当前位置: 首页 > 期刊 > 《重庆医学》 > 1999年第1期
编号:10211776
重庆地区大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶的监测
http://www.100md.com 《重庆医学》 1999年第1期
     作者:刘丁 周舟 陈萍 张文俊 邓光贵

    单位:第三军医大学大坪医院 400016

    关键词:大肠埃希氏菌;肺炎克雷伯氏菌;超广谱β-内酰胺酶;Etest;药敏试验

    重庆医学990101

    摘要 研究重庆地区临床分离的大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌对第三代头孢菌素和氨曲南的耐药性及其产超广谱β-内酰胺酶的测定。应用纸片扩散法检测从临床标本中分离的107株大肠杆菌和78株肺炎克雷伯氏菌的耐药性;并对可疑菌株用E-test法进行超广谱β-内酰胺酶的测定。大肠埃希氏菌对5种抗生素的耐药率:氨曲南为2.8%;头孢曲松为7.5%;头孢噻肟为8.4%;头孢他啶为9.3%;头孢哌酮为15.0%。产酶株有17株,占15.89%。肺炎克雷伯氏菌对5种抗生素的耐药率:头孢噻肟为23.1%;头孢哌酮为23.1%;头孢他啶为26.9%;头孢曲松为30.8%;氨曲南为34.6%。产酶株有19株,占24.35%。大肠埃希氏菌较肺炎克雷伯氏菌耐药率低,其中对氨曲南敏感性最高,肺炎克雷伯氏菌对头孢噻肟及头孢哌酮敏感性最高,肺炎克雷伯氏菌较大肠埃希氏菌更容易产生超广谱β-内酰胺酶。
, 百拇医药
    Monitoring of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae

    Strains Producing Extrabroadspectrum β-lactamases in Chongqing Area

    Liu Ding,Zhou,Zou Chen Ping et al.

    The Daping Hospital of the Third Millitary Medical University

    Chongqing 400016

    Abstuact To stUdy the extrabroad spectrum β-lactamases(ESBLs) and resistance to aztreonam and the third generation cephalosporins of Clinical isolates of E.coli and K.pneumoniaein Chongging area,the drug resisfance of 107 strains of E.coli and 78 strains of K.pneumonioeisolated from Clinical specimens Was deteeted with disc diffusion method and ESBLs of them by E-test.The drug resistance rates of E.coli were:2.8% for aztreonam,7.5% for ceftriaxone,8.4% for cefataxime,9.3% for ceftazidime and 15.0% for cefoperazone.The drug resistance rates of K.pnemoniaeWere:34.6% for azetreonam,30.8% for ceftriaxone,23.1% for cefotaxime,26.9% for ceftazidime and 23.1% for cefoperazone.The positive β-lactamase strains of E.coli and K.pnemonia Were 19 and 19,accounting for 15.89% and 24.35% respectively.The drug resistance rate of E.coli Was lower than that of K.pnemoniao.K.pneumonia Was more likely to produce β-lactamase than E.coli.
, 百拇医药
    Key Words: E.coil K.pneumoniae extrabroad opectrum β-lactamase.E-test drug sensitive test

    细菌产生的超广谱β-内酰胺酶(extended specfrumβ-Latamase,ESBLs)由于其能水解青霉素类、头孢菌素类以及单环类抗生素,而给临床治疗带来困难,被认为是革兰氏阴性杆菌中最危险的耐药方式。ESBLs绝大多数为质粒介导型,有较强的传播性,主要存在于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中。据国内外文献报道,近年来ESBLs的检出率,呈上升趋势[1~4]。为了解重庆地区细菌产ESBLs的情况及其地域特点,我们对重庆市6家医院临床分离的107株大肠埃希菌和78株肺炎克雷伯菌进行了ESBLs检测并将结果报告如下。

    材料与方法

    1 材料
, http://www.100md.com
    (1)受试菌株:收集1998年1~3月重庆市6家医院(大坪医院、西南医院、新桥医院、儿童医院、急救中心、市八院)临床分离菌185株,经Vitek系统鉴定,其中107株为大肠埃希菌、78株为肺炎克雷伯菌。质控菌为大肠埃希菌ATCC 25922。

    (2)药敏纸片;氨曲南(aztreonam,ATM;30μg),头孢他啶(ceftazidime,CAZ;30μg),头孢噻肟(cefotaxime,CTX;30μg),头孢哌酮(cefoperazone,CFP;75μg)和头孢曲松(ceftriaxone,CRO;30μg),BBL公司产品。

    (3)Etest(ESBLs)试条:为AB BIODISK公司产品。该试条有两个连续的抗生素浓度梯度,即一端为头孢他啶(MIC:32μg/ml~0.5μg/ml),另一端为头孢他啶/棒酸(MIC:8μg/ml~0.125μg/ml)(简称TZ/TZL试条)。
, http://www.100md.com
    2 方法

    (1)纸片初筛:根据《全国临床检验操作规程》(第二版)要求制备菌液和接种平板,将5种抗生素纸片均匀地贴于平板上,35℃孵育18h~24h后,测量各抑菌圈直径,根据标准1997NCCLS凡ATM≤27mm,CAZ≤22mm,CTX≤27mm,CFP≤24mm,或CRO≤25mm者,均为可疑菌株进行ESBLs检测。

    (2)ESBLs检测:按琼脂扩散法将菌液均匀涂布于整个平皿表面,放置15~20分钟,使水吸干,用镊子将Etest条贴放在平皿中央,于35℃孵育16h~18h后读取试条两端的MIC值,若TZ/TZL≥4,判定ESBLs阳性(图1),否则为阴性。0101.gif (12957 字节)

    图1 Etest检测ESBLs阳性
, http://www.100md.com
    TZ端椭圆环缩小(MIC:6μg/ml)或消失(MIC:32μg/ml)

    TZL端椭圆环增大(MIC:0.125μg/ml)

    结果

    1 药敏结果:185株临床分离菌株对5种抗生素的药敏结果见表1。根据药敏纸片琼脂扩散法的结果,按NCCLS法规中此5种抗生素对大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌抑菌环缩小的标准,筛出71株可疑。其中大肠埃希菌35株,肺炎克雷伯菌36株。

    表1 185株临床分离菌株对5种抗生素的耐药率

    抗生素

    含量

    (μg)

    大肠埃希菌(107株)
, 百拇医药
    肺炎克雷伯菌(78株)

    S

    I

    R

    R%

    S

    I

    R

    R%

    氨曲南

    30

    92

    12

    3
, 百拇医药
    2.8

    48

    3

    27

    34.6

    头孢他啶

    30

    93

    4

    10

    9.3

    51

    6

    21
, http://www.100md.com
    26.9

    头孢噻肟

    30

    88

    10

    9

    8.4

    39

    21

    18

    23.1

    头孢哌酮

    75

, http://www.100md.com     79

    12

    16

    15.0

    45

    15

    18

    23.1

    头孢曲松

    30

    91

    8

    8

    7.5
, 百拇医药
    36

    18

    24

    30.8

    S:敏感 I:中介 R:耐药

    2 ESBLs检出结果:对初筛的细菌用Etest法检测其ESBLs,结果阳性的细菌共36株(其中比值≥16为22株,≥8为8株,≥4为6株),总检出率为19.45%。在这些细菌中,大肠埃希菌17株,占其总数的15.88%;肺炎克雷伯菌19株,占其总数的24.35%。各医院检出情况见表2。

    表2 6家医院产ESBLs检出情况

    单位

    菌株
, http://www.100md.com
    ESBL(+)

    阳性率(%)

    大坪医院

    58

    11

    18.97

    儿童医院

    47

    15

    31.91

    西南医院

    29

    4
, 百拇医药
    13.97

    急救中心

    23

    3

    13.04

    新桥医院

    17

    3

    17.65

    市八医院

    11

    0

    0.00
, 百拇医药
    合计

    185

    36

    19.45

    讨论

    ESBLs大多是质粒介导的β-内酰胺酶,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是产该酶的代表菌株,本实验通过药敏纸片琼脂扩散法发现大肠埃希菌对第三代头孢菌素及氨曲南的耐药率远低于肺炎克雷伯菌,根据NCCLS(1997年版)抑菌环缩小的标准,筛选出可疑菌71株,进而用Etest法检测其ESBLs,结果阳性的有36株,检出率达50.7%,这一结果提示,若临床上分离出对上述5种抗生素出现耐药或抑菌环直径减少现象的革兰氏阴性杆菌时,需作ESBLs检测,以便更好地指导临床合理地选用抗生素。同时,肺炎克雷伯菌检出率也高于大肠埃希菌与它们的药敏结果相似。说明对第三代头孢耐药性越高,检出ESBLs的可能性越大。
, 百拇医药
    检出结果显示:重庆地区ESBLs检出率较1994~1995年北京6家医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs发生率5%相比明显增高;与广州地区的检出结果接近。其原因主要与判断标准差别有关,北京以TZ/TZL≥8为阳性,而我们按新标准来判定(TZ/TZL≥4),其次,本实验所用菌株来源于本地区综合性大型医院,这些医院超广谱抗生素使用频率多,易造成耐药菌株的局部流行并引发院内感染。从6家医院的检出率看,儿童医院最高,这可能是儿童医院病人年少体弱,为院内感染的易感人群,极易造成耐药菌株的流行,应进一步鉴定。虽然市八院在本次实验中未检出ESBLs阳性株,但与受检菌株偏少有关,仍不能忽视对这些中小型医院临床分离菌产酶株的监控。

    参考文献:

    1 Katsanis GP, Spargo J,Ferraro MJ, et al. Detection of Klebsiella pneumoniae and Escherichia Coli Strains producing extended-spectrum β-Lactamases. Journal of clinical Microbiology 1994;32(3):691-696
, 百拇医药
    2 Dominique L.James W.Biddle MS. et al. Evidence of Interhospital transmission of extended-spectrum β-Lactam-resistamt KLebsiella pneumoniae in the United States 1986 to 1993. Infection Control and Hospital Epidemiology 1997:18(10):492-498

    3 王辉,等.革兰氏阴性杆菌对12种抗生素的耐药检测——Etest法.中华医学检验杂志,1997.20.265~267

    4 熊剑辉.Etest用于革兰氏阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶测定.临床检验杂志,1998,16(3),138~140, http://www.100md.com