多脏器功能障碍综合征兔模型制作中的技术问题
作者：唐文杰 吴学豪 孙海晨 钱晓明
单位：南京军区南京总医院急诊科
关键词：多脏器功能障碍综合征 动物模型 技术改进
江苏医药990113 摘要 为克服新西兰白兔(NZW)作为实验动物稳定性差的技术问题，复制符合临床特征的稳定的MODS动物模型。以“肠源性感染”及“失血性休克”作为两次打击，诱发MODS，比较在不同的实验条件下，MODS发生率的差异，摸索最佳实验条件。在最佳实验条件下，脏器功能障碍发生率91.7%，MODS发生率75%，组间比较P<0.01。结果提示：在一定感染细菌量的条件下，血压的严格控制对成功复制MODS模型最为关键，其他的重要因素为一定的支持手段，适当的手术创伤等。
多脏器功能障碍综合征(Multiple organ dysfunction syndrome MODS)兔模型制作稳定性欠佳，复制符合临床特征的MODS标准化模型较为困难。作者对一些实验条件进行摸索，获得满意效果，报告如下。
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材料与方法
一、实验动物 普通级NZW兔[由南京军区医学实验动物中心提供并饲养，合格证号：苏动(质)95045]22只，雌雄不限，体重3.1±0.6kg，实验前至少两周，恒温环境下标准化实验日粮饲养，饮水不限，实验前禁食一夜，正常饮水。
二、模型制作 按Hu[1，2]及Yao[3]方法，术前1小时氯胺酮(30mg/kg)基础麻醉后，插胃管，胃内注入大肠杆菌O111.K58(B4)2×1011/kg(菌种由上海市卫生防疫站疾病控制中心提供，菌号44536.S.1)，无菌条件下局麻，经颈动静脉插管，放血形成失血性休克，维持1小时，休克末，回输失血及至少1倍失血量的林格氏液，拔管，缝合伤口。按NIH“实验动物管理与使用指南”要求饲养并持续观察实验兔5天。
, 百拇医药
三、分组及观察方法 将实验兔随机分成两组。第一组(n1＝12)，按上述步骤，将兔MAP降至4kPa维持1小时；第二组(n2＝10)，MAP降至6kPa并维持1小时，余实验条件相同。分别于术前1天(d-1)，手术当天(d0)及术后1(d1)～5(d5)天抽血监测各脏器功能及血培养等，动物发病死亡时立即取检光镜、电镜检查各脏器，未死者5天后处死送检。
四、诊断标准 MODS的诊断按美国胸科医生大学与危重病学会(ACCP/SCCM)[4～6]及国内学者[2]制订的标准诊断，并参考病理诊断结果。
五、数据分析 组间比率的差异用卡方检验(χ2)，高度显著差异以P<0.01表示。
结 果
, 百拇医药
一、第一组12只兔子中，11只(91.7%)于手术24小时后逐渐出现各脏器功能不全，9只(75%)符合MODS诊断标准，其中7只于术后40～78小时死亡(附表)。
二、第二组10只兔子，只有4只(40%)逐渐发生脏器功能不全，其中2只(20%)发生MODS，死亡1只(附表)。
附表 两组中发生脏器功能不全器官数及MODS发生数
例
数
发生功能不全脏器数
MODS
1天
2天
, 百拇医药
3天
4天
5天
第一组
12
2
2
1
5
1
9
第二组
10
2
, http://www.100md.com
1
1
0
0
2
MODS发生率两组间比较P<0.01讨 论
根据“两次打击”及“双相预激”学说[4，7，8]，第二次打击对诱发符合临床特征的MODS病理生理过程更为重要。本实验以低血压休克作为第二次打击，其血压的控制尤为关键。将MAP控制在4kPa(30mmHg)左右维持1小时所形成的失血性休克，以及休克后的一定支持手段基本上模拟了临床过程，诱发了MODS，实验中应不断抽吸或回输少量血液， 使血压波动不超过5mmHg，以提高成功率。当MAP超过5～6kPa时，MODS发生率则明显下降，实验兔发病率低、生存率高。但当MAP低于3.3kPa(25mmHg)时，或因技术不熟练、手术时间过长、创伤过大等，实验动物则往往在24小时内还未出现MODS、甚至SIRS时，死于失血性休克或创伤，不符合临床特征。
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由于2×1011/kg细菌量大，制备细菌溶液时较为繁琐，我们在预试验时曾试图对第一次打击的“肠源性感染”实验条件进行改进，试用了2×1010/kg，1×1011/kg等剂量，未获成功，故认为2×1011/kg细菌量为合适的感染剂量。
经过对实验条件的不断摸索、改进与严格控制，我们基本模拟出了较为稳定的符合临床特征的MODS模型，为进一步研究MODS提供了可重复的及稳定的动物模型。作者将陆续报告对MODS的进一步研究结果。
邮政编码：210002
参考文献
[1] Hu S, et al. Circ Shock 1991；34：70.
[2] 胡森，等.解放军医学杂志 1996；21(1)：5.
, 百拇医药
[3] Yao YM, et al. J Trauma 1996；40(2)：270.
[4] Bone RC, et al. Chest 1992；101：1644.
[5] Beal AL, et al. JAMA 1994；271：226.
[6] Davies MG, et al. Br J Surg 1997；84：920.
[7] 盛志勇.解放军医学杂志 1996；21(1)：3.
[8] 孟宪钧.中华实验外科杂志 1997；14(6)：323.
(1998年2月16日收稿 同年5月30日修回), http://www.100md.com
单位：南京军区南京总医院急诊科
关键词：多脏器功能障碍综合征 动物模型 技术改进
江苏医药990113 摘要 为克服新西兰白兔(NZW)作为实验动物稳定性差的技术问题，复制符合临床特征的稳定的MODS动物模型。以“肠源性感染”及“失血性休克”作为两次打击，诱发MODS，比较在不同的实验条件下，MODS发生率的差异，摸索最佳实验条件。在最佳实验条件下，脏器功能障碍发生率91.7%，MODS发生率75%，组间比较P<0.01。结果提示：在一定感染细菌量的条件下，血压的严格控制对成功复制MODS模型最为关键，其他的重要因素为一定的支持手段，适当的手术创伤等。
多脏器功能障碍综合征(Multiple organ dysfunction syndrome MODS)兔模型制作稳定性欠佳，复制符合临床特征的MODS标准化模型较为困难。作者对一些实验条件进行摸索，获得满意效果，报告如下。
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材料与方法
一、实验动物 普通级NZW兔[由南京军区医学实验动物中心提供并饲养，合格证号：苏动(质)95045]22只，雌雄不限，体重3.1±0.6kg，实验前至少两周，恒温环境下标准化实验日粮饲养，饮水不限，实验前禁食一夜，正常饮水。
二、模型制作 按Hu[1，2]及Yao[3]方法，术前1小时氯胺酮(30mg/kg)基础麻醉后，插胃管，胃内注入大肠杆菌O111.K58(B4)2×1011/kg(菌种由上海市卫生防疫站疾病控制中心提供，菌号44536.S.1)，无菌条件下局麻，经颈动静脉插管，放血形成失血性休克，维持1小时，休克末，回输失血及至少1倍失血量的林格氏液，拔管，缝合伤口。按NIH“实验动物管理与使用指南”要求饲养并持续观察实验兔5天。
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三、分组及观察方法 将实验兔随机分成两组。第一组(n1＝12)，按上述步骤，将兔MAP降至4kPa维持1小时；第二组(n2＝10)，MAP降至6kPa并维持1小时，余实验条件相同。分别于术前1天(d-1)，手术当天(d0)及术后1(d1)～5(d5)天抽血监测各脏器功能及血培养等，动物发病死亡时立即取检光镜、电镜检查各脏器，未死者5天后处死送检。
四、诊断标准 MODS的诊断按美国胸科医生大学与危重病学会(ACCP/SCCM)[4～6]及国内学者[2]制订的标准诊断，并参考病理诊断结果。
五、数据分析 组间比率的差异用卡方检验(χ2)，高度显著差异以P<0.01表示。
结 果
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一、第一组12只兔子中，11只(91.7%)于手术24小时后逐渐出现各脏器功能不全，9只(75%)符合MODS诊断标准，其中7只于术后40～78小时死亡(附表)。
二、第二组10只兔子，只有4只(40%)逐渐发生脏器功能不全，其中2只(20%)发生MODS，死亡1只(附表)。
附表 两组中发生脏器功能不全器官数及MODS发生数
例
数
发生功能不全脏器数
MODS
1天
2天
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3天
4天
5天
第一组
12
2
2
1
5
1
9
第二组
10
2
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1
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MODS发生率两组间比较P<0.01讨 论
根据“两次打击”及“双相预激”学说[4，7，8]，第二次打击对诱发符合临床特征的MODS病理生理过程更为重要。本实验以低血压休克作为第二次打击，其血压的控制尤为关键。将MAP控制在4kPa(30mmHg)左右维持1小时所形成的失血性休克，以及休克后的一定支持手段基本上模拟了临床过程，诱发了MODS，实验中应不断抽吸或回输少量血液， 使血压波动不超过5mmHg，以提高成功率。当MAP超过5～6kPa时，MODS发生率则明显下降，实验兔发病率低、生存率高。但当MAP低于3.3kPa(25mmHg)时，或因技术不熟练、手术时间过长、创伤过大等，实验动物则往往在24小时内还未出现MODS、甚至SIRS时，死于失血性休克或创伤，不符合临床特征。
, http://www.100md.com
由于2×1011/kg细菌量大，制备细菌溶液时较为繁琐，我们在预试验时曾试图对第一次打击的“肠源性感染”实验条件进行改进，试用了2×1010/kg，1×1011/kg等剂量，未获成功，故认为2×1011/kg细菌量为合适的感染剂量。
经过对实验条件的不断摸索、改进与严格控制，我们基本模拟出了较为稳定的符合临床特征的MODS模型，为进一步研究MODS提供了可重复的及稳定的动物模型。作者将陆续报告对MODS的进一步研究结果。
邮政编码：210002
参考文献
[1] Hu S, et al. Circ Shock 1991；34：70.
[2] 胡森，等.解放军医学杂志 1996；21(1)：5.
, 百拇医药
[3] Yao YM, et al. J Trauma 1996；40(2)：270.
[4] Bone RC, et al. Chest 1992；101：1644.
[5] Beal AL, et al. JAMA 1994；271：226.
[6] Davies MG, et al. Br J Surg 1997；84：920.
[7] 盛志勇.解放军医学杂志 1996；21(1)：3.
[8] 孟宪钧.中华实验外科杂志 1997；14(6)：323.
(1998年2月16日收稿 同年5月30日修回), http://www.100md.com