甘氨双唑钠对小鼠一般生殖毒性的评价
作者：张天宝 贺清玉 陈耀富 印木泉
单位：
关键词：甘氨双唑钠；生殖毒性
摘要 目的摘要 目的：评价甘氨双唑钠的一般生殖毒性。方法：采用Ⅰ段生殖毒性试验。设0，33.3，100.0和300.0 mg/kg 4个组。雄性ICR小鼠交配前经腹腔注射连续给药60 d，雌性小鼠交配前经皮下注射连续给药14 d，然后继续给药至哺乳期结束。结果：各剂量组给药期间对雄性小鼠体质量增长有不同程度的影响，其中高剂量组与对照组比较差异有统计学意义；中、高剂量组睾丸质量增加；各剂量组附睾精子数均降低，精子活动度也有不同程度的下降，但对生育率无明显影响，睾丸组织也未见明显的病理改变。结论：在受试剂量下，该药对雄鼠有一定的生殖毒性，但对生育率和雌鼠生殖功能以及子代无明显影响。
中国图书资料分类法分类号 R595.4
, 百拇医药
General reproductive toxicity assessment of glycididazolum natrium in ICR mice
Zhang Tianbao, He Qingyu, Chen Yaofu, Yin Muquan (Department of Hygienic Toxicology，Department of Basic Medicine，Second Military Medical University, Shanghai, 200433)
Abstract Objective: To study general reproductive toxicity of glycididazolum natrium. Methods: Segment Ⅰ，fertility and general reproductive toxicity test. Adult ICR male mice were given i.p. at the doses of 0, 33.3, 100.0 and 300.0 mg/(kg*d) for 60 d before mating with females that received the same doses by subcutaneous injection during 14 d just prior to mating. Treatment of female mice with the drug was continued on 15 d of gestation. Results: Decreased of male mice body weight gained during treatment was founded in 300.0 mg/kg group. Increase of testicular weights, decreased of sperm count and sperm motility were observed in 100.0 and 300.0 mg/kg groups. However, mating rate of male mice was unaffected ,and histopathologic examination revealed that the testis and epididymis were normal in all treatment groups. No significant adverse effects on fertility, reproduction and parturition of female mice, and growth and development of offspring were observed in all treatment groups. Conclusion: Such results indicate that glycididazolum natrium affected spermatogenesis and the function of spermatozoa, but did not affect fertility and reproduction of mice, and development of offspring under tested doses.
, 百拇医药
Key words glycididazolum natrium；reproductive toxicity
甘氨双唑钠是一种亲电子辐射放化疗增敏剂，对肿瘤乏氧细胞有明显的辐射增敏作用[1]。为评价该药的安全性，本实验按照一类新药的生殖毒性的评价要求[2]，对甘氨双唑钠的一般生殖毒性进行了研究。
1 材料和方法
1.1 药品和动物 甘氨双唑钠，白色疏松固体，批号931010，含量>98.0%，由第二军医大学海军医学系放射医学研究室提供。临用前在无菌条件下用灭菌生理盐水配制。性成熟ICR小鼠，雄性体质量25～30 g，雌性27～33 g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。动物按随机区组法分组，每组20～22只。设33.3，100.0，300.0 mg/kg(相当于腹腔注射LD50的1/130，1/40和1/13)3个剂量组和一个溶剂对照组(生理盐水)。雄鼠采用腹腔注射给药，雌鼠采用皮下注射给药。给药容积0.01 ml/g。
, 百拇医药
1.2 试验方法 雄鼠于交配前连续给药60 d，雌鼠于交配前14 d给药，然后雄雌鼠按1∶1交配1周，其中雌鼠继续给药至妊娠15 d。雄鼠于交配后即处死作生殖毒性检查，其中精子计数和精子活动度参照文献[3]的方法进行；睾丸病理标本用Bouin液固定，常规脱水，石蜡包埋切片，HE染色。交配的雌鼠1/2于妊娠第14天处死，观察妊娠后果；另1/2自然分娩，仔鼠观察至35 d，然后处死，观察有无畸形，内脏畸形采用原位法观察[4]。
1.3 观察指标 雌鼠：死亡数及一般健康状况。每周体质量、受孕率等。雄鼠：饮水量、食物消耗量、每周体质量、附睾尾精子计数和活动度分析，睾丸、附睾器官系数，交配率，睾丸组织病理学检查。孕鼠：妊娠第0，6，12和18天时的体质量、受孕率、吸收胎率、死亡率、活胎率等。仔鼠：出生存活率、哺乳存活率、生长指数、畸形等，其中第7天时剔除多余仔鼠，使各窝仔鼠为8，少于6只的窝弃之不用。
2 结 果
, 百拇医药
2.1 雄鼠 各试验组给药期间饮水量和食物消耗量与对照组方差分析比较差异无显著性。33.3，100.0和300.0 mg/kg组体质量的增长值(
±s)分别为(9.37±2.03)，(8.70±2.18)和(7.80±1.66) g，给药期间体质量增长受到一定程度影响，有剂量-反应趋势，其中高剂量组增长与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)，说明高剂量组雄鼠已产生毒性反应 。中、高剂量组动物睾丸器官系数与对照组比较有增加(10.02±2.507) g (P<0.05)。但病理检查结果显示，各组动物生精上皮未见退变及坏死等毒性病理反应，睾丸间质(包括间质细胞)也未见病理改变。鉴于中、高剂量组雄鼠体质量均有降低，似可认为睾丸器官系数的增加主要是由于体质量降低，造成睾丸相对质量增加所致，而非睾丸病变所致。表1结果显示，甘氨双唑钠可导致雄性小鼠精子数明显下降。对活精子率似有轻度影响，但无统计学差异。对精子活动度如按Ⅰ级和Ⅱ级活动度计，有随剂量增加精子活动度下降的趋势，但对雄鼠的生育率未见明显影响。
, 百拇医药
表 1 甘氨双唑钠对雄性生殖功能的影响
Tab 1 Effect of glycididazolum natrium on reproductive function
of male mice(n=20)
Dosage
(wB/mg*kg-1)
Sperm count
(±s,×104/ml)
, 百拇医药
Rate of living
sperm(%)
Sperm motility(%)
Rate of mating(%)
Ⅰ～Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
0.0
350.6±38.4
89.75
61.8
29.9
, 百拇医药
10.3
86.96
33.3
310.2±25.2*
88.14
58.8
29.3
11.9
90.90
100.0
249.7±69.4**
80.36
, 百拇医药
42.4
37.9
19.6
100.00
300.0
278.4±48.9**
74.92
38.7
36.2
25.2
81.82
*P<0.05, **P<0.01 vs control group
, http://www.100md.com
2.2 雌鼠 试验期间各组动物一般健康状况良好,未见明显的毒性反应,其体质量变化及受孕率也未见明显的改变。
2.3 孕鼠和子代 各试验组孕鼠在妊娠期间一般健康状况良好，孕鼠体质量增加数与对照组比较差异无统计学意义。甘氨双唑钠对吸收胎率、死亡率、活胎率和每窝平均活胎数均无明显影响。甘氨双唑钠对出生后第4天的仔鼠存活率、第35天的哺育存活率及仔鼠生长指数均无明显影响，与对照组比较均无统计学差异，也未观察到仔鼠畸形，表明甘氨双唑钠对出生后仔鼠的生长发育无明显影响。
3 讨 论
甘氨双唑钠系一类新药，目前尚未见同类药物的生殖毒性的研究报道。本研究显示，甘氨双唑钠在受试剂量下，可引起雄性小鼠的生殖毒性反应，导致精子数减少和精子活动度降低，但睾丸无病理形态学改变，也未影响雄鼠生殖能力。甘氨双唑钠对雌鼠受孕率和对妊娠后果无不良影响。
, 百拇医药
参 考 文 献
1 郑秀龙, 赵 芳. 甲硝羟乙唑及其衍生物对小鼠实体瘤辐射增敏作用的比较. 第二军医大学学报，1987，7(2)：91
2 中华人民共和国卫生部药政局. 新药(西药)临床前研究指导原则汇编. 北京：中华人民共和国卫生部药政局，1993. 216～217
3 Wyrobek AJ，Gordon LA，Burkhart JG，et al. An evaluation of the mouse sperm morphology test and other sperm tests in non- human mammals . Mutat Res，1983，115(1):1
4 Tayloy P. Practical teratology. London: Academic Press, 1986.48～76
(1998-03-20收稿， 1998-08-05修回)
, http://www.100md.com
单位：
关键词：甘氨双唑钠；生殖毒性
摘要 目的摘要 目的：评价甘氨双唑钠的一般生殖毒性。方法：采用Ⅰ段生殖毒性试验。设0，33.3，100.0和300.0 mg/kg 4个组。雄性ICR小鼠交配前经腹腔注射连续给药60 d，雌性小鼠交配前经皮下注射连续给药14 d，然后继续给药至哺乳期结束。结果：各剂量组给药期间对雄性小鼠体质量增长有不同程度的影响，其中高剂量组与对照组比较差异有统计学意义；中、高剂量组睾丸质量增加；各剂量组附睾精子数均降低，精子活动度也有不同程度的下降，但对生育率无明显影响，睾丸组织也未见明显的病理改变。结论：在受试剂量下，该药对雄鼠有一定的生殖毒性，但对生育率和雌鼠生殖功能以及子代无明显影响。
中国图书资料分类法分类号 R595.4
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General reproductive toxicity assessment of glycididazolum natrium in ICR mice
Zhang Tianbao, He Qingyu, Chen Yaofu, Yin Muquan (Department of Hygienic Toxicology，Department of Basic Medicine，Second Military Medical University, Shanghai, 200433)
Abstract Objective: To study general reproductive toxicity of glycididazolum natrium. Methods: Segment Ⅰ，fertility and general reproductive toxicity test. Adult ICR male mice were given i.p. at the doses of 0, 33.3, 100.0 and 300.0 mg/(kg*d) for 60 d before mating with females that received the same doses by subcutaneous injection during 14 d just prior to mating. Treatment of female mice with the drug was continued on 15 d of gestation. Results: Decreased of male mice body weight gained during treatment was founded in 300.0 mg/kg group. Increase of testicular weights, decreased of sperm count and sperm motility were observed in 100.0 and 300.0 mg/kg groups. However, mating rate of male mice was unaffected ,and histopathologic examination revealed that the testis and epididymis were normal in all treatment groups. No significant adverse effects on fertility, reproduction and parturition of female mice, and growth and development of offspring were observed in all treatment groups. Conclusion: Such results indicate that glycididazolum natrium affected spermatogenesis and the function of spermatozoa, but did not affect fertility and reproduction of mice, and development of offspring under tested doses.
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Key words glycididazolum natrium；reproductive toxicity
甘氨双唑钠是一种亲电子辐射放化疗增敏剂，对肿瘤乏氧细胞有明显的辐射增敏作用[1]。为评价该药的安全性，本实验按照一类新药的生殖毒性的评价要求[2]，对甘氨双唑钠的一般生殖毒性进行了研究。
1 材料和方法
1.1 药品和动物 甘氨双唑钠，白色疏松固体，批号931010，含量>98.0%，由第二军医大学海军医学系放射医学研究室提供。临用前在无菌条件下用灭菌生理盐水配制。性成熟ICR小鼠，雄性体质量25～30 g，雌性27～33 g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。动物按随机区组法分组，每组20～22只。设33.3，100.0，300.0 mg/kg(相当于腹腔注射LD50的1/130，1/40和1/13)3个剂量组和一个溶剂对照组(生理盐水)。雄鼠采用腹腔注射给药，雌鼠采用皮下注射给药。给药容积0.01 ml/g。
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1.2 试验方法 雄鼠于交配前连续给药60 d，雌鼠于交配前14 d给药，然后雄雌鼠按1∶1交配1周，其中雌鼠继续给药至妊娠15 d。雄鼠于交配后即处死作生殖毒性检查，其中精子计数和精子活动度参照文献[3]的方法进行；睾丸病理标本用Bouin液固定，常规脱水，石蜡包埋切片，HE染色。交配的雌鼠1/2于妊娠第14天处死，观察妊娠后果；另1/2自然分娩，仔鼠观察至35 d，然后处死，观察有无畸形，内脏畸形采用原位法观察[4]。
1.3 观察指标 雌鼠：死亡数及一般健康状况。每周体质量、受孕率等。雄鼠：饮水量、食物消耗量、每周体质量、附睾尾精子计数和活动度分析，睾丸、附睾器官系数，交配率，睾丸组织病理学检查。孕鼠：妊娠第0，6，12和18天时的体质量、受孕率、吸收胎率、死亡率、活胎率等。仔鼠：出生存活率、哺乳存活率、生长指数、畸形等，其中第7天时剔除多余仔鼠，使各窝仔鼠为8，少于6只的窝弃之不用。
2 结 果
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2.1 雄鼠 各试验组给药期间饮水量和食物消耗量与对照组方差分析比较差异无显著性。33.3，100.0和300.0 mg/kg组体质量的增长值(
±s)分别为(9.37±2.03)，(8.70±2.18)和(7.80±1.66) g，给药期间体质量增长受到一定程度影响，有剂量-反应趋势，其中高剂量组增长与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)，说明高剂量组雄鼠已产生毒性反应 。中、高剂量组动物睾丸器官系数与对照组比较有增加(10.02±2.507) g (P<0.05)。但病理检查结果显示，各组动物生精上皮未见退变及坏死等毒性病理反应，睾丸间质(包括间质细胞)也未见病理改变。鉴于中、高剂量组雄鼠体质量均有降低，似可认为睾丸器官系数的增加主要是由于体质量降低，造成睾丸相对质量增加所致，而非睾丸病变所致。表1结果显示，甘氨双唑钠可导致雄性小鼠精子数明显下降。对活精子率似有轻度影响，但无统计学差异。对精子活动度如按Ⅰ级和Ⅱ级活动度计，有随剂量增加精子活动度下降的趋势，但对雄鼠的生育率未见明显影响。, 百拇医药
表 1 甘氨双唑钠对雄性生殖功能的影响
Tab 1 Effect of glycididazolum natrium on reproductive function
of male mice(n=20)
Dosage
(wB/mg*kg-1)
Sperm count
(
±s,×104/ml), 百拇医药
Rate of living
sperm(%)
Sperm motility(%)
Rate of mating(%)
Ⅰ～Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
0.0
350.6±38.4
89.75
61.8
29.9
, 百拇医药
10.3
86.96
33.3
310.2±25.2*
88.14
58.8
29.3
11.9
90.90
100.0
249.7±69.4**
80.36
, 百拇医药
42.4
37.9
19.6
100.00
300.0
278.4±48.9**
74.92
38.7
36.2
25.2
81.82
*P<0.05, **P<0.01 vs control group
, http://www.100md.com
2.2 雌鼠 试验期间各组动物一般健康状况良好,未见明显的毒性反应,其体质量变化及受孕率也未见明显的改变。
2.3 孕鼠和子代 各试验组孕鼠在妊娠期间一般健康状况良好，孕鼠体质量增加数与对照组比较差异无统计学意义。甘氨双唑钠对吸收胎率、死亡率、活胎率和每窝平均活胎数均无明显影响。甘氨双唑钠对出生后第4天的仔鼠存活率、第35天的哺育存活率及仔鼠生长指数均无明显影响，与对照组比较均无统计学差异，也未观察到仔鼠畸形，表明甘氨双唑钠对出生后仔鼠的生长发育无明显影响。
3 讨 论
甘氨双唑钠系一类新药，目前尚未见同类药物的生殖毒性的研究报道。本研究显示，甘氨双唑钠在受试剂量下，可引起雄性小鼠的生殖毒性反应，导致精子数减少和精子活动度降低，但睾丸无病理形态学改变，也未影响雄鼠生殖能力。甘氨双唑钠对雌鼠受孕率和对妊娠后果无不良影响。
, 百拇医药
参 考 文 献
1 郑秀龙, 赵 芳. 甲硝羟乙唑及其衍生物对小鼠实体瘤辐射增敏作用的比较. 第二军医大学学报，1987，7(2)：91
2 中华人民共和国卫生部药政局. 新药(西药)临床前研究指导原则汇编. 北京：中华人民共和国卫生部药政局，1993. 216～217
3 Wyrobek AJ，Gordon LA，Burkhart JG，et al. An evaluation of the mouse sperm morphology test and other sperm tests in non- human mammals . Mutat Res，1983，115(1):1
4 Tayloy P. Practical teratology. London: Academic Press, 1986.48～76
(1998-03-20收稿， 1998-08-05修回)
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