急性下呼吸道感染时Hib OMP特异抗体测定的意义
作者：刘秀云 江载芳 杨永弘
单位：北京儿童医院(邮政编码100045)
关键词：抗体测定；b型嗜血流感杆菌；肺炎
北京医学990109 摘要 我们建立了b型流感嗜血杆菌(Hib)外膜蛋白(OMP)特异抗体测定的间接酶联免疫吸附法(ELISA)，同时联合血、尿细菌抗原检测，对70例肺炎患儿及30例健康儿童进行研究。结果有19/70(27.1%例)肺炎患儿产生Hib OMP抗体反应，除外1例交叉反应，余18例诊断为Hib感染，其中5例未查到Hib抗原，以Hib OMP特异抗体反应得到诊断。表明Hib OMP抗体测定可提高小儿Hib肺炎的病原诊断率。
Hib OMP specific antibody assays in the diagnosis
of acute lower respirtory tract infection in children
, 百拇医药
Liu Xiuyun, Jiang Zaifang, Yang Yonghong
(Beijing Children′s Hospital, Beijing 100045)
Abstract An indirect enzyme linked absorbent assays (ELISA) to measure the antibody against haemophilus influenzae type b (Hib) outer menbrane protions (OMP) was established and combined with antigen detection from blood and urine. 70 cases of pneumonia and 30 cases of healthy control were investigated. The results showed that antibody response were observed in 19 (27.1%) of the 70 children with pneumonia. Excluding one case of cross-reaction, the others 18 cases, were diagnosed as Hib infection five caese had no Hib antigen evidence. Their diagnosis were confirmed only by the antibody response. The results suggest that the assay of antibody to Hib OMP can elevate the rate of the pathological diagnosis of Hib pneumonia.
, 百拇医药
Key words The assay of specific antibody Haemophilus influenzae type b Pneumonia
细菌抗体测定用于呼吸道感染的细菌病原学研究在国外一些实验室已有建立，并且证实可协助细菌病原的流行病学调查[1，2]。近年的研究表明[3，4]，HI感染时机体可产生针对其OMP的特异性抗体，幼小婴儿也有此抗体的存在，而荚膜多糖抗体在2岁以内婴幼儿几乎不产生。因此，我们建立了Hib OMP特异性抗体测定的间接ELISA方法，以协助小婴儿下呼吸道感染的病原学诊断。
对象和方法
一、研究对象
依照制订的临床诊断标准，随机选择1994年12月～1995年5月北京儿童医院5岁以下(新生儿除外)，起病1周以内肺炎(包括6例毛细支气管炎)70例，平均年龄1岁6个月(2个月～5岁)。取血前停用抗生素超过24小时。对照组为5岁以下(新生儿除外)健康儿童30例，其中男16例，女14例，平均年龄为1岁10个月(4个月～5岁)。
, http://www.100md.com
二、研究方法
1.Hib OMP抗体测定：选用Hib国际标准菌株6880的OMP与临床分离的Hib菌株C44的OMP混合作为包被抗原，建立间接ELlSA法测定Hib OMP特异的抗体IgG、IgM。采用Sarcosy1方法提取OMP。结果判定：Hib OMP特异抗体的测定均以OD<0.3为阴性。抗体滴度的计算是以OD值为纵坐标，稀释度倒数为横坐标，寻其OD值为0.3时所对应的稀释度，即为抗体滴度。双份血清滴度增加3倍以上为抗体反应，可作为HI感染的诊断标准[2，5]。
2.Hib抗原的测定：我们同时采用对流免疫电泳(CIE)、单抗ELISA对患儿的血、尿进行Hib细菌的PRP、OMP抗原测定，以血、尿任一阳性为Hib感染的诊断标准。
结 果
一、Hib抗原检测的结果
, 百拇医药
18/70(25.6%)例肺炎病人检出HibOMP抗原，13/70(18.5%)例检出PRP抗原。其中，12例同时检出OMP、PRP抗原，1例仅PRP抗原阳性，6例仅OMP抗原阳性，因此，Hib抗原阳性的共19/70(27.1%)例。
二、Hib OMP特异性抗体的测定结果
1.30例健康对照组中各年龄的Hib OMP抗体水平：见表1。
表1 健康对照组中不同年龄的抗体水平 年龄(岁)
例数
IgG
IgM
<1
10
, 百拇医药
6.977±0.689
4.882±0.358
～2
5
7.799±0.771
5.714±0.380
～3
7
8.007±0.790
6.289±0.545
>3
8
, 百拇医药
8.121±0.717
6.165±0.888
F值
4.430*
10.389**
表中数值为抗体滴度倒数的对数(
±s)
*p<0.05，**P<0.001
2.肺炎急性期与对照组Hib OMP抗体水平的比较：如表1所示，Hib OMP抗体水平与年龄有关，而且Hib抗原阳性的肺炎患儿都在2岁以内，故将大于2岁的对照组、抗原阴性组患儿剔除后比较(表2)。两两比较，Hib抗原阳性组IgM的水平明显高于对照组(t=3.254，P<0.01)及抗原阴性组(t′=2.011，P<0.05)，而Hib抗原阴性组与对照组之间IgM水平则无显著性差异(t′=1.739，P>0.05)。
, 百拇医药
表2 肺炎急性期与对照组的OMP抗体水平 组别
例数
IgG
IgM
Hib抗原(±)
19
7.891±0.741
5.955±0.816
Hib(-)
37
7.657±0.823
5.523±0.732
, 百拇医药
健康对照
15
7.324±0.861
5.160±0.537
F值
2.069
5.220*
表中数值均为抗体滴度倒数的对数(±s)
*P<0.01
3.Hib OMP抗体检测的阳性率：①急性期血清Hib OMP IgM检测的阳性率：为了控制实验中的检测误差，以同年龄对照组的+2s为IgM抗体反应的阳性标准。在小儿肺炎中，7/7(10%)例急性期出现Hib OMP IgM的升高，其中有6例检出Hib OMP抗原(包括4例同时检出PRP抗原)。②双份血清抗体反应的阳性率：以双份血清的Hib OMP特异抗体IgG、lgM增高3倍以上为抗体反应的标准[2，5]。13/70(18.6%)例肺炎患儿有Hib OMP特异的抗体反应。
, 百拇医药
综合急性期IgM升高和双份血清的抗体3倍以上增高的结果，有19/70(27.1%)例肺炎患儿产生Hib OMP的抗体反应(1例同时急性期IgM升高和双份血清抗体反应)，除外1例为ELISA检测出非b型抗原的患儿，可能是交叉反应，18例可诊断为Hib的感染。其中13/19(68.4%)例有Hib抗原存在的证据(包括1例仅CIE PRP抗原阳性的患儿)，另5例未查到Hib抗原存在证据患儿，以抗体反应增高可诊断为Hib的感染。这样，联合抗体检测，Hib感染检出率由抗原检测的19/70例(27.1%)增至24/70例(34.2%)。在Hib OMP抗体反应的肺炎患儿中无1例为大于2岁者。
讨 论
机体病原微生物感染过程中，首先产生的是抗体IgM。急性期抗体IgM的增加已应用于许多病毒感染的诊断。Hib抗原阳性的患儿组Hib OMP IgM水平显著高于同龄健康对照组(P<0.01)及Hib抗原阴性的肺炎组(P<0.05)，充分说明在Hib感染的急性期，有其OMP特异抗体IgM水平的增高。在7例急性期测出Hib OMP IgM升高的肺炎患儿中，6例有Hib抗原存在的证据。可见，测定Hib OMP特异IgM抗体对Hib感染的诊断具有一定的参考价值。
, http://www.100md.com
应用Hib OMP抗体测定，共有19/70(27.1%)例肺炎患儿产生Hib OMP的抗体反应，除外1例测出非b型HI抗原，可能是交叉反应，18例可诊断为Hib感染。其中13/19(68.4%)例得到Hib抗原存在的证据，另5例未测出Hib OMP抗原者，以Hib OMP的抗体反应可诊断为Hib感染。说明联合应用Hib OMP抗体测定可提高细菌病原的诊断率，可作为Hib感染的流行病学调查的补充手段。
参考文献
1.Jalonen E, Paton JC, Koskela M, et al. Measurement of antibody responses to pneumolysin——a promising method for the presumptive aetiological diagnosis of pneumococal pneumonia. J Infect, 1989, 19:127.
, 百拇医药
2.Nohynek H, Eskola J, Klaemola M, et al. Bacterial antibody assays in the diagnosis of acute lower respiratory tract infection in children, Pediatr Infect DisJ,1995,14:478.
3.Claesson BA, Lagergard T, Trollfors B, et al. Serum antibody response to capsular polysaccharide, outer membrane, and lipooligosaccharide in children with invasive haemophilus influenzas type b infections. J Clin Micro, 1987, 25:2339.
4.Johnson PDR, Macinnes SJ,Gilbert GL. Antibodies to haemophilus influenzas type b outer membrane proteins in children with epiglottitis or meningitis and in haelthy controls. Infect Immun, 1993, 61:1531.
5.Kerttula Y, Leinonen M, Koskela M, et al. The aetiology of pneumonia. Application of bacterial serology and basic laboratory methods. J Infect, 1987, 14:21.
收稿：1997-08-27
修回：1998-01-24, 百拇医药
单位：北京儿童医院(邮政编码100045)
关键词：抗体测定；b型嗜血流感杆菌；肺炎
北京医学990109 摘要 我们建立了b型流感嗜血杆菌(Hib)外膜蛋白(OMP)特异抗体测定的间接酶联免疫吸附法(ELISA)，同时联合血、尿细菌抗原检测，对70例肺炎患儿及30例健康儿童进行研究。结果有19/70(27.1%例)肺炎患儿产生Hib OMP抗体反应，除外1例交叉反应，余18例诊断为Hib感染，其中5例未查到Hib抗原，以Hib OMP特异抗体反应得到诊断。表明Hib OMP抗体测定可提高小儿Hib肺炎的病原诊断率。
Hib OMP specific antibody assays in the diagnosis
of acute lower respirtory tract infection in children
, 百拇医药
Liu Xiuyun, Jiang Zaifang, Yang Yonghong
(Beijing Children′s Hospital, Beijing 100045)
Abstract An indirect enzyme linked absorbent assays (ELISA) to measure the antibody against haemophilus influenzae type b (Hib) outer menbrane protions (OMP) was established and combined with antigen detection from blood and urine. 70 cases of pneumonia and 30 cases of healthy control were investigated. The results showed that antibody response were observed in 19 (27.1%) of the 70 children with pneumonia. Excluding one case of cross-reaction, the others 18 cases, were diagnosed as Hib infection five caese had no Hib antigen evidence. Their diagnosis were confirmed only by the antibody response. The results suggest that the assay of antibody to Hib OMP can elevate the rate of the pathological diagnosis of Hib pneumonia.
, 百拇医药
Key words The assay of specific antibody Haemophilus influenzae type b Pneumonia
细菌抗体测定用于呼吸道感染的细菌病原学研究在国外一些实验室已有建立，并且证实可协助细菌病原的流行病学调查[1，2]。近年的研究表明[3，4]，HI感染时机体可产生针对其OMP的特异性抗体，幼小婴儿也有此抗体的存在，而荚膜多糖抗体在2岁以内婴幼儿几乎不产生。因此，我们建立了Hib OMP特异性抗体测定的间接ELISA方法，以协助小婴儿下呼吸道感染的病原学诊断。
对象和方法
一、研究对象
依照制订的临床诊断标准，随机选择1994年12月～1995年5月北京儿童医院5岁以下(新生儿除外)，起病1周以内肺炎(包括6例毛细支气管炎)70例，平均年龄1岁6个月(2个月～5岁)。取血前停用抗生素超过24小时。对照组为5岁以下(新生儿除外)健康儿童30例，其中男16例，女14例，平均年龄为1岁10个月(4个月～5岁)。
, http://www.100md.com
二、研究方法
1.Hib OMP抗体测定：选用Hib国际标准菌株6880的OMP与临床分离的Hib菌株C44的OMP混合作为包被抗原，建立间接ELlSA法测定Hib OMP特异的抗体IgG、IgM。采用Sarcosy1方法提取OMP。结果判定：Hib OMP特异抗体的测定均以OD<0.3为阴性。抗体滴度的计算是以OD值为纵坐标，稀释度倒数为横坐标，寻其OD值为0.3时所对应的稀释度，即为抗体滴度。双份血清滴度增加3倍以上为抗体反应，可作为HI感染的诊断标准[2，5]。
2.Hib抗原的测定：我们同时采用对流免疫电泳(CIE)、单抗ELISA对患儿的血、尿进行Hib细菌的PRP、OMP抗原测定，以血、尿任一阳性为Hib感染的诊断标准。
结 果
一、Hib抗原检测的结果
, 百拇医药
18/70(25.6%)例肺炎病人检出HibOMP抗原，13/70(18.5%)例检出PRP抗原。其中，12例同时检出OMP、PRP抗原，1例仅PRP抗原阳性，6例仅OMP抗原阳性，因此，Hib抗原阳性的共19/70(27.1%)例。
二、Hib OMP特异性抗体的测定结果
1.30例健康对照组中各年龄的Hib OMP抗体水平：见表1。
表1 健康对照组中不同年龄的抗体水平 年龄(岁)
例数
IgG
IgM
<1
10
, 百拇医药
6.977±0.689
4.882±0.358
～2
5
7.799±0.771
5.714±0.380
～3
7
8.007±0.790
6.289±0.545
>3
8
, 百拇医药
8.121±0.717
6.165±0.888
F值
4.430*
10.389**
表中数值为抗体滴度倒数的对数(
±s)*p<0.05，**P<0.001
2.肺炎急性期与对照组Hib OMP抗体水平的比较：如表1所示，Hib OMP抗体水平与年龄有关，而且Hib抗原阳性的肺炎患儿都在2岁以内，故将大于2岁的对照组、抗原阴性组患儿剔除后比较(表2)。两两比较，Hib抗原阳性组IgM的水平明显高于对照组(t=3.254，P<0.01)及抗原阴性组(t′=2.011，P<0.05)，而Hib抗原阴性组与对照组之间IgM水平则无显著性差异(t′=1.739，P>0.05)。
, 百拇医药
表2 肺炎急性期与对照组的OMP抗体水平 组别
例数
IgG
IgM
Hib抗原(±)
19
7.891±0.741
5.955±0.816
Hib(-)
37
7.657±0.823
5.523±0.732
, 百拇医药
健康对照
15
7.324±0.861
5.160±0.537
F值
2.069
5.220*
表中数值均为抗体滴度倒数的对数(
±s)*P<0.01
3.Hib OMP抗体检测的阳性率：①急性期血清Hib OMP IgM检测的阳性率：为了控制实验中的检测误差，以同年龄对照组的
+2s为IgM抗体反应的阳性标准。在小儿肺炎中，7/7(10%)例急性期出现Hib OMP IgM的升高，其中有6例检出Hib OMP抗原(包括4例同时检出PRP抗原)。②双份血清抗体反应的阳性率：以双份血清的Hib OMP特异抗体IgG、lgM增高3倍以上为抗体反应的标准[2，5]。13/70(18.6%)例肺炎患儿有Hib OMP特异的抗体反应。, 百拇医药
综合急性期IgM升高和双份血清的抗体3倍以上增高的结果，有19/70(27.1%)例肺炎患儿产生Hib OMP的抗体反应(1例同时急性期IgM升高和双份血清抗体反应)，除外1例为ELISA检测出非b型抗原的患儿，可能是交叉反应，18例可诊断为Hib的感染。其中13/19(68.4%)例有Hib抗原存在的证据(包括1例仅CIE PRP抗原阳性的患儿)，另5例未查到Hib抗原存在证据患儿，以抗体反应增高可诊断为Hib的感染。这样，联合抗体检测，Hib感染检出率由抗原检测的19/70例(27.1%)增至24/70例(34.2%)。在Hib OMP抗体反应的肺炎患儿中无1例为大于2岁者。
讨 论
机体病原微生物感染过程中，首先产生的是抗体IgM。急性期抗体IgM的增加已应用于许多病毒感染的诊断。Hib抗原阳性的患儿组Hib OMP IgM水平显著高于同龄健康对照组(P<0.01)及Hib抗原阴性的肺炎组(P<0.05)，充分说明在Hib感染的急性期，有其OMP特异抗体IgM水平的增高。在7例急性期测出Hib OMP IgM升高的肺炎患儿中，6例有Hib抗原存在的证据。可见，测定Hib OMP特异IgM抗体对Hib感染的诊断具有一定的参考价值。
, http://www.100md.com
应用Hib OMP抗体测定，共有19/70(27.1%)例肺炎患儿产生Hib OMP的抗体反应，除外1例测出非b型HI抗原，可能是交叉反应，18例可诊断为Hib感染。其中13/19(68.4%)例得到Hib抗原存在的证据，另5例未测出Hib OMP抗原者，以Hib OMP的抗体反应可诊断为Hib感染。说明联合应用Hib OMP抗体测定可提高细菌病原的诊断率，可作为Hib感染的流行病学调查的补充手段。
参考文献
1.Jalonen E, Paton JC, Koskela M, et al. Measurement of antibody responses to pneumolysin——a promising method for the presumptive aetiological diagnosis of pneumococal pneumonia. J Infect, 1989, 19:127.
, 百拇医药
2.Nohynek H, Eskola J, Klaemola M, et al. Bacterial antibody assays in the diagnosis of acute lower respiratory tract infection in children, Pediatr Infect DisJ,1995,14:478.
3.Claesson BA, Lagergard T, Trollfors B, et al. Serum antibody response to capsular polysaccharide, outer membrane, and lipooligosaccharide in children with invasive haemophilus influenzas type b infections. J Clin Micro, 1987, 25:2339.
4.Johnson PDR, Macinnes SJ,Gilbert GL. Antibodies to haemophilus influenzas type b outer membrane proteins in children with epiglottitis or meningitis and in haelthy controls. Infect Immun, 1993, 61:1531.
5.Kerttula Y, Leinonen M, Koskela M, et al. The aetiology of pneumonia. Application of bacterial serology and basic laboratory methods. J Infect, 1987, 14:21.
收稿：1997-08-27
修回：1998-01-24, 百拇医药