前列腺增生梗阻性逼尿肌不稳定对逼尿肌胆碱能神经的影响
作者：曹润福 彭轼平 张时纯 齐范
单位：330006 南昌，江西医学院第一附属医院泌尿外科(曹润福、彭轼平)；湖南医科大学湘雅医院泌尿外科(张时纯、齐范)
关键词：前列腺肥大；尿道梗阻；膀胱，神经原性
中华外科杂志/980714 【摘要】 目的 探讨前列腺增生(BPH)梗阻性逼尿肌不稳定与乙酰胆碱能神经的关系。 方法 根据尿动力学，将研究对象分为BPH梗阻逼尿肌稳定和梗阻逼尿肌不稳定组，并设无梗阻的膀胱肿瘤患者作为对照。取膀胱顶部逼尿肌作HE、Karnovsky-Root直接法染色，乙酰胆碱脂酶(AchE)结合镀银法染色、电镜观察和图像分析，通过形态测定检测了逼尿肌AchE阳性神经密度。 结果 梗阻不稳定组和稳定组AchE阳性神经密度较正常对照明显降低(P<0.01)，且不稳定组AchE 阳性神经密度较稳定组也明显减低(P<0.05)。 结论 BPH梗阻性逼尿肌不稳定与逼尿肌胆碱能神经密度降低(去神经)程度有关。
, 百拇医药
The effect of detrusor instability secondary to benign prostatic hypertrophy on the density of acetylcholinesterase-containing nerves Cao Runfu, Peng Shiping, Zhang Shichun, et al.Department of Urology,First Affiliated Hospital，Jiangxi Medical College,Nanchang 330006.
【Abstract】 Objective To study the effect of detrusor instability secondary to benign prostatic hypertrophy (BPH) on the density of cholinesterase-containing nerve in detrusor samples. Method Our present study included 3 groups confirmed by urodynamic evaluation. They were control group( 8 cases) , obstructive detrusor stability group (7), and obstructive instability group (12). The specimens were obtained from the dome of bladder. The AchE-containing nerves were demonstrated by the method of Karnovsky-Roots staining and AchE silver staining. The density of AchE containing detrusor nerves in specimens was examined with sterologic techniques. Result The density of AchE-containing nerves in the obstructive detrusor instability group and the stability group was significantly decreased as compared with the control group(P<0.01). The density of AchE positive nerves were also significantly decreased in the obstructive instability group as compared with the obstructive stability group (P<0.05). Conclusion Detrusor instability secondary to BPH obstruction is related to the decrease of cholinergic innervation density in the detrusor muscles.
, http://www.100md.com
【Key words】 Prostatic hypertrophy Urethral obstruction Bladder,neurogenic
前列腺增生(BPH)是老年男性常见病，约52%～80%BPH合并逼尿肌不稳定，目前其发生机理仍未完全清楚。我们应用Karnovsky-Root直接法和结合镀银方法，通过形态测定法来探讨BPH梗阻性逼尿肌不稳定与逼尿肌胆碱能神经的关系，旨在探讨逼尿肌不稳定的发病机理。
资料与方法
一、病例选择及分组
本研究对象为1996年4月～12月住院患者，均排除神经系统疾病和糖尿病。尿常规、尿培养阴性。术前半月均未应用影响受体、尿流动力学的药物。作为对照取材的肿瘤患者均未曾接受放疗、化疗。根据尿动力学检查将研究对象分为实验组和对照组。
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1.实验组：BPH患者共19例。其中尿潴留7例，年龄52～76岁。根据充盈期膀胱测压是否出现逼尿肌不稳定，将BPH患者分为两组，即逼尿肌稳定组7例和逼尿肌不稳定组12例(表1)。
2.对照组：8例。年龄54～ 68岁，其中男6例，女2例，为膀胱肿瘤患者，无排尿功能异常，均为行膀胱部分切除或膀胱全切术者。
二、取材与实验方法
取膀胱顶部逼尿肌作HE、Karnovsky-Root直接法染色[1]，乙酰胆碱脂酶(AchE)结合镀银法染色[2]、电镜观察和图像分析，利用形态测定(半定量)检测逼尿肌AchE阳性神经密度。
表1 实验组与对照组尿动力学检查情况(
±s) 分组
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例数
年龄
国际前列腺
症状评分
最大尿流率
(ml/s)
平均尿流率
(ml/s)
剩余尿
(ml)
对照组
8
59.5±5.0
, http://www.100md.com
3.1±2.7
28.0±17.8
11.5±3.8…
稳定组
7
65.8±8.9
19.7±6.1
6.8±2.6
3.5±1.4
13.3±24.2
不稳定组
12
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65.0±7.0
29.9±3.6*
7.6±3.7
3.4±1.6
72.3±12.9*
注：3组间年龄差异无显著意义(P>0.05)。*不稳定组剩余尿和IPSS与稳定组比较差异有显著性意义(P<0.05) 三、检测指标
1.逼尿肌平滑肌细胞的平均截面积(MPA)和单位面积组织中平滑肌面积：在JEM-100cx电镜下随机选择视野拍摄平滑肌照片，输入CMIAS8病理图像分析仪，测量平滑肌细胞的平均截面积和单位面积组织中平滑肌的面积。
2.组织单位面积中乙酰胆碱酯酶阳性神经数目：在Olympus光镜下放大400倍，在Karnovsky-Root染色和AchE结合镀银切片上，应用方网测试单位面积组织中乙酰胆碱阳性神经数目，每一切片选择10个没有重叠视野，应用点计数方法计数阳性神经。
, 百拇医药
3.AchE阳性神经密度：根据上述1、2项测定结果，可换算出每单位面积平滑肌中AchE阳性神经密度。为了排除BPH患者膀胱逼尿肌肥大对神经密度影响，用下述公式来校正BPH组神经密度：
实验组逼尿肌AchE阳性神经密度＝(实验组平滑肌细胞截面积的平均值/对照组平滑肌细胞截面积的平均值)×实验组单位面积平滑肌中AchE阳性神经数目。
四、统计学处理
本组资料数据采用t检验、方差分析。
结果
BPH稳定组和不稳定组AchE阳性神经密度显著低于对照组(P<0.01)，BPH不稳定组AchE阳性神经密度明显低于稳定组(P<0.05)。稳定组和不稳定组肌细胞平均截面积(MPA)与对照组相比，差异有显著性意义(P<0.05)，而稳定组和不稳定组之间差异无显著性意义(P>0.05)。BPH稳定组和不稳定组之间单位面积中平滑肌的面积差异无显著性意义(表2)。
, 百拇医药
讨论
目前还没有直接显示乙酰胆碱(Ach)神经的组织学方法。通常用水解Ach的乙酰胆碱脂酶
表2 实验组与对照组逼尿肌检测结果(±s) 组 别
单位组织中平滑肌
的面积(%)
MPA
(μm2)
AchE阳性神经
密度(点/mm2)
, 百拇医药 对照组
68.0±3.0
24.96
446±48
稳定组
61.5±7.0
34.37
282±55
不稳定组
61.8±6.8
36.60
136±80
(AchE)来表示胆碱能神经细胞的组织化学特性。Karnovsky-Root直接法是显示AchE的一种可靠的方法。这种方法显示的膀胱AchE阳性神经能准确反映乙酰胆碱神经密度。由于AchE阳性神经的染色受胆碱脂酶活性的影响，胆碱酯酶活性低，AchE阳性神经着色浅，给神经计数带来困难。因此，我们应用Karnovsky-Root直接法在AchE阳性染色基础上结合镀银染色法，使AchE阳性神经染色更清楚，更易辨认。这两种方法相结合能相互印证，相互补充，在神经计数时能更加准确反映逼尿肌AchE阳性神经的分布和变化。
, 百拇医药
梗阻可导致结缔组织浸润和肌细胞肥大，降低逼尿肌神经密度。考虑到这一因素的影响，我们在实验中对神经数目进行了校正。梗阻逼尿肌稳定和逼尿肌不稳定组结缔组织浸润和肌细胞平均截面积相似，但BPH不稳定组AchE阳性神经密度较稳定组下降更明显，所以不能用结缔组织浸润和肌细胞肥大降低逼尿肌神经密度来解释其结果。
BPH梗阻组(包括稳定和不稳定)AchE阳性神经较对照组明显降低(P<0.01)，与报道一致[3～5]，进一步证实了BPH梗阻后可导致AchE阳性神经密度减少。本实验显示逼尿肌不稳定组AchE阳性神经密度较稳定组明显减少(P<0.05)，提示3方面的意义：(1)BPH不稳定组较稳定组梗阻程度更严重，这与残余尿和国际前列腺症状评分(IPSS)较稳定组明显增加是一致的。(2)BHP梗阻性逼尿肌不稳定与胆碱能去神经有关。(3)BPH梗阻后AchE阳性神经密度减少到一定程度时，可出现逼尿肌不稳定现象。这与Harrison等[6]观察到的膀胱出口梗阻性逼尿肌不稳定肌条对外源性激动剂(Ach、卡巴可等)以及钾等具有非特异性超敏现象吻合。因此可以认为BPH梗阻性逼尿肌不稳定的产生与胆碱能神经去神经超敏有关。有报道膀胱出口梗阻解除后，尿流率增加，逼尿肌排尿压降低，逼尿肌对外源性激动剂和对壁内神经刺激的反应转向于正常，逼尿肌胆碱能神经密度增加，提示神经具有再生能力，且梗阻时间愈短，AchE神经增加更明显[7，8]。这一可逆现象也说明BPH梗阻性逼尿肌不稳定与胆碱能去神经超敏有关。
, 百拇医药
虽然从形态上可观察到了BPH梗阻逼尿肌不稳定与胆碱能去神经的程度有关，但逼尿肌去神经后引起逼尿肌超敏和不稳定的机理有待研究。
参考文献
1方德福主编.现代医学实验技巧全书. 北京：北京医科大学和中国协和医科大学联合出版社,1995.148-149.
2丁文龙，刘德明.一种改良的AchE结合镀银染色法显示骨骼肌运动终板.江西医学院学报，1993,33:74-75.
3Gosling JA,Gilpin SA,Dixon JS, et al.Decrease in the autonomic innervation of human detrusor muscle in outlow obstruction.J Urol,1986,136:501-504.
, 百拇医药
4Speakman MJ,Brading AF,Gilpin CJ, et al.Bladder outflow obstruction: a cause of denervation supersensitivity.J Urol,1987,138:1461-1466.
5谢克基，熊旭林，邵明忠，等.前列腺增生对逼尿肌胆碱酯酶阳性神经密度的影响.中华泌尿外科杂志，1992，13:362-364.
6Harrison SCW, Hunnam GR, Farman P,et al. Bladder instability and denervation in patients with bladder outflow obstruction.Br J Urol,1987,60:519-522.
7Speakman MJ,Brading AF,Dixon JS,et al.Cystometric,physiological and morphological studies after relief of bladder out flow obstruction in the pig.Br J Urol,1991,68:243-247.
8Cumming JA,Chisholm GD.Changes in detrusor innervation with relief of outflow tract obstruction. Br J Urol,1992,69:7-11., http://www.100md.com
单位：330006 南昌，江西医学院第一附属医院泌尿外科(曹润福、彭轼平)；湖南医科大学湘雅医院泌尿外科(张时纯、齐范)
关键词：前列腺肥大；尿道梗阻；膀胱，神经原性
中华外科杂志/980714 【摘要】 目的 探讨前列腺增生(BPH)梗阻性逼尿肌不稳定与乙酰胆碱能神经的关系。 方法 根据尿动力学，将研究对象分为BPH梗阻逼尿肌稳定和梗阻逼尿肌不稳定组，并设无梗阻的膀胱肿瘤患者作为对照。取膀胱顶部逼尿肌作HE、Karnovsky-Root直接法染色，乙酰胆碱脂酶(AchE)结合镀银法染色、电镜观察和图像分析，通过形态测定检测了逼尿肌AchE阳性神经密度。 结果 梗阻不稳定组和稳定组AchE阳性神经密度较正常对照明显降低(P<0.01)，且不稳定组AchE 阳性神经密度较稳定组也明显减低(P<0.05)。 结论 BPH梗阻性逼尿肌不稳定与逼尿肌胆碱能神经密度降低(去神经)程度有关。
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The effect of detrusor instability secondary to benign prostatic hypertrophy on the density of acetylcholinesterase-containing nerves Cao Runfu, Peng Shiping, Zhang Shichun, et al.Department of Urology,First Affiliated Hospital，Jiangxi Medical College,Nanchang 330006.
【Abstract】 Objective To study the effect of detrusor instability secondary to benign prostatic hypertrophy (BPH) on the density of cholinesterase-containing nerve in detrusor samples. Method Our present study included 3 groups confirmed by urodynamic evaluation. They were control group( 8 cases) , obstructive detrusor stability group (7), and obstructive instability group (12). The specimens were obtained from the dome of bladder. The AchE-containing nerves were demonstrated by the method of Karnovsky-Roots staining and AchE silver staining. The density of AchE containing detrusor nerves in specimens was examined with sterologic techniques. Result The density of AchE-containing nerves in the obstructive detrusor instability group and the stability group was significantly decreased as compared with the control group(P<0.01). The density of AchE positive nerves were also significantly decreased in the obstructive instability group as compared with the obstructive stability group (P<0.05). Conclusion Detrusor instability secondary to BPH obstruction is related to the decrease of cholinergic innervation density in the detrusor muscles.
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【Key words】 Prostatic hypertrophy Urethral obstruction Bladder,neurogenic
前列腺增生(BPH)是老年男性常见病，约52%～80%BPH合并逼尿肌不稳定，目前其发生机理仍未完全清楚。我们应用Karnovsky-Root直接法和结合镀银方法，通过形态测定法来探讨BPH梗阻性逼尿肌不稳定与逼尿肌胆碱能神经的关系，旨在探讨逼尿肌不稳定的发病机理。
资料与方法
一、病例选择及分组
本研究对象为1996年4月～12月住院患者，均排除神经系统疾病和糖尿病。尿常规、尿培养阴性。术前半月均未应用影响受体、尿流动力学的药物。作为对照取材的肿瘤患者均未曾接受放疗、化疗。根据尿动力学检查将研究对象分为实验组和对照组。
, http://www.100md.com
1.实验组：BPH患者共19例。其中尿潴留7例，年龄52～76岁。根据充盈期膀胱测压是否出现逼尿肌不稳定，将BPH患者分为两组，即逼尿肌稳定组7例和逼尿肌不稳定组12例(表1)。
2.对照组：8例。年龄54～ 68岁，其中男6例，女2例，为膀胱肿瘤患者，无排尿功能异常，均为行膀胱部分切除或膀胱全切术者。
二、取材与实验方法
取膀胱顶部逼尿肌作HE、Karnovsky-Root直接法染色[1]，乙酰胆碱脂酶(AchE)结合镀银法染色[2]、电镜观察和图像分析，利用形态测定(半定量)检测逼尿肌AchE阳性神经密度。
表1 实验组与对照组尿动力学检查情况(
±s) 分组, http://www.100md.com
例数
年龄
国际前列腺
症状评分
最大尿流率
(ml/s)
平均尿流率
(ml/s)
剩余尿
(ml)
对照组
8
59.5±5.0
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3.1±2.7
28.0±17.8
11.5±3.8…
稳定组
7
65.8±8.9
19.7±6.1
6.8±2.6
3.5±1.4
13.3±24.2
不稳定组
12
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65.0±7.0
29.9±3.6*
7.6±3.7
3.4±1.6
72.3±12.9*
注：3组间年龄差异无显著意义(P>0.05)。*不稳定组剩余尿和IPSS与稳定组比较差异有显著性意义(P<0.05) 三、检测指标
1.逼尿肌平滑肌细胞的平均截面积(MPA)和单位面积组织中平滑肌面积：在JEM-100cx电镜下随机选择视野拍摄平滑肌照片，输入CMIAS8病理图像分析仪，测量平滑肌细胞的平均截面积和单位面积组织中平滑肌的面积。
2.组织单位面积中乙酰胆碱酯酶阳性神经数目：在Olympus光镜下放大400倍，在Karnovsky-Root染色和AchE结合镀银切片上，应用方网测试单位面积组织中乙酰胆碱阳性神经数目，每一切片选择10个没有重叠视野，应用点计数方法计数阳性神经。
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3.AchE阳性神经密度：根据上述1、2项测定结果，可换算出每单位面积平滑肌中AchE阳性神经密度。为了排除BPH患者膀胱逼尿肌肥大对神经密度影响，用下述公式来校正BPH组神经密度：
实验组逼尿肌AchE阳性神经密度＝(实验组平滑肌细胞截面积的平均值/对照组平滑肌细胞截面积的平均值)×实验组单位面积平滑肌中AchE阳性神经数目。
四、统计学处理
本组资料数据采用t检验、方差分析。
结果
BPH稳定组和不稳定组AchE阳性神经密度显著低于对照组(P<0.01)，BPH不稳定组AchE阳性神经密度明显低于稳定组(P<0.05)。稳定组和不稳定组肌细胞平均截面积(MPA)与对照组相比，差异有显著性意义(P<0.05)，而稳定组和不稳定组之间差异无显著性意义(P>0.05)。BPH稳定组和不稳定组之间单位面积中平滑肌的面积差异无显著性意义(表2)。
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讨论
目前还没有直接显示乙酰胆碱(Ach)神经的组织学方法。通常用水解Ach的乙酰胆碱脂酶
表2 实验组与对照组逼尿肌检测结果(
±s) 组 别单位组织中平滑肌
的面积(%)
MPA
(μm2)
AchE阳性神经
密度(点/mm2)
, 百拇医药 对照组
68.0±3.0
24.96
446±48
稳定组
61.5±7.0
34.37
282±55
不稳定组
61.8±6.8
36.60
136±80
(AchE)来表示胆碱能神经细胞的组织化学特性。Karnovsky-Root直接法是显示AchE的一种可靠的方法。这种方法显示的膀胱AchE阳性神经能准确反映乙酰胆碱神经密度。由于AchE阳性神经的染色受胆碱脂酶活性的影响，胆碱酯酶活性低，AchE阳性神经着色浅，给神经计数带来困难。因此，我们应用Karnovsky-Root直接法在AchE阳性染色基础上结合镀银染色法，使AchE阳性神经染色更清楚，更易辨认。这两种方法相结合能相互印证，相互补充，在神经计数时能更加准确反映逼尿肌AchE阳性神经的分布和变化。
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梗阻可导致结缔组织浸润和肌细胞肥大，降低逼尿肌神经密度。考虑到这一因素的影响，我们在实验中对神经数目进行了校正。梗阻逼尿肌稳定和逼尿肌不稳定组结缔组织浸润和肌细胞平均截面积相似，但BPH不稳定组AchE阳性神经密度较稳定组下降更明显，所以不能用结缔组织浸润和肌细胞肥大降低逼尿肌神经密度来解释其结果。
BPH梗阻组(包括稳定和不稳定)AchE阳性神经较对照组明显降低(P<0.01)，与报道一致[3～5]，进一步证实了BPH梗阻后可导致AchE阳性神经密度减少。本实验显示逼尿肌不稳定组AchE阳性神经密度较稳定组明显减少(P<0.05)，提示3方面的意义：(1)BPH不稳定组较稳定组梗阻程度更严重，这与残余尿和国际前列腺症状评分(IPSS)较稳定组明显增加是一致的。(2)BHP梗阻性逼尿肌不稳定与胆碱能去神经有关。(3)BPH梗阻后AchE阳性神经密度减少到一定程度时，可出现逼尿肌不稳定现象。这与Harrison等[6]观察到的膀胱出口梗阻性逼尿肌不稳定肌条对外源性激动剂(Ach、卡巴可等)以及钾等具有非特异性超敏现象吻合。因此可以认为BPH梗阻性逼尿肌不稳定的产生与胆碱能神经去神经超敏有关。有报道膀胱出口梗阻解除后，尿流率增加，逼尿肌排尿压降低，逼尿肌对外源性激动剂和对壁内神经刺激的反应转向于正常，逼尿肌胆碱能神经密度增加，提示神经具有再生能力，且梗阻时间愈短，AchE神经增加更明显[7，8]。这一可逆现象也说明BPH梗阻性逼尿肌不稳定与胆碱能去神经超敏有关。
, 百拇医药
虽然从形态上可观察到了BPH梗阻逼尿肌不稳定与胆碱能去神经的程度有关，但逼尿肌去神经后引起逼尿肌超敏和不稳定的机理有待研究。
参考文献
1方德福主编.现代医学实验技巧全书. 北京：北京医科大学和中国协和医科大学联合出版社,1995.148-149.
2丁文龙，刘德明.一种改良的AchE结合镀银染色法显示骨骼肌运动终板.江西医学院学报，1993,33:74-75.
3Gosling JA,Gilpin SA,Dixon JS, et al.Decrease in the autonomic innervation of human detrusor muscle in outlow obstruction.J Urol,1986,136:501-504.
, 百拇医药
4Speakman MJ,Brading AF,Gilpin CJ, et al.Bladder outflow obstruction: a cause of denervation supersensitivity.J Urol,1987,138:1461-1466.
5谢克基，熊旭林，邵明忠，等.前列腺增生对逼尿肌胆碱酯酶阳性神经密度的影响.中华泌尿外科杂志，1992，13:362-364.
6Harrison SCW, Hunnam GR, Farman P,et al. Bladder instability and denervation in patients with bladder outflow obstruction.Br J Urol,1987,60:519-522.
7Speakman MJ,Brading AF,Dixon JS,et al.Cystometric,physiological and morphological studies after relief of bladder out flow obstruction in the pig.Br J Urol,1991,68:243-247.
8Cumming JA,Chisholm GD.Changes in detrusor innervation with relief of outflow tract obstruction. Br J Urol,1992,69:7-11., http://www.100md.com