343或3588 Fax.+86*28*5554506
收稿日期 1998-01-20 修回日期 1998-03-06, http://www.100md.com(王 影1 杨素琼1 王在国2 蒲晓东1 孙维纲1 刘光中2)
单位:四川省肿瘤医院 1病理科 2肝胆外科 四川省成都市 610041
关键词:肝肿瘤;癌,肝细胞;P16蛋白;肿瘤转移;免疫组织化学;预后
华人消化杂志/980515.htm Significance of P16 protein expression in hepatocellular carcinoma tissues
WANG Ying1, YANG Su-Qiong1, WANG Zai-Guo2, PU Xiao-Dong1, SUN Wei-GANG1 and LIU Guang-Zhong2
, 百拇医药
Department of 1Pathology and 2Hepatobiliary Surgery, Sichuan Provincial Cancer Hospital, Chengdu 610041, Sichuan Province, China
Subject headings liver neoplasms; carcinoma, hepatocellular; P16 protein; neoplasm metastasis; immunohistochemistry; prognosis
Abstract
AIM To study the relation of P16 protein expression in hepatocellular carcinoma (HCC) with metastasis and prognosis.
, http://www.100md.com
METHODS P16 protein expression was studied in 45 patients with HCC by using immunohistochemical LSAB method and compared with clinical materials.
RESULTS P16 protein positive expression in the tumors and their neighboring regions was 40.0% and 84.4%, with a significant difference (P<0.05). The positive expression of P16 protein was 20.0% in the carcinoma with metastasis and 60.5% without metastasis. P16 protein expression in highly, moderately and poorly differentiated HCC was 50.0%, 27.8% and 22.2%, with an obvious difference between patients with highly differentiated and poorly differentiated HCC (P<0.05), between groups with and without metastasis (P<0.01).
, http://www.100md.com
CONCLUSION P16 protein expression is closely related to proliferation, malignant potential and prognosis of HCC.
中国图书资料分类号 R735.7
摘 要
目的 研究原发性肝细胞癌中P16蛋白的表达程度与转移及预后的关系.
方法 应用免疫组织化学LSAB法对45例原发性肝细胞癌组织及癌旁组织进行P16蛋白表达的检测,并结合临床资料进行分析.
结果 肝癌肿瘤区及癌旁区P16蛋白阳性表达率分别为40.0%和84.4%,两组比较,有显著性差异(P<0.05). P16蛋白阳性表达率在无转移的肝癌中为60.5%,有转移组为20.0%;高、中和低分化的肝癌分别为50.0%,27.8%和22.2%. 故P16蛋白阳性表达在肝癌患者高分化与中和低分化比较有显著性差异(P<0.05),转移与非转移组比较有极显著性差异(P<0.01).
, 百拇医药
结论 P16蛋白表达与肝细胞癌增殖、分化程度及预后有关.
0 引言
抑癌基因的缺失和功能丧失在肿瘤发生发展中起着十分重要的作用. p16基因是近年发现的一个参与细胞周期调控的抑癌基因,其抑癌作用和在恶性肿瘤中的高频率突变[1],提示参与了肿瘤的发生过程. 作者应用免疫组织化学技术研究了p16基因产物在人原发性肝细胞癌组织中的表达及其与肝癌生物学行为的关系.
1 材料和方法
1.1 材料 收集四川省肿瘤医院肝胆外科1988/1994手术切除,并经病理证实为原发性肝细胞癌的肝癌标本45例,每例取癌组织及癌旁肝组织各一块. 癌组织的分化程度按中国常见恶性肿瘤诊治规范(1993年)的标准判定[2]. 在45例中已有转移者25例,乃指门静脉内有癌栓或肝门淋巴结内有癌细胞浸润,或有远处转移(如肺内出现转移灶)者;未转移者20例则指术中未见癌组织侵犯肝周围组织,X线和B超检查亦未见肝外转移者. 所有标本均经100mL/L福尔马林固定,石蜡包埋,5μm厚连续切片.
, 百拇医药
1.2 方法 应用LSAB免疫组织化学方法染色. 兔抗人P16多克隆抗血清(1∶50)为Santa Cruz公司产品. 以正常兔血清代替一抗作阴性对照,用已知的阳性切片作阳性对照,最后,DAB显色,苏木素复染,常规脱水,透明封片.
结果判断:以细胞呈清晰棕色为阳性. 每张切片分别观察10个高倍视野,每个高倍视野计数100个肿瘤细胞或非肿瘤肝细胞内免疫染色阳性细胞数,计算出每张切片的阳性细胞百分数,按阳性细胞百分数分为5个等级,低于1%为阴性(-),1%~25%为+,26%~50%为+ +,51%~75%为+ + +,76%以上为+ + + +.
统计学处理 实验数据的统计分析采用卡方检验.
2 结果
2.1 P16蛋白在肝癌及癌旁组织中的表达 P16蛋白位于肝细胞和肝癌细胞质内,呈弥散性或颗粒性分布,偶见细胞核内着色. 在45例肝细胞癌组织P16蛋白染色阳性18例,表达总阳性率为40.0%(表1),其中阳性强度以(+)~(+ +)为主;癌旁组织阳性率为84.4%(38/45),其中阳性强度以(+ +)~(+ + + +)为主,癌组织与癌旁组织阳性率差异有显著性(P<0.05).
, 百拇医药
表1 HCC及癌旁组织中P16蛋白的表达 分组
P16蛋白
阳性率
(%)
-
+
+ +
+ + +
+ + + +
肝癌组织
27
3
8
, 百拇医药
4
3
40.0a
癌旁组织
7
6
9
16
7
84.4
aP<0.05,vs 癌旁组织.
2.2 P16蛋白表达与肝细胞癌分化的关系 P16蛋白阳性表达18例肝癌的高、中和低分化阳性例数分别为9,5和4例,阳性率分别为50.0%,27.8%和22.2%. P16蛋白表达的阳性率随肝细胞癌分化程度降低而减少. 高分化与中分化比较、高分化与低分化比较、高分化与中分化+低分化比较,差别显著(P<0.05). 中分化与低分化比较,无明显差别(P>0.05). P16蛋白表达阳性率在高分化中明显高于中分化及低分化者.
, 百拇医药
2.3 P16蛋白表达与肝细胞癌转移的关系 将未转移组与转移组作比较,未转移组肝癌中P16蛋白的阳性率为60.5%;已转移组则为20%,两组比较,差异有极显著性(P<0.01,表2).
表2 P16蛋白表达与HCC转移的关系 分组
n
P16蛋白
阳性率
(%)
-
+
+ +
+ + +
+ + + +
, 百拇医药
未转移组
20
7
1
6
3
3
60.5
已转移组
25
20
2
2
1
, http://www.100md.com
0
20.0b
bP<0.01,vs 未转移组.
3 讨论
p16基因,又名MTS1/CDKN2,定位于人染色体9p21区位,由三个外显子组成[1]. 研究发现,p16基因在众多人类肿瘤中存在相当频繁的突变率和复杂多样的突变形式[1]. 据统计,75%的癌细胞株中有p16基因缺失和突变,超过了p53基因50%的突变率[3]. 这一事实提示p16基因在肿瘤发生过程中扮演着相当重要的角色. P16蛋白为MTS1基因编码蛋白,氨基酸序列分析表明,成熟p16分子 Mr 15 800的单链多肽. 它是细胞周期的一种负性调控因子,可与细胞周期素D(cyclin D)竞争结合细胞周期素依赖性激酶4(CDK4),抑制cyclin D/CDK4复合物对细胞周期G1期转化所必需的一些关键底物(如Rb)的磷酸化作用,阻止细胞从G1期进入S期,从而抑制细胞增殖[1]. 所以,当p16基因MTS1突变致结构和功能缺失时,对CDK4的抑制作用解除,cyclin D/CDK4复合物活性增强,刺激细胞旺盛分裂,最终失去控制,并向癌变发展.
, 百拇医药
目前,P16蛋白在肿瘤组织中的表达水平与肿瘤生物学行为的相关性的研究在国内已兴起,但报道尚少. Reed et al[4]曾用兔抗人P16多克隆抗体对能代表黑素瘤各期病变的(包括正常组织、非典型增生、原位癌、浸润性癌和转移性癌)103例黑素瘤组织中的P16蛋白进行免疫组化检测. 结果显示,浸润性癌阳性率为91%,转移性癌为56%,而原位癌、非典型增生和正常组织为100%,认为P16的表达缺失与黑素瘤恶性转变的早期始动阶段无关,但可能对浸润性癌和转移性癌的发展提供了某种选择性的生长优势. 我们的研究结果显示,P16蛋白在癌旁组织表达总阳性率为84.4%,而在肝细胞癌组织表达的总阳性率为40.0%,阳性率相比差异有显著性. P16蛋白的阳性率随着肝细胞癌分化程度降低而减少,说明P16低表达与肿瘤的恶性度关系较大,而且转移组P16蛋白的阳性率明显低于未转移组(P<0.01),提示,p16基因的缺失和突变主要在肝细胞癌的中~晚期发挥作用,这与Reed的观点一致. 因此,作者认为P16蛋白缺失,可致肿瘤增生活跃,恶性发展加速,患者预后差.
, 百拇医药
p16作为一种新的肿瘤抑制基因,人们对它的探索还刚刚开始,很多问题需要进一步研究. Yan et al[5]提出人体内存在着一个包括p16,CDK和pRb的细胞周期负反馈调节环路,提示p16在抑制细胞增殖的过程中并非单一发挥作用,而是与体内其他基因(如p53,pRb,cyclin D等)有密切的联系. 因此,要想全面了解p16在肿瘤发生、发展中的作用,还需对多个基因进行综合分析、研究.
王影,女,1962-10-28生,浙江省宁波市人,汉族. 1984年重庆医科大学医学系毕业,学士学位,病理科主治医师,主要从事肝胆病理诊断和科研工作,发表论文13篇.
通讯作者 王影,610041,四川省肿瘤医院病理科,四川省成都市人民南路4段55号.
Correspondence to:WANG Ying, Department of Pathology, Sichuan Provincial Cancer Hospital, Chengdu 610041, Sichuan Province, China
, 百拇医药
Tel. +86*28*5222212-3343或3588 Fax.+86*28*5554506
收稿日期 1998-01-20 修回日期 1998-03-06
4 参考文献
1 Serrano M, Hannon GJ, Beach DA. New regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of cyclin D/CDK4. Nature, 1993;366(6456):704-707
2 中华人民共和国卫生部医政司编. 中国常见恶性肿瘤诊治规范(原发性肝癌). 第2分册. 北京:人民卫生出版社,1993:14-20
3 Marx J. New tumor suppressor may rival p53. Science, 1994;264(3):344-348
, 百拇医药
4 Reed JA, Loganzo FJr, Shea CR, Walker GJ, Flores JF, Glendening JM et al. Loss of expression of thep16/cyclin-dependent kinase inhibitor 2 tumor suppressor gene in melanocytic lesions correlates with invasive stage of tumor progression. Cancer Res, 1995;55(13):2713-2718
5 Yan L, Nichols MA, Jerry WS, Yue X. Transcriptional repression of the D-type cyclin-dependent kinase inhibitor p16 by the retinoblastoma susceptibility gene product pRb. Cancer Res, 1994;54(23):6078-6082
, 百拇医药
四川省肿瘤医院 1病理科 2肝胆外科 四川省成都市 610041
王影,女,1962-10-28生,浙江省宁波市人,汉族. 1984年重庆医科大学医学系毕业,学士学位,病理科主治医师,主要从事肝胆病理诊断和科研工作,发表论文13篇.
通讯作者 王影,610041,四川省肿瘤医院病理科,四川省成都市人民南路4段55号.
Correspondence to:WANG Ying, Department of Pathology, Sichuan Provincial Cancer Hospital, Chengdu 610041, Sichuan Province, China
Tel. +86*28*5222212-3343或3588 Fax.+86*28*5554506
收稿日期 1998-01-20 修回日期 1998-03-06, http://www.100md.com(王 影1 杨素琼1 王在国2 蒲晓东1 孙维纲1 刘光中2)