冠心病患者低密度脂蛋白亚组分的分布及氧化易感性的研究
作者：汪俊军 庄一义 刘小传 李露言
单位：210002 南京军区南京总医院全军医学检验中心(汪俊军、庄一义、刘小传)，心内科(李露言)
关键词：
中华医学杂志981110 根据低密度脂蛋白(LDL)颗粒的大小、密度不同，分成A型和B型两个亚组分。以B型为主的LDL是动脉粥样硬化(As)发生的强危险因素[1，2]。冠心脏病(CHD)患者LDL氧化易感性同As发生程度相关[3]；健康人群中B型LDL亚组分较A型易于氧化[4]，而CHD患者LDL亚组分间氧化易感性少见报道。我们对CHD患者LDL亚组分的分布及氧化易感性进行分析。
一、对象与方法
1.对象：CHD患者为男性心肌梗塞存活者，年龄50～65岁，22例；对照组为男性，年龄相近的体检正常人群20例。收集EDTA-Na2(1 mg/ml)抗凝空腹血浆。
, http://www.100md.com
2.试剂和仪器：总胆固醇(CH)、高密度脂蛋白(HDL)、甘油三酯(TG)、ApoAI及B试剂均为上海长征公司产品；牛血清白蛋白为BM公司，丙二醛修饰LDL单抗自制；超速离心机为美国Beckman公司产，紫外分光光度计为日本岛津产品；其他试剂均为国产分析纯。
3.LDL亚组分分离：1.5 ml血浆用KBr调密度为1.10 g/ml加入离心管底部，依次加入1.065、1.035、1.020、1.006 g/ml的KBr溶液2.0、2.5、2.5、2.0 ml，超速离心48 000r/min，20小时。由上起依次吸取1～7管不同密度成分(1.0、1.5、1.5、1.5、1.5、1.5、2.0 ml)，第3～6管密度分别为1.025～1.033；1.033～1.040；1.040～1.048；1.048～1.060 g/ml，为LDL1至LDL4，LDL1-LDL2相应量混合为A型；LDL3-LDL4为B型，4 ℃保存(含EDTA-Na2 1 mg/ml)[4]。
, 百拇医药
4.氧化易感性检测：透析去除 EDTA-Na2的LDL(0.05 g/L)中加入CuSO4溶液(终浓度10 μmol/L)，37 ℃，每5分钟于波长234nm测吸光度值。脂蛋白内多聚不饱和脂肪酸(PUFAS)被氧化形成共轭双烯(CD)，在234 nm处有最大吸收峰，ε=29 500 L*mol-1*cm-1。根据LDL氧化产生的CD量随时间变化绘制氧化曲线，分为三个阶段：(1) 延滞阶段：以延滞时间表示；(2) 增殖阶段：最大斜率表示CD最大生成率；(3) 降解阶段：观察生成的总CD值[5]。
5.血浆总CH、TG及HDL-CH酶法测定，LDL-CH用Friedewald公式计算；ApoAI、B用免疫比浊法测定。氧化LDL(Ox-LDL)测定采用ELISA检测法。Lowry法测定蛋白质含量，标准为牛血清白蛋白。
6.统计学方法：采用均数t检验、卡方检验及相关分析。
, http://www.100md.com
二、结果
1.冠心病患者血脂、氧化LDL及载脂蛋白水平(表1)：CHD组总TG显著升高；总CH、LDL-CH无变化，而Ox-LDL水平及Ox-LDL/LDL-CH比值显著升高；apoB显著升高，HDL-CH、apoAI降低。
2.冠心病患者LDL亚组分蛋白质组成分布(表2)：CHD组：总LDL，LDL2、LDL3、LDL4显著增高；LDL1占总LDL比例下降，而LDL4升高，两组间差别显著(χ2=202，P<0.001)。示CHD患者LDL分布向小而致密的LDL亚组分倾移。
表1 CHD患者血脂和载脂蛋白水平(
±s) 组别
, 百拇医药
例数
总CH
(mmol/L)
总TG
(mmol/L)
HDL-CH
(mmol/L)
LDL-CH
(mmol/L)
Ox-LDL
(μg/L)
Ox-LDL/
, 百拇医药 LDL-CH
apoAI
(g/L)
apoB
(g/L)
冠心
病组
22
5.3±1.0
1.9±
0.9**
1.27±
0.24*
, http://www.100md.com
3.1±0.9
659±
194**
222±
124**
1.31±
0.19*
1.11±0.26*
对
照
组
20
, http://www.100md.com
4.0±0.9
1.2±0.4
1.49±0.31
3.0±0.8
318±160
128±102
1.43±
0.13
0.94±0.22
注：与对照组比较，* P<0.05 ** P<0.01表2 LDL亚组分的蛋白质组成特性(±s) 组别
, http://www.100md.com
例数
总LDL
LDL1
LDL2
LDL3
LDL4
冠心病组
(mg/ml)
22
0.93±0.46
0.13±0.04
0.21±0.07**
, http://www.100md.com
0.25±0.08**
0.34±0.27**
蛋白质
(mg/ml)
1.41±0.47**
0.20±0.06
0.32±0.10**
0.38±0.12**
0.50±0.40**
蛋白质
, http://www.100md.com
(组成，%)
0.94±0.31**
15.00±4.10**
24.50±7.50
28.60±9.20
34.0 ±14.0*
对照组
(mg/ml)
20
0.60±0.35
0.13±0.09
, 百拇医药
0.13±0.08
0.16±0.07
0.18±0.11
蛋白质
(mg/ml)
1.01±0.22
0.21±0.13
0.22±0.12
0.27±0.11
0.30±0.20
蛋白质
(组成，%)
, 百拇医药
0.60±0.15
21.50±13.50
21.80±8.70
27.40±10.90
29.30±14.00
注：与相对应组间比较* P<0.05，**P<0.01；LDL亚组分的蛋白含量以原血浆基础体积计，总LDL含量为各亚组分总和表3 LDL及亚组分氧化易感性(±s) 组别
例数
延滞时间(min)
, http://www.100md.com
氧化速率
(nmol CD.mg LDL-1.min-1)
总氧化值(nmol CD/mg LDL)
B型
A型
总LDL
B型
A型
总LDL
B型
A型
, 百拇医药
总LDL
冠心病组
22
67±27*
86±42
79±33
15.3±0.8
1.4±0.9
1.5±2.8
178±88**
116±39
139±54*
, 百拇医药
对照组
20
-
-
93±37
-
-
1.0±1.3
-
-
79±76
注：B型同A型、CHD总LDL同对照组间比较，* P<0.05，**P<0.01；-未测
, 百拇医药
3.冠心病患者LDL及亚组分氧化易感性(表3)：CHD患者总LDL同对照组相比：延滞时间缩短15%，氧化速率增加48%，但差异无显著意义；总氧化值明显升高。CHD患者B型较A型延滞时间明显缩短；总氧化值亦显著升高。示B型较A型易于氧化，且氧化程度增高。
4.LDL亚组分氧化易感性同血清LDL氧化程度的关系：CHD患者B型LDL延滞时间同血清LDL氧化程度(Ox-LDL/LDL-CH)高度相关(r=-0.45，P<0.05)；同A型LDL及总LDL延滞时间不相关。
三、讨论
本组CHD患者总CH、LDL-CH并无变化，而总TG显著升高。随着年龄升高，CH和CHD相关性降低，而高TG致As作用近来倍受关注,高TG血症患者在胆固醇脂转运蛋白、脂蛋白脂酶等调节下促进富含TG的B型LDL的形成，该种LDL较A型有更强的致病作用。研究表明，以B为主的LDL是CHD的强危险因素[1]，个体含有以B为主的LDL较具一般LDL有3倍发生心肌梗塞的危险性[2]。最近对大批人群随访的前瞻性研究表明，LDL亚组分分布同CHD发生密切相关[6]。本结果亦表明，CHD组总LDL、LDL2、LDL3、LDL4显著增高；且LDL分布向小而致密的LDL亚组分倾移。
, 百拇医药
本文中CHD患者总LDL较对照组延滞时间缩短15%，氧化速率增加48%，总氧化值高度显著增加；血清Ox-LDL水平及Ox-LDL/LDL-CH比值显著升高，均表明CHD患者LDL氧化程度增加。CHD患者B型较A型易于氧化，氧化程度增高；且B型LDL延滞时间同血清LDL氧化程度高度负相关。可见高浓度富含TG的B型LDL不易于通过LDL受体介导的途径从循环中清除,在血浆中停留时间长，且氧化易感性弱, 更易于被氧化和被巨噬细胞的摄取，促进了As的发生和发展。
本课题为江苏省应用基础研究基金资助项目(97111)
参考文献
1 Miller BD, Alderman EL, Haskell WL, et al. Predominance of dense low density lipoprotein particles predicts angiographic benefit therapy in Stanford coronary risk intervention project. Circulation, 1996, 24: 2146-2153.
, 百拇医药
2 Austin MA, Breslow JL, Hennekens CH, et al. Low-density lipoprotein subclass patterns and risk of myocardial infarction. JAMA, 1988,2 60:1917-1921.
3 De-Rijke YB,Verwey HF,Vogelezang CJM, et al. Enhanced susceptibility of low-density lipoproteins to oxidation in coronary bypass patients with progression of atherosclerosis. Clin Chim Acta, 1995,243:137-149.
4 Graaf J, Hak-Lemmers H, Hectors M, et al. Enhanced susceptibility to in vitro oxidation of the density low density lipoprotein subfraction in healthy subjects. Arteriosclerosis Thrombosis, 1991,11:298-306.
, 百拇医药
5 Esterbauer H, Striegl G, Puhl H, et al. Continuous monitoring of in vitro oxidation of human low-density lipoproteins. Free Radical Res Commun, 1989,6:67-75.
6 Lamarche B, Tchernof A, Moorjani S, et al. Small, dense low-density lipoprotein particles as a predictor of the risk of ischemic heart disease in man-prospective results from the Quebec cardiovascular study. Circulation, 1997, 95:69-75.
(收稿：1998-05-07 修回：1998-08-12), 百拇医药
单位：210002 南京军区南京总医院全军医学检验中心(汪俊军、庄一义、刘小传)，心内科(李露言)
关键词：
中华医学杂志981110 根据低密度脂蛋白(LDL)颗粒的大小、密度不同，分成A型和B型两个亚组分。以B型为主的LDL是动脉粥样硬化(As)发生的强危险因素[1，2]。冠心脏病(CHD)患者LDL氧化易感性同As发生程度相关[3]；健康人群中B型LDL亚组分较A型易于氧化[4]，而CHD患者LDL亚组分间氧化易感性少见报道。我们对CHD患者LDL亚组分的分布及氧化易感性进行分析。
一、对象与方法
1.对象：CHD患者为男性心肌梗塞存活者，年龄50～65岁，22例；对照组为男性，年龄相近的体检正常人群20例。收集EDTA-Na2(1 mg/ml)抗凝空腹血浆。
, http://www.100md.com
2.试剂和仪器：总胆固醇(CH)、高密度脂蛋白(HDL)、甘油三酯(TG)、ApoAI及B试剂均为上海长征公司产品；牛血清白蛋白为BM公司，丙二醛修饰LDL单抗自制；超速离心机为美国Beckman公司产，紫外分光光度计为日本岛津产品；其他试剂均为国产分析纯。
3.LDL亚组分分离：1.5 ml血浆用KBr调密度为1.10 g/ml加入离心管底部，依次加入1.065、1.035、1.020、1.006 g/ml的KBr溶液2.0、2.5、2.5、2.0 ml，超速离心48 000r/min，20小时。由上起依次吸取1～7管不同密度成分(1.0、1.5、1.5、1.5、1.5、1.5、2.0 ml)，第3～6管密度分别为1.025～1.033；1.033～1.040；1.040～1.048；1.048～1.060 g/ml，为LDL1至LDL4，LDL1-LDL2相应量混合为A型；LDL3-LDL4为B型，4 ℃保存(含EDTA-Na2 1 mg/ml)[4]。
, 百拇医药
4.氧化易感性检测：透析去除 EDTA-Na2的LDL(0.05 g/L)中加入CuSO4溶液(终浓度10 μmol/L)，37 ℃，每5分钟于波长234nm测吸光度值。脂蛋白内多聚不饱和脂肪酸(PUFAS)被氧化形成共轭双烯(CD)，在234 nm处有最大吸收峰，ε=29 500 L*mol-1*cm-1。根据LDL氧化产生的CD量随时间变化绘制氧化曲线，分为三个阶段：(1) 延滞阶段：以延滞时间表示；(2) 增殖阶段：最大斜率表示CD最大生成率；(3) 降解阶段：观察生成的总CD值[5]。
5.血浆总CH、TG及HDL-CH酶法测定，LDL-CH用Friedewald公式计算；ApoAI、B用免疫比浊法测定。氧化LDL(Ox-LDL)测定采用ELISA检测法。Lowry法测定蛋白质含量，标准为牛血清白蛋白。
6.统计学方法：采用均数t检验、卡方检验及相关分析。
, http://www.100md.com
二、结果
1.冠心病患者血脂、氧化LDL及载脂蛋白水平(表1)：CHD组总TG显著升高；总CH、LDL-CH无变化，而Ox-LDL水平及Ox-LDL/LDL-CH比值显著升高；apoB显著升高，HDL-CH、apoAI降低。
2.冠心病患者LDL亚组分蛋白质组成分布(表2)：CHD组：总LDL，LDL2、LDL3、LDL4显著增高；LDL1占总LDL比例下降，而LDL4升高，两组间差别显著(χ2=202，P<0.001)。示CHD患者LDL分布向小而致密的LDL亚组分倾移。
表1 CHD患者血脂和载脂蛋白水平(
±s) 组别, 百拇医药
例数
总CH
(mmol/L)
总TG
(mmol/L)
HDL-CH
(mmol/L)
LDL-CH
(mmol/L)
Ox-LDL
(μg/L)
Ox-LDL/
, 百拇医药 LDL-CH
apoAI
(g/L)
apoB
(g/L)
冠心
病组
22
5.3±1.0
1.9±
0.9**
1.27±
0.24*
, http://www.100md.com
3.1±0.9
659±
194**
222±
124**
1.31±
0.19*
1.11±0.26*
对
照
组
20
, http://www.100md.com
4.0±0.9
1.2±0.4
1.49±0.31
3.0±0.8
318±160
128±102
1.43±
0.13
0.94±0.22
注：与对照组比较，* P<0.05 ** P<0.01表2 LDL亚组分的蛋白质组成特性(
±s) 组别, http://www.100md.com
例数
总LDL
LDL1
LDL2
LDL3
LDL4
冠心病组
(mg/ml)
22
0.93±0.46
0.13±0.04
0.21±0.07**
, http://www.100md.com
0.25±0.08**
0.34±0.27**
蛋白质
(mg/ml)
1.41±0.47**
0.20±0.06
0.32±0.10**
0.38±0.12**
0.50±0.40**
蛋白质
, http://www.100md.com
(组成，%)
0.94±0.31**
15.00±4.10**
24.50±7.50
28.60±9.20
34.0 ±14.0*
对照组
(mg/ml)
20
0.60±0.35
0.13±0.09
, 百拇医药
0.13±0.08
0.16±0.07
0.18±0.11
蛋白质
(mg/ml)
1.01±0.22
0.21±0.13
0.22±0.12
0.27±0.11
0.30±0.20
蛋白质
(组成，%)
, 百拇医药
0.60±0.15
21.50±13.50
21.80±8.70
27.40±10.90
29.30±14.00
注：与相对应组间比较* P<0.05，**P<0.01；LDL亚组分的蛋白含量以原血浆基础体积计，总LDL含量为各亚组分总和表3 LDL及亚组分氧化易感性(
±s) 组别例数
延滞时间(min)
, http://www.100md.com
氧化速率
(nmol CD.mg LDL-1.min-1)
总氧化值(nmol CD/mg LDL)
B型
A型
总LDL
B型
A型
总LDL
B型
A型
, 百拇医药
总LDL
冠心病组
22
67±27*
86±42
79±33
15.3±0.8
1.4±0.9
1.5±2.8
178±88**
116±39
139±54*
, 百拇医药
对照组
20
-
-
93±37
-
-
1.0±1.3
-
-
79±76
注：B型同A型、CHD总LDL同对照组间比较，* P<0.05，**P<0.01；-未测
, 百拇医药
3.冠心病患者LDL及亚组分氧化易感性(表3)：CHD患者总LDL同对照组相比：延滞时间缩短15%，氧化速率增加48%，但差异无显著意义；总氧化值明显升高。CHD患者B型较A型延滞时间明显缩短；总氧化值亦显著升高。示B型较A型易于氧化，且氧化程度增高。
4.LDL亚组分氧化易感性同血清LDL氧化程度的关系：CHD患者B型LDL延滞时间同血清LDL氧化程度(Ox-LDL/LDL-CH)高度相关(r=-0.45，P<0.05)；同A型LDL及总LDL延滞时间不相关。
三、讨论
本组CHD患者总CH、LDL-CH并无变化，而总TG显著升高。随着年龄升高，CH和CHD相关性降低，而高TG致As作用近来倍受关注,高TG血症患者在胆固醇脂转运蛋白、脂蛋白脂酶等调节下促进富含TG的B型LDL的形成，该种LDL较A型有更强的致病作用。研究表明，以B为主的LDL是CHD的强危险因素[1]，个体含有以B为主的LDL较具一般LDL有3倍发生心肌梗塞的危险性[2]。最近对大批人群随访的前瞻性研究表明，LDL亚组分分布同CHD发生密切相关[6]。本结果亦表明，CHD组总LDL、LDL2、LDL3、LDL4显著增高；且LDL分布向小而致密的LDL亚组分倾移。
, 百拇医药
本文中CHD患者总LDL较对照组延滞时间缩短15%，氧化速率增加48%，总氧化值高度显著增加；血清Ox-LDL水平及Ox-LDL/LDL-CH比值显著升高，均表明CHD患者LDL氧化程度增加。CHD患者B型较A型易于氧化，氧化程度增高；且B型LDL延滞时间同血清LDL氧化程度高度负相关。可见高浓度富含TG的B型LDL不易于通过LDL受体介导的途径从循环中清除,在血浆中停留时间长，且氧化易感性弱, 更易于被氧化和被巨噬细胞的摄取，促进了As的发生和发展。
本课题为江苏省应用基础研究基金资助项目(97111)
参考文献
1 Miller BD, Alderman EL, Haskell WL, et al. Predominance of dense low density lipoprotein particles predicts angiographic benefit therapy in Stanford coronary risk intervention project. Circulation, 1996, 24: 2146-2153.
, 百拇医药
2 Austin MA, Breslow JL, Hennekens CH, et al. Low-density lipoprotein subclass patterns and risk of myocardial infarction. JAMA, 1988,2 60:1917-1921.
3 De-Rijke YB,Verwey HF,Vogelezang CJM, et al. Enhanced susceptibility of low-density lipoproteins to oxidation in coronary bypass patients with progression of atherosclerosis. Clin Chim Acta, 1995,243:137-149.
4 Graaf J, Hak-Lemmers H, Hectors M, et al. Enhanced susceptibility to in vitro oxidation of the density low density lipoprotein subfraction in healthy subjects. Arteriosclerosis Thrombosis, 1991,11:298-306.
, 百拇医药
5 Esterbauer H, Striegl G, Puhl H, et al. Continuous monitoring of in vitro oxidation of human low-density lipoproteins. Free Radical Res Commun, 1989,6:67-75.
6 Lamarche B, Tchernof A, Moorjani S, et al. Small, dense low-density lipoprotein particles as a predictor of the risk of ischemic heart disease in man-prospective results from the Quebec cardiovascular study. Circulation, 1997, 95:69-75.
(收稿：1998-05-07 修回：1998-08-12), 百拇医药