衰老大鼠肝线粒体质与量的改变
作者：缪明永 蔡在龙 俞超芹△ 王学敏 毛积芳 凌昌全△
单位：
关键词：线粒体；氧化还原酶类；衰老
摘要 目的摘要 目的：用抗高血压药尼群地平(Nit)及肼屈嗪(Hyd)研究血压波动性(BPV)的改变与靶器官损伤(TOD)的关系。方法：将自发性高血压大鼠(SHR)随机分3组，一组为对照组，另两组分别用Nit及Hyd治疗16周。记录24 h血压,计算出BPV；取心、脑、肾和脾做大体标本，行光镜、电镜病理检查，参照TOD半量化指标对损伤程度评分，所得分数与BPV作相关性分析。结果：两个治疗组血压基本相近，比对照组明显下降；BPV：Nit组<对照组
中国图书资料分类法分类号 R544.1
Effects of changing blood pressure variability on target organs damage in spontaneously hypertensive rats
Liu Jianguo, Gong Kan, Cheng Yong, Chu Zhengxu, Su Dingfeng (Department of Pharmacology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University, Shanghai, 200433)
Abstract Objective: To study the relationship between blood pressure variability (BPV) and target organs damage (TOD) in spontaneously hypertensive rats (SHR) by two antihypertensive drugs, nitrendipine (Nit) and hydralazine (Hyd). Methods: The rats were divided into control group, Nit group and Hyd group. After 16 weeks, intra-arterial blood pressure was continuously recorded for 24 h in freely moving rats by micro-computer system. BPV was characterized by standard deviation. After two days, serum creatinine and blood urea nitrogen were determined and the sections of cerebra, heart, kidney and spleen stained with the special methods to assess the severity of TOD. According to predetermined criteria, each animal gained its score.With this score,the relationship between BPV and TOD was analyzed. Results: The average BP of the two drug therapy groups reduced about 7.3 kPa compared with that of control group (P<0.001). But BPV and TOD were Nit group
Key words blood pressure variability; target organs damage; hypertensive, spontaneously; antihypertensive drug
抗高血压药物治疗能否减轻或预防靶器官损伤(TOD)是多年来倍受人们关注的问题。研究证实,血压波动性(BPV)与高血压造成的TOD程度呈正相关，即在血压水平接近的高血压患者和高血压动物模型中，BPV高者，其TOD程度也较严重[1～3]。尽管目前对BPV引起TOD的机制尚不十分清楚，但这一现象确实受到研究人员的重视。我们选用了对BPV有不同影响的抗高血压药物，在同等程度降压的基础上，观察BPV的变化对TOD程度有何影响。
1 材料和方法
1.1 动物与分组 自发性高血压大鼠(SHR)由上海市高血压研究所提供。16周龄时用MRB-ⅢA电脑大鼠血压心率测量仪(上海市高血压研究所)测尾动脉血压，收缩压高于21.3 kPa的160只大鼠被随机分为3组。
, 百拇医药
1.2 药物与剂量 根据预实验结果，选用降压作用确切且能降低BPV的药物尼群地平(Nit，河北石家庄新华制药厂)，以及能降低血压，但对BPV有升高作用的药物肼屈嗪(Hyd,江苏常州市第四制药厂)，分别加入大鼠标准饲料内制成饼干口服，剂量分别为Nit：15 mg/(kg*d); Hyd: 40 mg/(kg*d)。两治疗组大鼠从16周龄开始用含药饲料喂养到32周，对照组用标准饲料喂养。
1.3 血压与BPV的测定 采用计算机化清醒自由活动大鼠血压监测技术[4，5]，连续实时记录24 h每一心动周期的收缩压(SBP)、舒张压(DBP)和心动周期(HP)，脱机计算24 h内SBP，DBP的均数及长期BPV。
1.4 TOD程度评估指标 动物记录完血压后恢复2 d,采静脉血测肌酸酐和尿素氮，而后静脉注射KCl处死动物，取心、脑、肾和脾，外观检查测量后，按常规方法石蜡包埋制成组织切片，分别做苏木素-伊红染色和Verhoff弹力纤维染色，将TOD的严重程度转化为半量化指标。参考有关文献[6，7]制定TOD评分标准(表1)。
, 百拇医药
表 1 器官质量及大小变化评分标准
Tab 1 Scoring criteria for assessment of organs mass and size
Alteration in mass
and size organs
Score
0
1
2
Heart mass/body mass(%)
Females
, http://www.100md.com
<0.40
0.40～0.54
≥0.55
Males
<0.35
0.35～0.49
≥0.50
Kidney mass/body mass(%)
Females
>0.90
0.76～0.90
≤0.75
, http://www.100md.com
Males
>0.80
0.66～0.80
≤0.65
Left ventricular thickness/
<3.50
3.50～4.99
≥0.05
right ventricular thickness
Renal cortical thickness/
>0.40
, 百拇医药
0.31～0.40
≤0.30
renal medullary thickness
Scoring criteria are referred to the corresponding values of
SD rats at 32 weeks of age
1.5 考察项目 (1)器官切片的光学显微镜检查：冠状动脉硬化、心脏细胞肥大、肾小球(管)萎缩或代偿性肥大、肾脏血管硬化变性、大脑出血软化、脾中央动脉硬化变性等病变及程度。各项检查中，正常为0；发生轻度变化为1；发生显著变化为2。(2)标本检查：测量主要器官质量及大小的变化，其器官相对质量及大小变化的分级标准对照相同年龄的SD大鼠制定。(3)肾功能检查：项目为血清肌酸酐和血清尿素氮，正常为0，异常为1。(4)外观病变附加分：分别观察有无中风偏瘫、心肌梗死及有无肾脏表面晦暗、呈颗粒状，无为0；有为1。
, 百拇医药
1.6 统计学处理 组间比较用非配对资料t检验，相关性研究用直线回归法。
2 结 果
2.1 Hyd与Nit对BP和BPV的影响 研究结果表明两种药物均有明显的降压作用，与对照组相比，SBP，DBP下降均>6.7 kPa。两个治疗组大鼠血压比较接近，Nit组为20.9/13.9 kPa,Hyd组为21.7/13.5 kPa,对照组为28.7/21.1 kPa (图1)。但BPV却有较大差别，Nit组显著低于Hyd组[(0.9±0.3) vs (1.5±0.4) kPa，P<0.05，图2]。BPV高的组TOD损伤程度也相对较重(图3)。
图 1 治疗组与对照组24 h血压比较
, http://www.100md.com
Fig 1 Comparing of 24 h BP between therapy and control groups
□ Nit (n=47); ■ Hyd (n=45); □ Control (n=50)
***P<0.001 vs control group
2.2 TOD程度 各器官损伤评分表明，Hyd组器官损伤最为明显，甚至比对照组还要严重，而Nit组TOD损伤最轻(表2)。
2.3 BPV与TOD的关系 3组TOD综合后的评分与其相应的BPV进行直线回归相关分析显示，两者之间有显著的相关性，对照组、Nit组和Hyd组r值分别为0.630，0.592，0.656，P均<0.001。在BP
, http://www.100md.com
图 2 24 h血压的波动性比较
Fig 2 Comparison of 24 h BPV in three groups
□ Nit (n=47); ■ Hyd (n=45); □ Control (n=50)
*P<0.05, **P<0.01 vs control group
图 3 靶器官损伤的评分
Fig 3 The score of TOD
, http://www.100md.com
□ Nit (n=47); ■ Hyd (n=45); □ Control (n=50)
*P<0.05, **P<0.01 vs control group
表 2 各组器官损伤评分
Tab 2 The scores of organ damage in Nit, Hyd
and control groups of SHR(
±s)
Group
, 百拇医药
n
Heart
Kidney
Spleen
Brain
Control
50
1.5±0.5
2.7±0.4
1.3±0.2
0.4±0.2
Nit
47
, 百拇医药
0.9±0.3*
2.4±0.5*
1.1±0.3
0.2±0.1*
Hyd
45
2.1±0.7**
3.2±0.6**
1.9±0.3**
0.7±0.4*
*P<0.05, **P<0.01 vs control group
水平接近的基础上，BPV高的SHR，其心、脑、肾有较多肉眼可见的病变，如心室壁增厚、肾脏表面有褐色斑块及颗粒，肾皮质变薄，皮质与髓质界限不清。光镜检查发现有脑动脉>Transfer interrupted!, 百拇医药
单位：
关键词：线粒体；氧化还原酶类；衰老
摘要 目的摘要 目的：用抗高血压药尼群地平(Nit)及肼屈嗪(Hyd)研究血压波动性(BPV)的改变与靶器官损伤(TOD)的关系。方法：将自发性高血压大鼠(SHR)随机分3组，一组为对照组，另两组分别用Nit及Hyd治疗16周。记录24 h血压,计算出BPV；取心、脑、肾和脾做大体标本，行光镜、电镜病理检查，参照TOD半量化指标对损伤程度评分，所得分数与BPV作相关性分析。结果：两个治疗组血压基本相近，比对照组明显下降；BPV：Nit组<对照组
中国图书资料分类法分类号 R544.1
Effects of changing blood pressure variability on target organs damage in spontaneously hypertensive rats
Liu Jianguo, Gong Kan, Cheng Yong, Chu Zhengxu, Su Dingfeng (Department of Pharmacology, Department of Basic Medicine, Second Military Medical University, Shanghai, 200433)
Abstract Objective: To study the relationship between blood pressure variability (BPV) and target organs damage (TOD) in spontaneously hypertensive rats (SHR) by two antihypertensive drugs, nitrendipine (Nit) and hydralazine (Hyd). Methods: The rats were divided into control group, Nit group and Hyd group. After 16 weeks, intra-arterial blood pressure was continuously recorded for 24 h in freely moving rats by micro-computer system. BPV was characterized by standard deviation. After two days, serum creatinine and blood urea nitrogen were determined and the sections of cerebra, heart, kidney and spleen stained with the special methods to assess the severity of TOD. According to predetermined criteria, each animal gained its score.With this score,the relationship between BPV and TOD was analyzed. Results: The average BP of the two drug therapy groups reduced about 7.3 kPa compared with that of control group (P<0.001). But BPV and TOD were Nit group
Key words blood pressure variability; target organs damage; hypertensive, spontaneously; antihypertensive drug
抗高血压药物治疗能否减轻或预防靶器官损伤(TOD)是多年来倍受人们关注的问题。研究证实,血压波动性(BPV)与高血压造成的TOD程度呈正相关，即在血压水平接近的高血压患者和高血压动物模型中，BPV高者，其TOD程度也较严重[1～3]。尽管目前对BPV引起TOD的机制尚不十分清楚，但这一现象确实受到研究人员的重视。我们选用了对BPV有不同影响的抗高血压药物，在同等程度降压的基础上，观察BPV的变化对TOD程度有何影响。
1 材料和方法
1.1 动物与分组 自发性高血压大鼠(SHR)由上海市高血压研究所提供。16周龄时用MRB-ⅢA电脑大鼠血压心率测量仪(上海市高血压研究所)测尾动脉血压，收缩压高于21.3 kPa的160只大鼠被随机分为3组。
, 百拇医药
1.2 药物与剂量 根据预实验结果，选用降压作用确切且能降低BPV的药物尼群地平(Nit，河北石家庄新华制药厂)，以及能降低血压，但对BPV有升高作用的药物肼屈嗪(Hyd,江苏常州市第四制药厂)，分别加入大鼠标准饲料内制成饼干口服，剂量分别为Nit：15 mg/(kg*d); Hyd: 40 mg/(kg*d)。两治疗组大鼠从16周龄开始用含药饲料喂养到32周，对照组用标准饲料喂养。
1.3 血压与BPV的测定 采用计算机化清醒自由活动大鼠血压监测技术[4，5]，连续实时记录24 h每一心动周期的收缩压(SBP)、舒张压(DBP)和心动周期(HP)，脱机计算24 h内SBP，DBP的均数及长期BPV。
1.4 TOD程度评估指标 动物记录完血压后恢复2 d,采静脉血测肌酸酐和尿素氮，而后静脉注射KCl处死动物，取心、脑、肾和脾，外观检查测量后，按常规方法石蜡包埋制成组织切片，分别做苏木素-伊红染色和Verhoff弹力纤维染色，将TOD的严重程度转化为半量化指标。参考有关文献[6，7]制定TOD评分标准(表1)。
, 百拇医药
表 1 器官质量及大小变化评分标准
Tab 1 Scoring criteria for assessment of organs mass and size
Alteration in mass
and size organs
Score
0
1
2
Heart mass/body mass(%)
Females
, http://www.100md.com
<0.40
0.40～0.54
≥0.55
Males
<0.35
0.35～0.49
≥0.50
Kidney mass/body mass(%)
Females
>0.90
0.76～0.90
≤0.75
, http://www.100md.com
Males
>0.80
0.66～0.80
≤0.65
Left ventricular thickness/
<3.50
3.50～4.99
≥0.05
right ventricular thickness
Renal cortical thickness/
>0.40
, 百拇医药
0.31～0.40
≤0.30
renal medullary thickness
Scoring criteria are referred to the corresponding values of
SD rats at 32 weeks of age
1.5 考察项目 (1)器官切片的光学显微镜检查：冠状动脉硬化、心脏细胞肥大、肾小球(管)萎缩或代偿性肥大、肾脏血管硬化变性、大脑出血软化、脾中央动脉硬化变性等病变及程度。各项检查中，正常为0；发生轻度变化为1；发生显著变化为2。(2)标本检查：测量主要器官质量及大小的变化，其器官相对质量及大小变化的分级标准对照相同年龄的SD大鼠制定。(3)肾功能检查：项目为血清肌酸酐和血清尿素氮，正常为0，异常为1。(4)外观病变附加分：分别观察有无中风偏瘫、心肌梗死及有无肾脏表面晦暗、呈颗粒状，无为0；有为1。
, 百拇医药
1.6 统计学处理 组间比较用非配对资料t检验，相关性研究用直线回归法。
2 结 果
2.1 Hyd与Nit对BP和BPV的影响 研究结果表明两种药物均有明显的降压作用，与对照组相比，SBP，DBP下降均>6.7 kPa。两个治疗组大鼠血压比较接近，Nit组为20.9/13.9 kPa,Hyd组为21.7/13.5 kPa,对照组为28.7/21.1 kPa (图1)。但BPV却有较大差别，Nit组显著低于Hyd组[(0.9±0.3) vs (1.5±0.4) kPa，P<0.05，图2]。BPV高的组TOD损伤程度也相对较重(图3)。
图 1 治疗组与对照组24 h血压比较
, http://www.100md.com
Fig 1 Comparing of 24 h BP between therapy and control groups
□ Nit (n=47); ■ Hyd (n=45); □ Control (n=50)
***P<0.001 vs control group
2.2 TOD程度 各器官损伤评分表明，Hyd组器官损伤最为明显，甚至比对照组还要严重，而Nit组TOD损伤最轻(表2)。
2.3 BPV与TOD的关系 3组TOD综合后的评分与其相应的BPV进行直线回归相关分析显示，两者之间有显著的相关性，对照组、Nit组和Hyd组r值分别为0.630，0.592，0.656，P均<0.001。在BP
, http://www.100md.com
图 2 24 h血压的波动性比较
Fig 2 Comparison of 24 h BPV in three groups
□ Nit (n=47); ■ Hyd (n=45); □ Control (n=50)
*P<0.05, **P<0.01 vs control group
图 3 靶器官损伤的评分
Fig 3 The score of TOD
, http://www.100md.com
□ Nit (n=47); ■ Hyd (n=45); □ Control (n=50)
*P<0.05, **P<0.01 vs control group
表 2 各组器官损伤评分
Tab 2 The scores of organ damage in Nit, Hyd
and control groups of SHR(
±s)Group
, 百拇医药
n
Heart
Kidney
Spleen
Brain
Control
50
1.5±0.5
2.7±0.4
1.3±0.2
0.4±0.2
Nit
47
, 百拇医药
0.9±0.3*
2.4±0.5*
1.1±0.3
0.2±0.1*
Hyd
45
2.1±0.7**
3.2±0.6**
1.9±0.3**
0.7±0.4*
*P<0.05, **P<0.01 vs control group
水平接近的基础上，BPV高的SHR，其心、脑、肾有较多肉眼可见的病变，如心室壁增厚、肾脏表面有褐色斑块及颗粒，肾皮质变薄，皮质与髓质界限不清。光镜检查发现有脑动脉>Transfer interrupted!, 百拇医药