人早幼粒白血病HL-60细胞蛋白激酶CK2的研究
作者：翁 云 徐美亦 梁念慈
单位：广东医学院医用生化研究所，湛江 524023
关键词：蛋白激酶；CK2；HL-60细胞；性质
广东医学院学报JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE1999年 第17卷 第1期 Vol 摘要 目的：研究人早幼粒白血病HL-60细胞蛋白激酶CK2的性质.方法：经二次DE-52离子交换纤维素柱，一次肝素-Sepharose48亲和层析柱纯化后的CK2(纯化了139倍，回收率为11.8%)，以[γ-32P]ATP和[γ-32P]GTP为磷酸供体，以去磷酸化酪蛋白为底物，对其性质进行研究.结果：Ca2+、cAMP、cGMP等第二信使对HL-60细胞的CK2活性无显著影响.肝素抑制CK2活性，而精胺激活CK2，肝素与精胺对CK2的作用在一定浓度范围内呈剂量依赖性.对CK2的动力学研究测得其米氏常数Km(GTP)为34.0 μmol/L.结论：CK2是一种不依赖于Ca2+、cAMP、cGMP等第二信使的蛋白激酶，肝素是其抑制剂，精胺是其激活剂.
, http://www.100md.com
Study on protein kinase CK2 from HL-60cells
Weng Yun，Xu Meiyi，Liang Nianci
Institute of Medical Biochemistry，Guangdong Medical College，Zhanjiang 524023
Abstract Objective：To tudy the characterization of CK2 from HL-60 cells.Methods：CK2 was purified from HL-60 cells by double chromatography of DE-52 and a heparin-sepharose 4B affinity column(the procedure resulted in a 139-fold purification of the kinase activity with a yield of 11.8%).CK2 activity was detected by using[γ-32P]ATP or[γ-32P]GTP as phosphoryl donor and dephosphated casein as substrate . Results：CK2 activity was not affected by Ca2+，cAMP and cGMP.Hepar in inhibited CK2 activity with low concentrations and spermine stimulated CK2 activity effectively.Using dephosphated casein(2g/L)as substrate，the Km of CK2 for GTP was 34.0 μmol/L.Conclusion：CK2 from HL-60 cells is a kinase independent of the second messengers such as Ca2+，cAMP and cGMP.Heparin is the inhibitor of CK2，and spermine is the activator of CK2.
, 百拇医药
Key words：protein kinase CK2；HL-60 cells；characterization
蛋白激酶CK2(又名酷蛋白激酶Ⅱ)是一类广泛存在于真核生物体内，具有多种生物功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶.CK2结构保守，由两个催化亚基(a和a’)和两个调节亚基(β)构成，全酶分子量约130 000Mr.目前已知的在体外以酷蛋白为底物的激酶中，只有CK2是既可用ATP又可用GTP为磷酸供体的蛋白激酶.某些在细胞生长，代谢，蛋白质和核酸合成，细胞转化过程中起重要作用的蛋白，某些原癌基因产物和抗癌基因产物均为CK2的磷酸化底物.CK2在胚胎细胞和肿瘤细胞中的含量比正常细胞多十几倍.有文献认为CK2基因是一种原癌基因，其过度表达可引起细胞癌变[1～3].为了研究CK2在白血病发生过程中的作用，本课题组部分分离纯化了人早幼粒白血病HL-60细胞中的CK2，并对其生物活性及功能进行了研究.
1 材料和方法
, http://www.100md.com
1.1 材料 HL-60细胞由北京军事医学科学院惠赠；PRMI-1640培养基系Gibco公司产品；P81磷酸纤维素滤纸系waltman公司产品；肝素，精胺和GTP系Sigma公司产品；酪蛋白系ICN公司产品；[γ-32P]ATP和[γ-32P]GTP系北京亚辉生物医学工程公司产品；其余试剂为国产分纯.IS6000c型液闪计数仪系Beckman公司产品；CO2孵箱系Precision公司产品.
1.2 方法
1.2.1 细胞培养HL-60细胞在含10%灭活小牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL链霉素的PRMI-1640完全培养基中，置37°C，CO2体积分数为5%，饱和湿度的孵箱内培养.在细胞数达1×106/mL之前用完全培养基重新悬浮，并以1∶3的比例传代，取对数生长期细胞进行实验.
, 百拇医药
1.2.2 HL-60细胞CK2的分离纯化 参考Litchfield、Renart等人的方法[3，6].18mL HL-60细胞的酶粗提液上到事先用Buffer G(20 mmol/L Tris-HCl，2 mol/LEDTA，1mmol/L EGTA，5 mmol/L β-巯基乙醇，0.5 mmol/L PMSF，10 mg/L Leupeptin，pH 7.4)平衡的DE-52离子交换纤维素柱(1.0×20 cm)，用100 mL Buffer G 洗涤后，进行NaCl0～0.5 mol/L(在Buffer G 中)的浓度梯度洗脱，收集洗脱液，每管8 mL，测各管CK2活性.收集有CK2活性的洗脱液，经透析过夜(换液2次)去除盐离子后，再上第二次 DE-52离子交换纤维素柱(1.0×15 cm，预先用含0.05mol/L buffer G 平衡)，用80 mL含0.05 mol/L NaCl的Buffer B 洗涤后，再用含0.05～0.5 mol/L NaCl的Buffer G 进行浓度梯度洗脱，收集洗脱液，每管5 mL，测各管CK2活性，活性峰经透析后上到肝素-Sepharose 4 B柱(0.7×7 cm，预先用含0.1 mol/L NaCl的Buffer G平衡)，用含0.1 mol/L Buffer G 洗涤后，再进行0.1～1.0 mol/L NaCl浓度梯度洗脱(在buffer G 中)，收集洗脱液，每管3 mL，测CK2活性，将具有最高活性的一管透析并用聚乙二醇浓缩后存放于4°C，用于酶性质研究.
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1.2.3 CK2活性测定[4] 部分去磷酸化的酪蛋白按Hathaway的方法制备[5]。反应混合物中含50 mmol/L Tris-HCl，pH7.2，150 mmol/L KCl，10 mmol/L MgCl2，0.2 g/L牛血清白蛋白，50μmol/L[γ-32P]ATP(50 dpm/pmol)或[γ-32P]GTP(50 dpm/pmol)，2 g/L去磷酸化酪蛋白，总体积为50μL，反应温度为30°C.反应以加入5μL纯化的CK2酶液开始，10min后取0μL反应液直接滴于一张直径为2.5cm的P81磷酸纤维滤纸上而终止反应.滤纸经10%三氯乙酸洗涤6次后，阴干，加闪烁液进行液闪计数.酶活力单位定义：每分钟催化1 pmol[γ-32P]GTP或[γ-32P]ATP上的32P转移到去磷酸化酪蛋白上所需的酶量.
, http://www.100md.com 1.2.4 Ca2+、cAMP、cGMP、肝素、精胺等对CK2活性影响5mmol/L Ca2+、10μmol/L cAMP、10μmol/L cGMP、0.5～8.0 mg/L的肝素、0.625～2.5 mmol/L精胺分别与CK2共同反应10 min(30°C)，以ATP或GTP为磷酸供体，按1.2.3的方法测定CK2活性.
1.2.5 CK2米氏常数测定 固定去磷酸化酪蛋白的量(2 g/L)，改变GTP的浓度(12.5，25，50，100 μ mol/L)测其反应速度，采用Hanse-Wolf作图法，求出CK2的Km(GTP)值.
1.2.6 统计学处理 本文数据资料采用Graphpad软件公司的prism软件进行处理.
2 结果与讨论
2.1 Ca2+、cAMP、cGMP等第二信使对CK2活性影响 反应混合物中分别加入5 mmol/L Ca2+、10μmol/L cAMP、10μmol/L cGMP与CK2在30°C反应10 min，无论以ATP还是GTP为磷酸供体进行测定，CK2活性与对照组相比差异均不明显(表1，2)，这与文献报道的CK2是一种不依赖Ca2+、cAMP、cGMP等第二信使的蛋白激酶相一致[6]，从我们实验结果还可看到，以富含碱性氨基酸的蛋白质为CK2底物时，测得的CK2活性只有以酪蛋白为底物时的3.8%(ATP)和28.8%(GTP)，即CK2不易使碱性蛋白质磷酸化，这是因为：虽然各种CK2底物被磷酸化的位点各不相同，但大部分底物的CK2结合位点通常位于蛋白的C-末端，在被磷酸化的Ser/Thr残基的氨基酸顺序下方有一富含谷氨酸/天冬氨酸等酸性氨基酸残基的结构：-X-S/T-X-E/D-，用人工合成的含有这些氨基酸残基的多肽做实验证明，这个片段对于提高CK2底物的磷酸化水平非常有用[7].
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表1 以ATP为磷酸供体，酪蛋白为底物测定Ca2+、cAMP，cGMP等第二信使对CK2活性的影响 (
±s) 反应物
CK2酶活性(U/L)
①对照组(1)
22496±1441
②Ca2+(5 mmol/L)
22308±2456
③cAMP(10 μ mol/L)
24957±988
, 百拇医药
④ cGMP(10 μ mol/L)
20718±1238
⑤组蛋白Ⅲ(2 g/L)
867±379
(1)：对照组与实验组均重复3次实验，对照组只加CK2酶液和H2O
P<0.0001； ①与②比P>0.05； ①与③比P>0.05；
①与④比P>0.05； ①与⑤比P<0.01
表2 以GTP为磷酸供体，酪蛋白为底物测定Ca2+，cAMP，cGMP等第二信使对CK2活性的影响 (±s) 反应物
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CK2酶活性(U/L)
①对照组(1)
10680±354
②Ca2+(5 mmol/L)
10512±1346
③cAMP(10 μ mol/L)
11210±1123
④ cGMP(10 μ mol/L)
10412±490
⑤组蛋白Ⅲ(2 g/L)
, 百拇医药
3074±242
(1)：对照组与实验组均重复3次实验，对照组只加CK2酶液和H2O
P<0.0001； ①与②比P>0.05； ①与③比P>0.05；
①与④比P>0.05； ①与⑤比 P<0.01；
2.2 肝素对CK2的抑制作用 不同浓度的肝素与CK2在30°C共同保温10min，无论以ATP还是GTP作为磷酸供体，CK2酶活性均受强烈抑制，这种抑制作用在一定浓度范内呈剂量依赖关系.以GTP为磷酸供体时测得的肝素对CK2活性抑制作用强于以ATP为磷酸供体时测得的值(图1).
ρ肝素/(mg*L-1)
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图1 以不同磷酸供体测定肝素对CK2活性影响的比较
-■-以GTP为磷酸供体 -●-以ATP为磷酸供体
2.3 精胺对CK2的激活作用 以酪蛋白为底物时，不同浓度的精胺(0.625～2.5mmol/L)与HL-60细胞的CK2在体外30°C共同保温10min后，无论以ATP还是GTP为酸供体，CK2酶活力与对照组相比均有不同程度的提高，以GTP为磷酸供体时测得的精胺对CK2活性激活作用强于以ATP为磷酸供体时测得的值(图2).精胺对 CK2的用较为复杂，一般情况下它可激活CK2，但是有时它却抑制CK2的活性，这与CK2磷酸化的底物有关[7].
C精胺/(mmol*L-1)
, 百拇医药
图2 以不同磷酸供体测定精胺对CK2活性影响的比较
-●-以GTP为磷酸供体 -■-以ATP为磷酸供体
2.4 CK2的米氏常数Km(GTP) CK2酶反应速度以每分钟CK2活性变化的量U来表示。以GTP浓度为横坐标，以GTP浓度与CK2酶反应速度的比值为纵坐标作图，经直线归后求出当酪蛋白浓度(2 g/L)不变时，CK2的Km(GTP)值为34.0 μ mol/L(图3)，与从兔的网状红细胞中提取的CK2 Km(GTP)值(40.0 μ mol/L)相似，比从Dictyostelium discoideum纯化的CK2 Km(GTP)(80.0 mol/L)小了一倍以上.这表明种属愈相近，CK2的性质愈接近，也证实了CK2是一种高度保守的管家蛋白[8].
CGTP/(μmol*L-1)
, 百拇医药
图3 Hanse-Wolf作图法求CK2 Km值
关于CK2的研究在国外已有报道，但国内尚未见这方面的研究报道.本课题组已证实HL-60细胞中有较高活性的CK2，并对该激酶的一些性质进行了研究.作为一新的原癌基因，其在HL-60细胞发生发展过程中的作用尚未明了，有待于进一步研究.
基金项目：广东省自然科学基金资助项目(940586)
3 参考文献
1 Allende JE，Allende CC.Protein kinase CK2：An enzyme with multiple substrates and a puzzling regulation.FASEB J，1995，9：313～23
2 Seldin DC，Philip L.Casein kinase Ⅱ a transgene induced murine lymphoma：Relation to theileriasis in cattle.Science，1995，67：894～897
, 百拇医药
3 Litchfield DW，Lozeman FT，Piening C.Subunit structure of casein kinase Ⅱ from bovine testis.J Bio Chem，1990，261：7638～7644
4 Kommercorn J，Krebs G.Induction of casein kinase Ⅱ during differentiation of 3T3-L1 cells.J Bio Chem，1987，262：3839～3843
5 Hathaway GM，Traugh JA.Casein kinase-multipotential protein kinase.Curr Top Cell Regul，1982，7：101～128
6 Renart MF，Satre L，Sebastian J.Purification aid properties of a cAMP-independent nuclear protein kinase from dictystelium discoideum.Eur J Biochem，1984，140：47～50
7 Bordin L，Cattapan F，Clari G，et al.Spermine-mediated casein kinase Ⅱ-uptake by rat liver mitochondria.Biochemica et Biophysica Acta，1994，1199：266～270
8 Hathaway GM，Traugh JA.Cycle nucleotide-independent protein kinase from rabbit reticulocytes.J Bio Chem，1979，254：762～768
收稿日期：1998-11-04, 百拇医药
单位：广东医学院医用生化研究所，湛江 524023
关键词：蛋白激酶；CK2；HL-60细胞；性质
广东医学院学报JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE1999年 第17卷 第1期 Vol 摘要 目的：研究人早幼粒白血病HL-60细胞蛋白激酶CK2的性质.方法：经二次DE-52离子交换纤维素柱，一次肝素-Sepharose48亲和层析柱纯化后的CK2(纯化了139倍，回收率为11.8%)，以[γ-32P]ATP和[γ-32P]GTP为磷酸供体，以去磷酸化酪蛋白为底物，对其性质进行研究.结果：Ca2+、cAMP、cGMP等第二信使对HL-60细胞的CK2活性无显著影响.肝素抑制CK2活性，而精胺激活CK2，肝素与精胺对CK2的作用在一定浓度范围内呈剂量依赖性.对CK2的动力学研究测得其米氏常数Km(GTP)为34.0 μmol/L.结论：CK2是一种不依赖于Ca2+、cAMP、cGMP等第二信使的蛋白激酶，肝素是其抑制剂，精胺是其激活剂.
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Study on protein kinase CK2 from HL-60cells
Weng Yun，Xu Meiyi，Liang Nianci
Institute of Medical Biochemistry，Guangdong Medical College，Zhanjiang 524023
Abstract Objective：To tudy the characterization of CK2 from HL-60 cells.Methods：CK2 was purified from HL-60 cells by double chromatography of DE-52 and a heparin-sepharose 4B affinity column(the procedure resulted in a 139-fold purification of the kinase activity with a yield of 11.8%).CK2 activity was detected by using[γ-32P]ATP or[γ-32P]GTP as phosphoryl donor and dephosphated casein as substrate . Results：CK2 activity was not affected by Ca2+，cAMP and cGMP.Hepar in inhibited CK2 activity with low concentrations and spermine stimulated CK2 activity effectively.Using dephosphated casein(2g/L)as substrate，the Km of CK2 for GTP was 34.0 μmol/L.Conclusion：CK2 from HL-60 cells is a kinase independent of the second messengers such as Ca2+，cAMP and cGMP.Heparin is the inhibitor of CK2，and spermine is the activator of CK2.
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Key words：protein kinase CK2；HL-60 cells；characterization
蛋白激酶CK2(又名酷蛋白激酶Ⅱ)是一类广泛存在于真核生物体内，具有多种生物功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶.CK2结构保守，由两个催化亚基(a和a’)和两个调节亚基(β)构成，全酶分子量约130 000Mr.目前已知的在体外以酷蛋白为底物的激酶中，只有CK2是既可用ATP又可用GTP为磷酸供体的蛋白激酶.某些在细胞生长，代谢，蛋白质和核酸合成，细胞转化过程中起重要作用的蛋白，某些原癌基因产物和抗癌基因产物均为CK2的磷酸化底物.CK2在胚胎细胞和肿瘤细胞中的含量比正常细胞多十几倍.有文献认为CK2基因是一种原癌基因，其过度表达可引起细胞癌变[1～3].为了研究CK2在白血病发生过程中的作用，本课题组部分分离纯化了人早幼粒白血病HL-60细胞中的CK2，并对其生物活性及功能进行了研究.
1 材料和方法
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1.1 材料 HL-60细胞由北京军事医学科学院惠赠；PRMI-1640培养基系Gibco公司产品；P81磷酸纤维素滤纸系waltman公司产品；肝素，精胺和GTP系Sigma公司产品；酪蛋白系ICN公司产品；[γ-32P]ATP和[γ-32P]GTP系北京亚辉生物医学工程公司产品；其余试剂为国产分纯.IS6000c型液闪计数仪系Beckman公司产品；CO2孵箱系Precision公司产品.
1.2 方法
1.2.1 细胞培养HL-60细胞在含10%灭活小牛血清，100U/mL青霉素和100U/mL链霉素的PRMI-1640完全培养基中，置37°C，CO2体积分数为5%，饱和湿度的孵箱内培养.在细胞数达1×106/mL之前用完全培养基重新悬浮，并以1∶3的比例传代，取对数生长期细胞进行实验.
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1.2.2 HL-60细胞CK2的分离纯化 参考Litchfield、Renart等人的方法[3，6].18mL HL-60细胞的酶粗提液上到事先用Buffer G(20 mmol/L Tris-HCl，2 mol/LEDTA，1mmol/L EGTA，5 mmol/L β-巯基乙醇，0.5 mmol/L PMSF，10 mg/L Leupeptin，pH 7.4)平衡的DE-52离子交换纤维素柱(1.0×20 cm)，用100 mL Buffer G 洗涤后，进行NaCl0～0.5 mol/L(在Buffer G 中)的浓度梯度洗脱，收集洗脱液，每管8 mL，测各管CK2活性.收集有CK2活性的洗脱液，经透析过夜(换液2次)去除盐离子后，再上第二次 DE-52离子交换纤维素柱(1.0×15 cm，预先用含0.05mol/L buffer G 平衡)，用80 mL含0.05 mol/L NaCl的Buffer B 洗涤后，再用含0.05～0.5 mol/L NaCl的Buffer G 进行浓度梯度洗脱，收集洗脱液，每管5 mL，测各管CK2活性，活性峰经透析后上到肝素-Sepharose 4 B柱(0.7×7 cm，预先用含0.1 mol/L NaCl的Buffer G平衡)，用含0.1 mol/L Buffer G 洗涤后，再进行0.1～1.0 mol/L NaCl浓度梯度洗脱(在buffer G 中)，收集洗脱液，每管3 mL，测CK2活性，将具有最高活性的一管透析并用聚乙二醇浓缩后存放于4°C，用于酶性质研究.
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1.2.3 CK2活性测定[4] 部分去磷酸化的酪蛋白按Hathaway的方法制备[5]。反应混合物中含50 mmol/L Tris-HCl，pH7.2，150 mmol/L KCl，10 mmol/L MgCl2，0.2 g/L牛血清白蛋白，50μmol/L[γ-32P]ATP(50 dpm/pmol)或[γ-32P]GTP(50 dpm/pmol)，2 g/L去磷酸化酪蛋白，总体积为50μL，反应温度为30°C.反应以加入5μL纯化的CK2酶液开始，10min后取0μL反应液直接滴于一张直径为2.5cm的P81磷酸纤维滤纸上而终止反应.滤纸经10%三氯乙酸洗涤6次后，阴干，加闪烁液进行液闪计数.酶活力单位定义：每分钟催化1 pmol[γ-32P]GTP或[γ-32P]ATP上的32P转移到去磷酸化酪蛋白上所需的酶量.
, http://www.100md.com 1.2.4 Ca2+、cAMP、cGMP、肝素、精胺等对CK2活性影响5mmol/L Ca2+、10μmol/L cAMP、10μmol/L cGMP、0.5～8.0 mg/L的肝素、0.625～2.5 mmol/L精胺分别与CK2共同反应10 min(30°C)，以ATP或GTP为磷酸供体，按1.2.3的方法测定CK2活性.
1.2.5 CK2米氏常数测定 固定去磷酸化酪蛋白的量(2 g/L)，改变GTP的浓度(12.5，25，50，100 μ mol/L)测其反应速度，采用Hanse-Wolf作图法，求出CK2的Km(GTP)值.
1.2.6 统计学处理 本文数据资料采用Graphpad软件公司的prism软件进行处理.
2 结果与讨论
2.1 Ca2+、cAMP、cGMP等第二信使对CK2活性影响 反应混合物中分别加入5 mmol/L Ca2+、10μmol/L cAMP、10μmol/L cGMP与CK2在30°C反应10 min，无论以ATP还是GTP为磷酸供体进行测定，CK2活性与对照组相比差异均不明显(表1，2)，这与文献报道的CK2是一种不依赖Ca2+、cAMP、cGMP等第二信使的蛋白激酶相一致[6]，从我们实验结果还可看到，以富含碱性氨基酸的蛋白质为CK2底物时，测得的CK2活性只有以酪蛋白为底物时的3.8%(ATP)和28.8%(GTP)，即CK2不易使碱性蛋白质磷酸化，这是因为：虽然各种CK2底物被磷酸化的位点各不相同，但大部分底物的CK2结合位点通常位于蛋白的C-末端，在被磷酸化的Ser/Thr残基的氨基酸顺序下方有一富含谷氨酸/天冬氨酸等酸性氨基酸残基的结构：-X-S/T-X-E/D-，用人工合成的含有这些氨基酸残基的多肽做实验证明，这个片段对于提高CK2底物的磷酸化水平非常有用[7].
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表1 以ATP为磷酸供体，酪蛋白为底物测定Ca2+、cAMP，cGMP等第二信使对CK2活性的影响 (
±s) 反应物CK2酶活性(U/L)
①对照组(1)
22496±1441
②Ca2+(5 mmol/L)
22308±2456
③cAMP(10 μ mol/L)
24957±988
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④ cGMP(10 μ mol/L)
20718±1238
⑤组蛋白Ⅲ(2 g/L)
867±379
(1)：对照组与实验组均重复3次实验，对照组只加CK2酶液和H2O
P<0.0001； ①与②比P>0.05； ①与③比P>0.05；
①与④比P>0.05； ①与⑤比P<0.01
表2 以GTP为磷酸供体，酪蛋白为底物测定Ca2+，cAMP，cGMP等第二信使对CK2活性的影响 (
±s) 反应物, http://www.100md.com
CK2酶活性(U/L)
①对照组(1)
10680±354
②Ca2+(5 mmol/L)
10512±1346
③cAMP(10 μ mol/L)
11210±1123
④ cGMP(10 μ mol/L)
10412±490
⑤组蛋白Ⅲ(2 g/L)
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3074±242
(1)：对照组与实验组均重复3次实验，对照组只加CK2酶液和H2O
P<0.0001； ①与②比P>0.05； ①与③比P>0.05；
①与④比P>0.05； ①与⑤比 P<0.01；
2.2 肝素对CK2的抑制作用 不同浓度的肝素与CK2在30°C共同保温10min，无论以ATP还是GTP作为磷酸供体，CK2酶活性均受强烈抑制，这种抑制作用在一定浓度范内呈剂量依赖关系.以GTP为磷酸供体时测得的肝素对CK2活性抑制作用强于以ATP为磷酸供体时测得的值(图1).
ρ肝素/(mg*L-1)
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图1 以不同磷酸供体测定肝素对CK2活性影响的比较
-■-以GTP为磷酸供体 -●-以ATP为磷酸供体
2.3 精胺对CK2的激活作用 以酪蛋白为底物时，不同浓度的精胺(0.625～2.5mmol/L)与HL-60细胞的CK2在体外30°C共同保温10min后，无论以ATP还是GTP为酸供体，CK2酶活力与对照组相比均有不同程度的提高，以GTP为磷酸供体时测得的精胺对CK2活性激活作用强于以ATP为磷酸供体时测得的值(图2).精胺对 CK2的用较为复杂，一般情况下它可激活CK2，但是有时它却抑制CK2的活性，这与CK2磷酸化的底物有关[7].
C精胺/(mmol*L-1)
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图2 以不同磷酸供体测定精胺对CK2活性影响的比较
-●-以GTP为磷酸供体 -■-以ATP为磷酸供体
2.4 CK2的米氏常数Km(GTP) CK2酶反应速度以每分钟CK2活性变化的量U来表示。以GTP浓度为横坐标，以GTP浓度与CK2酶反应速度的比值为纵坐标作图，经直线归后求出当酪蛋白浓度(2 g/L)不变时，CK2的Km(GTP)值为34.0 μ mol/L(图3)，与从兔的网状红细胞中提取的CK2 Km(GTP)值(40.0 μ mol/L)相似，比从Dictyostelium discoideum纯化的CK2 Km(GTP)(80.0 mol/L)小了一倍以上.这表明种属愈相近，CK2的性质愈接近，也证实了CK2是一种高度保守的管家蛋白[8].
CGTP/(μmol*L-1)
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图3 Hanse-Wolf作图法求CK2 Km值
关于CK2的研究在国外已有报道，但国内尚未见这方面的研究报道.本课题组已证实HL-60细胞中有较高活性的CK2，并对该激酶的一些性质进行了研究.作为一新的原癌基因，其在HL-60细胞发生发展过程中的作用尚未明了，有待于进一步研究.
基金项目：广东省自然科学基金资助项目(940586)
3 参考文献
1 Allende JE，Allende CC.Protein kinase CK2：An enzyme with multiple substrates and a puzzling regulation.FASEB J，1995，9：313～23
2 Seldin DC，Philip L.Casein kinase Ⅱ a transgene induced murine lymphoma：Relation to theileriasis in cattle.Science，1995，67：894～897
, 百拇医药
3 Litchfield DW，Lozeman FT，Piening C.Subunit structure of casein kinase Ⅱ from bovine testis.J Bio Chem，1990，261：7638～7644
4 Kommercorn J，Krebs G.Induction of casein kinase Ⅱ during differentiation of 3T3-L1 cells.J Bio Chem，1987，262：3839～3843
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收稿日期：1998-11-04, 百拇医药