老龄小鼠巨噬细胞激活前后酶活性的变化1
作者：冯明功 林芃 陈群 姜俊杰 张涛 白书阁
单位：冯明功 林芃 陈群 姜俊杰(大连大学医学院，大连 116622)；张 涛 白书阁(佳木斯医学院)
关键词：巨噬细胞；酸性磷酸酶；琥珀酸脱氢酶
中国老年学杂志/990121 摘 要 目的 探讨老龄小鼠腹腔巨噬细胞(MCP)受刺激前后的功能变化。 方法 以肉汤为培养基刺激小鼠腹腔M，3 d后测定M内ACP、LDH和SDH活性。 结果 老龄小鼠受刺激后ACP、SDH活性升高，水平较青龄组低(P<0.05)。 结论 老龄组M应激能力低于青龄组。
Alteration of enzymic activity before and after
the activation of peritoneal macrophages of the aged mice
, http://www.100md.com
Feng Minggong,Lin Peng,Chen Qun et al
Medical Laboratory Department of Dalian University,Dalian 116622
Objective The changes of function of the peritoneal macrophages before and after stimulation were studied.Methods Using broth medium to stimulate peritoneal macrophages of the aged mice and acid phosphatase(ACP),succino-dehydrogenase(SDH) and Lactate dehydrogenase(LDH) activity changes within three days were tested.Results The experiment showed that ACP,SDH of the aged group increased less than those of the young group(P<0.05).Conclusions The stress responses of the macrophages of the aged mice were weaker than that of the younger macrophages.
, http://www.100md.com
Key words Macrophage Acid phosphatase Succino-dehydrogenase Lactate dehydrogenase.
巨噬细胞是体内重要的免疫活性细胞，无论是在体液免疫中还是在细胞免疫中都具有极重要的作用。Heidrick〔1〕认为，老龄小鼠M溶酶体酶(组织蛋白D、β葡萄糖苷酶、酸性磷酸酶)的活性没有明显的变化。但老龄小鼠M受异物刺激后其溶酶体酸性磷酸酶(ACP)，胞浆乳酸脱氢酶(LDH)和线粒体内膜琥珀酸脱氢酶(SDH)活性变化如何尚未见报道。本研究以肉汤培养基为刺激物注入小鼠腹腔，使M激活，3 d后测定其中的ACP、LDH、SDH活性与未经刺激组比较，探讨老龄小鼠M功能的动态变化。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 老龄小鼠购于中国医学科学院北京动物所，雌性，在本室常规饲养到16月龄，体重47.7±3.7 g。青龄小鼠购于中国医学科学院北京动物所，雌性，在本室常规饲养到6月龄，体重36.1±2.8 g。
, http://www.100md.com
1.1.2 主要试剂和仪器 RPMI1640(Gibco)；MTT、NBT(Sigma)；固红B盐、α萘酚磷酸氢钠(Fluka)；胎牛血清(天津市血液研究所)；其它试剂为国产分析纯。CO2培养箱、酶标仪、双光束分光光度计(USA)。
1.2 青龄、老龄小鼠各随机分成二组，一组腹腔注入3%的淀粉肉汤培养基2 ml，另一组腹腔注入生理盐水2 ml。3 d后灌洗小鼠腹腔，获M，台盼蓝染色计数，活细胞>95%，按文献〔2～5〕分别测定M吞噬能力，SDH、LDH、和ACP活性。
2 结 果
2.1 青龄和老龄小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能 见表1。
表1 巨噬细胞吞噬中性红能力的比较 组别
n
, 百拇医药
OD值
青龄组
6
0.252±0.047
老龄组
6
0.263±0.034
从表1可知，青龄和老龄小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬功能相近，经统计学处理差别无显著意义。
2.2 青龄和老龄小鼠腹腔巨噬细胞受刺激前后酶活性 见表2。表2 青龄和老龄小鼠巨噬细胞受刺激前后酶活性的比较 组别
SDH(OD/5×106)
, 百拇医药
ACP(U/5×106)
LDH(U/5×106
吞噬前
吞噬后
吞噬前
吞噬后
吞噬后)
青龄组
0.316±0.091(4)1)
0.448±0.105(5)2)
7.72±1.34(4)
, 百拇医药
12.30±2.32(5)2)
0.38±0.08(4)
老龄组
0.494±0.137(6)1)
0.618±0.141(6)1)
6.54±0.94(5)
8.44±0.92(4)1)2)
0.24±0.06(6)1)
注：()内为例数，与青龄组比较：1)P<0.05；与刺激前比较：2)P<0.05
, 百拇医药
3 讨 论
在正常情况下，M处于休止状态，各种酶活性极低。当细胞被激活后，M在形态、代谢和功能上均可出现显著的变化〔6〕。ACP是M内最有代表性的水解酶之一，一般以此酶活性强弱来表示细胞的消化能力。在正常情况下，青龄和老龄小鼠的M溶酶体酶的活性没有明显的差异〔1〕。王祖禄等报道〔7〕，大鼠低血流灌注所至多器官衰竭时，腹腔M吞噬指数、吞噬率、ACP和ATPase显著降低，在老龄大鼠显著。我们观察到青龄和老龄小鼠未接受异物刺激时腹腔M吞噬功能、ACP活性没有明显差异，与文献报道的结果一致。在接受异物刺激后，青龄组小鼠M的ACP活性显著高于老龄组，说明青龄组小鼠M具有极强的代偿功能。
LDH是细胞内糖无氧酶解的一个重要酶，其活性甚至可以反映细胞的功能，无氧酶解产生的能量虽然较低，但与Na+、K+离子转运有着密切的关系，LDH活性随龄而下降〔8〕。本研究发现，青龄组小鼠在受刺激后LDH活性明显高于老龄组，说明青龄组小鼠M内糖酵解作用较强。
, 百拇医药
线粒体是细胞能量代谢的主要场所，对维持细胞的正常功能有重要作用。SDH为线粒体呼吸链复合体组成成分，该酶活性的强弱可反映糖有氧氧化的速率。本研究结果显示，接受刺激前后，老龄组SDH明显高于青龄组(P<0.05)，刺激与未刺激组比较，青龄组明显升高(P<0.05)，而老龄组刺激前后无统计学变化。老龄小鼠MLDH活性减弱表示无氧酵解作用减弱，但细胞为维持其正常的生理功能，线粒体功能呈代偿性增强，以便能发动与青龄小鼠M相似的吞噬功能。结果说明，青龄组小鼠巨噬细胞具有更大的适应刺激潜能，具有更强的继发性免疫功能。
1 本课题受煤炭科学基金资助(编号95安-11208)
作者简介：冯明功，男，37岁，讲师，研究方向：老年免疫
参考文献
1 Heidrick ML.Gerontologist.J Cell Biol，1993；12：28
, 百拇医药
2 顾立刚，周 勇 严宣左 et al.薄盖灵芝对小鼠腹腔巨噬细胞的作用.上海免疫学杂志，1990；10(2)：205
3 张 强.LPO对淋巴细胞线粒体功能和细胞内GSH含量的影响.中国实验临床免疫学杂志，1994；6(1)：1
4 徐勤惠，荣康泰.单偶联剂显色法测定巨噬细胞酸性磷酶.中国免疫学杂志，1991；7(3)：161
5 陈丙莺，马建吟，尤丽芬 et al.简易自然杀伤试验——LDH释放改良法.上海免疫学杂志，1989；9(4)：218
6 林飞卿，匡彦德，秦慧莲 et al.小鼠M激活状态的测定.中华微生物学和免疫学杂志，1981；1(4)：274
7 王祖禄，崔致贤，牟善初 et al.单核吞噬细胞系统在老年大鼠多器官衰竭中的作用.老年学杂志，1993；13(1)：46
8 田清涞，李云兰.酶与衰老.老年学杂志，1993；13(6)：372
〔1997-12-12收稿 1998-11-09修回〕, http://www.100md.com
单位：冯明功 林芃 陈群 姜俊杰(大连大学医学院，大连 116622)；张 涛 白书阁(佳木斯医学院)
关键词：巨噬细胞；酸性磷酸酶；琥珀酸脱氢酶
中国老年学杂志/990121 摘 要 目的 探讨老龄小鼠腹腔巨噬细胞(MCP)受刺激前后的功能变化。 方法 以肉汤为培养基刺激小鼠腹腔M，3 d后测定M内ACP、LDH和SDH活性。 结果 老龄小鼠受刺激后ACP、SDH活性升高，水平较青龄组低(P<0.05)。 结论 老龄组M应激能力低于青龄组。
Alteration of enzymic activity before and after
the activation of peritoneal macrophages of the aged mice
, http://www.100md.com
Feng Minggong,Lin Peng,Chen Qun et al
Medical Laboratory Department of Dalian University,Dalian 116622
Objective The changes of function of the peritoneal macrophages before and after stimulation were studied.Methods Using broth medium to stimulate peritoneal macrophages of the aged mice and acid phosphatase(ACP),succino-dehydrogenase(SDH) and Lactate dehydrogenase(LDH) activity changes within three days were tested.Results The experiment showed that ACP,SDH of the aged group increased less than those of the young group(P<0.05).Conclusions The stress responses of the macrophages of the aged mice were weaker than that of the younger macrophages.
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Key words Macrophage Acid phosphatase Succino-dehydrogenase Lactate dehydrogenase.
巨噬细胞是体内重要的免疫活性细胞，无论是在体液免疫中还是在细胞免疫中都具有极重要的作用。Heidrick〔1〕认为，老龄小鼠M溶酶体酶(组织蛋白D、β葡萄糖苷酶、酸性磷酸酶)的活性没有明显的变化。但老龄小鼠M受异物刺激后其溶酶体酸性磷酸酶(ACP)，胞浆乳酸脱氢酶(LDH)和线粒体内膜琥珀酸脱氢酶(SDH)活性变化如何尚未见报道。本研究以肉汤培养基为刺激物注入小鼠腹腔，使M激活，3 d后测定其中的ACP、LDH、SDH活性与未经刺激组比较，探讨老龄小鼠M功能的动态变化。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 老龄小鼠购于中国医学科学院北京动物所，雌性，在本室常规饲养到16月龄，体重47.7±3.7 g。青龄小鼠购于中国医学科学院北京动物所，雌性，在本室常规饲养到6月龄，体重36.1±2.8 g。
, http://www.100md.com
1.1.2 主要试剂和仪器 RPMI1640(Gibco)；MTT、NBT(Sigma)；固红B盐、α萘酚磷酸氢钠(Fluka)；胎牛血清(天津市血液研究所)；其它试剂为国产分析纯。CO2培养箱、酶标仪、双光束分光光度计(USA)。
1.2 青龄、老龄小鼠各随机分成二组，一组腹腔注入3%的淀粉肉汤培养基2 ml，另一组腹腔注入生理盐水2 ml。3 d后灌洗小鼠腹腔，获M，台盼蓝染色计数，活细胞>95%，按文献〔2～5〕分别测定M吞噬能力，SDH、LDH、和ACP活性。
2 结 果
2.1 青龄和老龄小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能 见表1。
表1 巨噬细胞吞噬中性红能力的比较 组别
n
, 百拇医药
OD值
青龄组
6
0.252±0.047
老龄组
6
0.263±0.034
从表1可知，青龄和老龄小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬功能相近，经统计学处理差别无显著意义。
2.2 青龄和老龄小鼠腹腔巨噬细胞受刺激前后酶活性 见表2。表2 青龄和老龄小鼠巨噬细胞受刺激前后酶活性的比较 组别
SDH(OD/5×106)
, 百拇医药
ACP(U/5×106)
LDH(U/5×106
吞噬前
吞噬后
吞噬前
吞噬后
吞噬后)
青龄组
0.316±0.091(4)1)
0.448±0.105(5)2)
7.72±1.34(4)
, 百拇医药
12.30±2.32(5)2)
0.38±0.08(4)
老龄组
0.494±0.137(6)1)
0.618±0.141(6)1)
6.54±0.94(5)
8.44±0.92(4)1)2)
0.24±0.06(6)1)
注：()内为例数，与青龄组比较：1)P<0.05；与刺激前比较：2)P<0.05
, 百拇医药
3 讨 论
在正常情况下，M处于休止状态，各种酶活性极低。当细胞被激活后，M在形态、代谢和功能上均可出现显著的变化〔6〕。ACP是M内最有代表性的水解酶之一，一般以此酶活性强弱来表示细胞的消化能力。在正常情况下，青龄和老龄小鼠的M溶酶体酶的活性没有明显的差异〔1〕。王祖禄等报道〔7〕，大鼠低血流灌注所至多器官衰竭时，腹腔M吞噬指数、吞噬率、ACP和ATPase显著降低，在老龄大鼠显著。我们观察到青龄和老龄小鼠未接受异物刺激时腹腔M吞噬功能、ACP活性没有明显差异，与文献报道的结果一致。在接受异物刺激后，青龄组小鼠M的ACP活性显著高于老龄组，说明青龄组小鼠M具有极强的代偿功能。
LDH是细胞内糖无氧酶解的一个重要酶，其活性甚至可以反映细胞的功能，无氧酶解产生的能量虽然较低，但与Na+、K+离子转运有着密切的关系，LDH活性随龄而下降〔8〕。本研究发现，青龄组小鼠在受刺激后LDH活性明显高于老龄组，说明青龄组小鼠M内糖酵解作用较强。
, 百拇医药
线粒体是细胞能量代谢的主要场所，对维持细胞的正常功能有重要作用。SDH为线粒体呼吸链复合体组成成分，该酶活性的强弱可反映糖有氧氧化的速率。本研究结果显示，接受刺激前后，老龄组SDH明显高于青龄组(P<0.05)，刺激与未刺激组比较，青龄组明显升高(P<0.05)，而老龄组刺激前后无统计学变化。老龄小鼠MLDH活性减弱表示无氧酵解作用减弱，但细胞为维持其正常的生理功能，线粒体功能呈代偿性增强，以便能发动与青龄小鼠M相似的吞噬功能。结果说明，青龄组小鼠巨噬细胞具有更大的适应刺激潜能，具有更强的继发性免疫功能。
1 本课题受煤炭科学基金资助(编号95安-11208)
作者简介：冯明功，男，37岁，讲师，研究方向：老年免疫
参考文献
1 Heidrick ML.Gerontologist.J Cell Biol，1993；12：28
, 百拇医药
2 顾立刚，周 勇 严宣左 et al.薄盖灵芝对小鼠腹腔巨噬细胞的作用.上海免疫学杂志，1990；10(2)：205
3 张 强.LPO对淋巴细胞线粒体功能和细胞内GSH含量的影响.中国实验临床免疫学杂志，1994；6(1)：1
4 徐勤惠，荣康泰.单偶联剂显色法测定巨噬细胞酸性磷酶.中国免疫学杂志，1991；7(3)：161
5 陈丙莺，马建吟，尤丽芬 et al.简易自然杀伤试验——LDH释放改良法.上海免疫学杂志，1989；9(4)：218
6 林飞卿，匡彦德，秦慧莲 et al.小鼠M激活状态的测定.中华微生物学和免疫学杂志，1981；1(4)：274
7 王祖禄，崔致贤，牟善初 et al.单核吞噬细胞系统在老年大鼠多器官衰竭中的作用.老年学杂志，1993；13(1)：46
8 田清涞，李云兰.酶与衰老.老年学杂志，1993；13(6)：372
〔1997-12-12收稿 1998-11-09修回〕, http://www.100md.com