新的肿瘤标志物GP87在老年胃癌及胃癌前病变组织中表达的研究
作者：乔士兴 韩喜春 袁 玫 张晓萍 谭毓铨 Tobi M
单位：乔士兴 韩喜春(白求恩医科大学第二临床医院普外科，长春 130041)；袁 玫 张晓萍 解放军总医院肿瘤生物学研究室；谭毓铨 白求恩医科大学第一临床医院普外科；Tobi M Wyome State University
关键词：GP87；Adnab-9；胃癌；胃癌前病变
中国老年学杂志/990105 摘 要 目的 探讨新的肿瘤标志物GP87在老年胃癌及胃癌前病变中表达的情况，从而确定其在上述病变中的应用价值。方法 采用sABC免疫组化染色法对283例标本进行染色分析。结果 正常胃体、胃窦均为阴性，浅表性胃炎组阳性率为7.1%，明显低于癌症组及癌前病变组(P<0.01)。胃癌组阳性率为62.0%，明显低于癌前病变各组阳性率(P<0.05)，癌旁粘膜组阳性率亦较高，在80.0%左右。结论 新的肿瘤标志物GP87在胃癌及胃癌前病变中均有较高表达，特别是在胃癌前病变中的表达更高，故认为GP87是检测胃癌前病变较好的肿瘤标志物，可用于胃癌高危人群的普查，筛选出具有明确癌前病变的病人，定期随访、长期追踪，无疑有助于发现早期胃癌。
, 百拇医药
Tumor marker GP87 expression in gastric
cancer tissue and gastric precancerous lesions of
the elderly patients
Qiao Shixing,Han Xichun,Yuan Mei et al
Department of General Surgery,Second Teaching
Hospital,Norman Bethune University of Medical Sciences,Changchun 130041
283 specimen of expression of new tumor marker GP87 in the tissues of gastric cancer and gastric precancerous lesions were determined by sABC Immunohistochemical stain assay.The results showed that the espression of GP87 was negative in normal gastric body and antrum,7.1% in the chronic superficial gastritis which were significantly lower than that in gastric cancer and precancerous lesions(P<0.01).The positive rate in gastric cancer group was 62%,significant lower than that in precancerous lesions group(P<0.05).The positive rate of mucosa beside cancer was higher(80%).The results demonstrated that there was high espression of tumor marker GP87 in gastric cancer and gastric precancerous lesions,especially in precancerous lesions.So GP87 may be used for detection of high risk population of gastric cacer for earlier discovery.
, 百拇医药
Key words GP87 Adnab-9 Gastric cancer Gastric precancerous lesions
以肿瘤标志物(或肿瘤相关抗原)诊断肿瘤，是近十年来发展迅速的一个学科分支。自从单克隆抗体技术问世后，以其为“分子刀”发现了很多肿瘤相关抗原。应用免疫组化方法观察这些抗原在癌及非癌组织的表达已有大量报道〔1～3〕。但是，由于它们在胃或其他非胃的正常组织中也有不同程度的表达，以他们为标志进行胃癌的血清学诊断阳性率都不够高，特别对检出早期胃癌十分不理想。因此，本研究采用新的肿瘤标志物GP87，观察其在胃癌及癌前病变组织的表达情况，从而确定其在上述病变中的应用价值，为筛选更为有效的诊断方法打下基础。
1 材料与方法
1.1 组织标本 由解放军总医院肿瘤研究室、解放军307医院病理科、解放军总医院胃镜检测中心提供。年龄：60～80岁。实验分组：胃癌79例，萎缩性胃炎45例，肠上皮化生22例，不典型增生15例，癌旁粘膜85例，浅表性胃炎14例。正常对照组23例，以上标本采用10%福尔马林固定，石腊包埋切片。
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1.2 试剂 MCAb Adnab-9抗GP87，用人大肠腺瘤细胞免疫BALB/C小鼠，获得稳定分泌抗体IgG2a一株，命名为Adnab-9，由美国Wyome State University Tobi M医师提供。Biotin-Rabbit Anti-Mouse，购于美国旧金山Zymed实验室。HRP-Streptavidin，美国旧金山Zymed实验室提供。
1.3 实验方法 常规sABC免疫组化染色法：置石腊切片于二甲苯中脱腊20 min，逐级酒精固定20 min。置0.5%过氧化氢甲醇溶液中室温下20 min，于PBS中洗片3次，每次5 min。然后用1%小牛血清封闭15 min，然后加一抗Adnab-9(1∶1 000)，室温下2 h后于PBS中洗3次。加二抗、三抗于室温下各0.5 h，加底物DAB室温下5 min，干后甲基绿复染。
1.4 结果判定 使用日本产Olympus倒置显微镜进行观察，组织切片中阴性细胞呈淡蓝色或不着色。细胞膜及胞浆中出现深浅不一的棕褐色颗粒物质为阳性细胞。半定量判定结果：按阳性区域占组织切片的比例统计，小于5%为阴性，在5%～25%为(+)，在25%～50%为(++)，大于50%为强阳性(+++)。
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1.5 统计学处理 采用t检验作组间比较。
2 结 果
2.1 GP87在正常胃体、胃窦均为阴性，浅表性胃炎组(14例)仅1例阳性，阳性率明显低于其它各组(P<0.01)。癌前病变组中以肠上皮化生阳性率为最高(100%)，但强阳性率以不典型增生组为高(46.6%)。胃癌组阳性率反而较低(62%，P<0.05)。癌旁粘膜组阳性率亦较高，在80%左右，强阳性率最高者为癌旁粘膜伴不典型增生组(54.8%，P<0.05)，见表1。
表1 GP87在各组中表达阳性率(%) 组织类型
n
阳性例数
强阳性率
总阳性率
, 百拇医药
+
++
+++
正常胃体
15
0
0
0
0
0
正常胃窦
8
0
0
, http://www.100md.com
0
0
0
浅表性胃炎
14
1
0
0
0
7.1
萎缩性胃炎
45
11
12
, http://www.100md.com
12
26.6
77.82)
不典型增生
15
1
3
7
46.6
73.32)
肠上皮化生
22
5
, http://www.100md.com
7
10
45.4
100.02)
胃癌
79
12
20
17
34.7
62.01)
癌旁粘膜
85
, 百拇医药
11
26
32
46.3
81.12)
伴萎缩性胃炎
43
6
9
20
46.5
81.32)
伴不典型增生
, http://www.100md.com
39
5
9
17
54.8
79.42)
与癌前病变组及癌旁粘膜组比较：1)P<0.05，与浅表性胃炎及正常组比较：2)P<0.01，2.2 GP87表达与胃癌组织分型的关系，阳性率最高者为印戒细胞癌组(82.5%)，其次为低分化癌(57.1%)，最低者为高分化癌(48%)，见表2。
表2 GP87表达与胃癌组织分型的关系 组织分型
检测例数
, http://www.100md.com 阳性例数
阳性率(%)
高分化癌
27
13
48.0
低分化癌
14
8
57.11)
印戒细胞癌
40
33
, http://www.100md.com
82.52)
硬癌
1
0
0
与高分化癌组比较：1)P<0.05，与高分化及低分化癌组比较：2)P<0.01
3 讨 论
用人大肠腺瘤细胞免疫BALB/C小鼠，制备的单克隆抗体，命名为Adnab-9，应用SDS-PAGE及Western Blot法测得其对应抗原为分子量87 000的糖蛋白，故命名为GP87。GP87抗原在人体组织的分布：在成年人的大肠、小肠、胃、胰腺、肝组织均不表达；在4个月胚胎的胃、大肠表达为阴性〔4〕；在大肠腺瘤及结直肠癌中表达率均达到90%，胆道系统癌症阳性率达80%、胃癌组织中阳性率为63.6%，因此是一种新的肿瘤相关抗原，特别是对于癌前病变，是一种较好的癌前病变标志物〔5，6〕。
, 百拇医药
本研究结果证明：GP87在胃癌及癌前病变组织中均有较高表达，但以胃癌前病变组织表达最高，强阳性率也以癌前病变组及癌旁粘膜组为高，我们推测GP87可能参予胃癌早期发生的某些环节，促使癌前病变向癌转化，所以我们认为GP87是胃癌前病变中较好的标志物，但为何成癌之后含量减少，有待进一步研究。
作者简介：乔士兴，男，42岁，副教授，医学博士主要从事胃肠恶性肿瘤研究。
谭毓铨，男，69岁，教授，博士导师，主要从事门脉高压症及胃肠恶性肿瘤研究。
参考文献
1 Fukushime K，Hirota M，Terasaki PI et al.Characterization of sialosylated Lewis as a new tumorassociated antigen.Cancer Res，1984；44：5 279
, http://www.100md.com
2 金东岭，刘现军.杨书良 et al.胃癌大肠癌及癌前病变中MGdl单克隆抗体表达及其意义.肿瘤防治研究，1994；21(2)：93
3 房殿春，刘为纹.8种肿瘤相关抗原在活检胃粘膜病变组织中的表达.内镜，1994；11(5)：259
4 袁 玫，张晓平，Tobi M.胃肠道癌前病变的标记物GP87.中华肿瘤杂志，1995；17(增刊)：136
5 袁 玫.用酶标免疫组化法观察Tn与S-Tn在大肠癌及癌前病变的表达.中华病理学杂志，1989；18：211
6 袁 玫，黄 健.对三株抗癌相关抗原S-Tn单克隆抗体的比较.单克隆抗体通讯，1991；7：42
〔1997-11-21收稿 1998-01-16修回〕, 百拇医药
单位：乔士兴 韩喜春(白求恩医科大学第二临床医院普外科，长春 130041)；袁 玫 张晓萍 解放军总医院肿瘤生物学研究室；谭毓铨 白求恩医科大学第一临床医院普外科；Tobi M Wyome State University
关键词：GP87；Adnab-9；胃癌；胃癌前病变
中国老年学杂志/990105 摘 要 目的 探讨新的肿瘤标志物GP87在老年胃癌及胃癌前病变中表达的情况，从而确定其在上述病变中的应用价值。方法 采用sABC免疫组化染色法对283例标本进行染色分析。结果 正常胃体、胃窦均为阴性，浅表性胃炎组阳性率为7.1%，明显低于癌症组及癌前病变组(P<0.01)。胃癌组阳性率为62.0%，明显低于癌前病变各组阳性率(P<0.05)，癌旁粘膜组阳性率亦较高，在80.0%左右。结论 新的肿瘤标志物GP87在胃癌及胃癌前病变中均有较高表达，特别是在胃癌前病变中的表达更高，故认为GP87是检测胃癌前病变较好的肿瘤标志物，可用于胃癌高危人群的普查，筛选出具有明确癌前病变的病人，定期随访、长期追踪，无疑有助于发现早期胃癌。
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Tumor marker GP87 expression in gastric
cancer tissue and gastric precancerous lesions of
the elderly patients
Qiao Shixing,Han Xichun,Yuan Mei et al
Department of General Surgery,Second Teaching
Hospital,Norman Bethune University of Medical Sciences,Changchun 130041
283 specimen of expression of new tumor marker GP87 in the tissues of gastric cancer and gastric precancerous lesions were determined by sABC Immunohistochemical stain assay.The results showed that the espression of GP87 was negative in normal gastric body and antrum,7.1% in the chronic superficial gastritis which were significantly lower than that in gastric cancer and precancerous lesions(P<0.01).The positive rate in gastric cancer group was 62%,significant lower than that in precancerous lesions group(P<0.05).The positive rate of mucosa beside cancer was higher(80%).The results demonstrated that there was high espression of tumor marker GP87 in gastric cancer and gastric precancerous lesions,especially in precancerous lesions.So GP87 may be used for detection of high risk population of gastric cacer for earlier discovery.
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Key words GP87 Adnab-9 Gastric cancer Gastric precancerous lesions
以肿瘤标志物(或肿瘤相关抗原)诊断肿瘤，是近十年来发展迅速的一个学科分支。自从单克隆抗体技术问世后，以其为“分子刀”发现了很多肿瘤相关抗原。应用免疫组化方法观察这些抗原在癌及非癌组织的表达已有大量报道〔1～3〕。但是，由于它们在胃或其他非胃的正常组织中也有不同程度的表达，以他们为标志进行胃癌的血清学诊断阳性率都不够高，特别对检出早期胃癌十分不理想。因此，本研究采用新的肿瘤标志物GP87，观察其在胃癌及癌前病变组织的表达情况，从而确定其在上述病变中的应用价值，为筛选更为有效的诊断方法打下基础。
1 材料与方法
1.1 组织标本 由解放军总医院肿瘤研究室、解放军307医院病理科、解放军总医院胃镜检测中心提供。年龄：60～80岁。实验分组：胃癌79例，萎缩性胃炎45例，肠上皮化生22例，不典型增生15例，癌旁粘膜85例，浅表性胃炎14例。正常对照组23例，以上标本采用10%福尔马林固定，石腊包埋切片。
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1.2 试剂 MCAb Adnab-9抗GP87，用人大肠腺瘤细胞免疫BALB/C小鼠，获得稳定分泌抗体IgG2a一株，命名为Adnab-9，由美国Wyome State University Tobi M医师提供。Biotin-Rabbit Anti-Mouse，购于美国旧金山Zymed实验室。HRP-Streptavidin，美国旧金山Zymed实验室提供。
1.3 实验方法 常规sABC免疫组化染色法：置石腊切片于二甲苯中脱腊20 min，逐级酒精固定20 min。置0.5%过氧化氢甲醇溶液中室温下20 min，于PBS中洗片3次，每次5 min。然后用1%小牛血清封闭15 min，然后加一抗Adnab-9(1∶1 000)，室温下2 h后于PBS中洗3次。加二抗、三抗于室温下各0.5 h，加底物DAB室温下5 min，干后甲基绿复染。
1.4 结果判定 使用日本产Olympus倒置显微镜进行观察，组织切片中阴性细胞呈淡蓝色或不着色。细胞膜及胞浆中出现深浅不一的棕褐色颗粒物质为阳性细胞。半定量判定结果：按阳性区域占组织切片的比例统计，小于5%为阴性，在5%～25%为(+)，在25%～50%为(++)，大于50%为强阳性(+++)。
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1.5 统计学处理 采用t检验作组间比较。
2 结 果
2.1 GP87在正常胃体、胃窦均为阴性，浅表性胃炎组(14例)仅1例阳性，阳性率明显低于其它各组(P<0.01)。癌前病变组中以肠上皮化生阳性率为最高(100%)，但强阳性率以不典型增生组为高(46.6%)。胃癌组阳性率反而较低(62%，P<0.05)。癌旁粘膜组阳性率亦较高，在80%左右，强阳性率最高者为癌旁粘膜伴不典型增生组(54.8%，P<0.05)，见表1。
表1 GP87在各组中表达阳性率(%) 组织类型
n
阳性例数
强阳性率
总阳性率
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正常胃体
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正常胃窦
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浅表性胃炎
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7.1
萎缩性胃炎
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26.6
77.82)
不典型增生
15
1
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73.32)
肠上皮化生
22
5
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10
45.4
100.02)
胃癌
79
12
20
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34.7
62.01)
癌旁粘膜
85
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11
26
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81.12)
伴萎缩性胃炎
43
6
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46.5
81.32)
伴不典型增生
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与癌前病变组及癌旁粘膜组比较：1)P<0.05，与浅表性胃炎及正常组比较：2)P<0.01，2.2 GP87表达与胃癌组织分型的关系，阳性率最高者为印戒细胞癌组(82.5%)，其次为低分化癌(57.1%)，最低者为高分化癌(48%)，见表2。
表2 GP87表达与胃癌组织分型的关系 组织分型
检测例数
, http://www.100md.com 阳性例数
阳性率(%)
高分化癌
27
13
48.0
低分化癌
14
8
57.11)
印戒细胞癌
40
33
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82.52)
硬癌
1
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与高分化癌组比较：1)P<0.05，与高分化及低分化癌组比较：2)P<0.01
3 讨 论
用人大肠腺瘤细胞免疫BALB/C小鼠，制备的单克隆抗体，命名为Adnab-9，应用SDS-PAGE及Western Blot法测得其对应抗原为分子量87 000的糖蛋白，故命名为GP87。GP87抗原在人体组织的分布：在成年人的大肠、小肠、胃、胰腺、肝组织均不表达；在4个月胚胎的胃、大肠表达为阴性〔4〕；在大肠腺瘤及结直肠癌中表达率均达到90%，胆道系统癌症阳性率达80%、胃癌组织中阳性率为63.6%，因此是一种新的肿瘤相关抗原，特别是对于癌前病变，是一种较好的癌前病变标志物〔5，6〕。
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本研究结果证明：GP87在胃癌及癌前病变组织中均有较高表达，但以胃癌前病变组织表达最高，强阳性率也以癌前病变组及癌旁粘膜组为高，我们推测GP87可能参予胃癌早期发生的某些环节，促使癌前病变向癌转化，所以我们认为GP87是胃癌前病变中较好的标志物，但为何成癌之后含量减少，有待进一步研究。
作者简介：乔士兴，男，42岁，副教授，医学博士主要从事胃肠恶性肿瘤研究。
谭毓铨，男，69岁，教授，博士导师，主要从事门脉高压症及胃肠恶性肿瘤研究。
参考文献
1 Fukushime K，Hirota M，Terasaki PI et al.Characterization of sialosylated Lewis as a new tumorassociated antigen.Cancer Res，1984；44：5 279
, http://www.100md.com
2 金东岭，刘现军.杨书良 et al.胃癌大肠癌及癌前病变中MGdl单克隆抗体表达及其意义.肿瘤防治研究，1994；21(2)：93
3 房殿春，刘为纹.8种肿瘤相关抗原在活检胃粘膜病变组织中的表达.内镜，1994；11(5)：259
4 袁 玫，张晓平，Tobi M.胃肠道癌前病变的标记物GP87.中华肿瘤杂志，1995；17(增刊)：136
5 袁 玫.用酶标免疫组化法观察Tn与S-Tn在大肠癌及癌前病变的表达.中华病理学杂志，1989；18：211
6 袁 玫，黄 健.对三株抗癌相关抗原S-Tn单克隆抗体的比较.单克隆抗体通讯，1991；7：42
〔1997-11-21收稿 1998-01-16修回〕, 百拇医药