ELISA法与DELFIA法测定新生儿TSH的结果分析
作者：郑 红 赵学勤 杜红艳 张镜宇 王 泽
单位：郑 红 赵学勤 杜红艳 张镜宇(天津医科大学内分泌研究所，300070)；王 泽(天津市儿童保健所，300074)
关键词：THS；ELISA；DELFIA；新生儿脐血；新生儿足血
中国地方病学杂志990123 【摘要】 目的 比较双位点酶免法(Two-site ELISA)和时间分辨荧光免疫法(DELFIA)测定新生儿TSH的结果。方法 采用芬兰进口试剂盒测定218例足月正常新生儿足血和脐血的成对TSH值。结果 ELISA法和DELFIA法测定的脐血TSH值有明显的相关性，其相关系数r=0.91(t=32.41,P<0.001);两种方法测定的足血TSH值也有良好的相关性，其相关系数r=0.78(t=18.40,P<0.001);ELISA法测定值在足血和脐血间的相关系数却甚低，r=0.21(t=3.17,P<0.01);DELFIA法测定值在两者间的相关系数也很低，r=0.15(t=2.24,P<0.05)。结论 ELISA和DELFIA两种方法测定的脐血和脐血之间、足血和足血之间均呈现良好的正相关，但两种方法各自测定的脐血和足血之间相关性均不明显。
, 百拇医药
分类号 Q575.14 文献标识码：A 论文编号：1000-4955(1999)01-0067-69
Comparative analysis of TSH detection in neonates by ELISA and DELFIA
ZHENG Hong,ZHAO Xueqin,DU Hongyan et al.
The Institute of Endocrinology,Tianjin Medical University
【Abstract】 Objective To make comparation of cord and heel blood thyrod stimulating hormone levels in neonates.Methods A total pairs of TSH values in both cord and heel blood samples from 218 newborns were detemined by highly sensitive immunoassay (ELISA as well as DELFIA).Results The correlation coefficient of pair-results by two methods are as follows:r=0.91(t=32.41,P<0.001);for cord bloods and r=0.78(t=18.40,P<0.001) for heel specimens,respectively.The correlation coefficient of cord and heel sample are as follows: r=0.21(t=3.17,P<0.01) for ELISA and r=0.15(t=2.24,P<0.05) for DELFIA,respectively.Conclusions It was demonstrated that the values detemined by two methods were significantly correlated,but those between cord and heel blood data were not so good.
, 百拇医药
【Key words】 ELISA DELFIA Cord blood Heel blood TSH
新生儿滤纸血斑TSH测定不仅可用于先天性“甲低”的筛查，同时其测定值也是反映一个地区群体碘营养状况的指标，这是国际控制碘缺乏病理事会(ICCIDD)推荐的方法，并已被许多国家广泛采用。目前，用滤纸血斑测定新生儿TSH的方法主要有免疫放射分析法(IRMA)、酶免疫分析法(ELISA)、时间分辨荧光免疫法(DELFIA)、荧光免疫法(IFMA)等，ELISA法因操作简便、快捷、对操作人员和环境无污染、试剂盒有效期长、仪器费用低等优点受到国际组织的优先推荐。为探讨ELISA和DELFIA两种方法之间的内在联系，现将两种方法测定的同一新生儿脐血和足血TSH的对比结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 样品的收集 用进口采血滤纸(S&S 903)，随机选取天津市市内医院出生的足月顺产新生儿(胎龄在38～42周，出生体重2600～4100g)，生后30分钟内采集脐带血，第3天采集足跟血，滴于滤纸上，共218例，自然干燥后，密封-20℃保存待测。
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1.2 TSH检测 用ELISA方法(芬兰LABSYSTEM公司试剂盒和Multiskan MS酶标仪)和DELFIA方法(芬兰WALLAC公司试剂盒和1234DELFIA荧光仪)，分别在两个实验室由专人进行测定，同一新生儿的脐血和足血在同一批实验中完成，利用试剂盒内的质控血斑进行质量控制，结果符合质控要求。ELISA法批间变异系数是6.09%，批内变异系数是5.26%；DELFIA法批间变异系数是6.52%，批内变异系数是5.62%。
1.3 统计学处理 所有资料均输入计算机，采用统计软件EPINFO6.0进行统计分析。分别计算两种方法的脐血和足血TSH测定值的中位数、均值和标准差；用配对t检验分别比较不同方法(ELISA和DELFIA)测定的同种血样(脐血或足血)之间TSH值中位数的差异,以及比较同一方法(ELISA或DELFIA)测定的不同血样(脐血和足血)之间TSH值中位数的差异;用χ2检验分别比较两种方法测定的脐血之间、足血之间、ELISA法测定的脐血和足血之间、DELFIA法测定的脐血和足血之间TSH≤5mU/L比率的差异。
, 百拇医药
2 结果
两种方法测定新生儿足血和脐血各218例，其测定结果见表1，频数分别见表2。
表1 两种方法测定新生儿脐血和足血TSH结果(mU/L) 血样
测定法
n
x±s
M
足血
ELISA
218
3.334±1.452
3.130a
, 百拇医药
DELFIA
218
1.869±1.506
1.670b
脐血
ELISA
218
4.444±2.720
3.675c
DELFIA
218
3.291±2.815
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2.515d
a与b比较、c与d比较、a与c比较、b与d比较，P<0.01
表2 两种方法测定新生儿脐血和足血TSH频数分布(%) 血样
测定法
n
0～
5～
10～
15～
足血
脐血
ELISA
, 百拇医药
DELFIA
ELISA
DELFIA
218
218
218
218
90.8a
96.8b
75.7c
84.4d
9.2
, 百拇医药
2.8
19.3
11.9
-
0.5
3.2
2.8
-
-
1.8
0.9
a与b比较、c与d比较、a与c比较、b与d比较，P<0.05。
根据统计，97.71%的足血样品TSH测定值ELISA>DELFIA,91.28%的脐血样品TSH测定值ELISA>DELFIA。从表1、表2可知，ELISA法测定的脐血和足血TSH结果均明显高于DELFIA法的相应数值，两种方法分别测定的各自结果脐血TSH值均明显高于足血TSH值。经相关分析，用两种方法测定的相同足血样品之间呈良好的正相关，其相关系数r=0.78(t=18.40,P<0.0005)，直线回归方程是：Y(DELFIA)=-0.815+0.805X(ELISA);用两种方法测定的相同脐血样品之间呈明显的正相关，其相关系数r=0.91(t=32.41,P<0.0005),直线回归方程是Y(DELFIA)=-0.895+0.942X(ELISA).ELISA法测定的同一新生儿脐血和足血间的相关系数r=0.21(t=3.17,P<0.01)，DELFIA法测定的同一新生儿脐血和足血间的相关系数r=0.15(t=2.24,P<0.05)。两种方法各自测得的同一新生儿足血和脐血之间相关性均不明显。
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3 讨论
两种方法测得的结果，新生儿出生第3天的足血TSH值均明显低于脐血(P<0.01)，与其他作者的观察结果一致[1，2]。从测定结果可知，脐血的标准差大于足血，说明脐血的离散程度较大，即新生儿出生时应激反应的个体差异较为明显。从频数分布来看，两种方法测定的TSH≤5mU/L的比率足血均明显高于脐血(P<0.05)，而且两种方法测定的脐血和足血之间均没有明显的相关性，因此是否可用脐血TSH≤5mU/L的比率来评估一个地区的碘营养状况，是一个值得商榷的问题，仍需广大同仁进行多方面的探讨。
从两种方法对同一样品测定的结果来看，ELISA法明显高于DELFIA法(P<0.01)，说明两种方法之间存在着一定的差异,但因两者均具备精密度好，准确性高等特点，因此用于新生儿的甲低筛查都是可行的。由于方法之间存在着差异,诊断甲低、亚甲低的切限值也应不相同。
WHO/ICCIDD建议在开展全民新生儿筛查的国家，使用高灵敏度的试剂盒，当TSH≤5mU/L的比率达97%(出生72小时以后采集足血)，即可作为非缺碘的标志，而无须再用其他指标[3]。天津属于适碘地区，居民尿碘水平在200μg/L以上[4]，两种方法测定足血TSH≤5mU/L的比率均未达97%，造成这种结果的原因可能是与采集足血的时间有关。本实验足血采集的时间是生后第3天，这其中可能存在一些样品其TSH值还处于由升高到降低的过程中，尚未达到稳定时期，使得测定的结果出现假阳性。
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ELISA法是以酶作为标记物的双位点固相夹心法，因其无放射性污染，试剂盒有效期长(至少半年以上)，灵敏度高，操作简便，测量仪器费用低等特点，将逐渐取代目前国内常用的IRMA法。从结果可知，DELFIA法测定的精密度、准确性均不低于ELISA法，但其测定所需的仪器费用较高，不便于基层单位推广，因此其使用受到了限制。
作者简介：郑红，女，1964年生，助理研究员
参考文献
[1] 吴艺捷，时钟孚，张家秀，等.新生儿脐血和足血TSH水平的比较[J].中华内分泌代谢杂志，1992,8(3):144
[2] 吕建国，李健群，张井泉，等.新生儿脐带血与足跟血TSH免放测定的对比研究[A].全国第四届碘缺乏病学术会议论文专辑[C].174
[3] WHO UNICEF ICCIDD.Indicators for assessing Iodine Deficiency Disorders and their control though salt Iodigation[R].WHO/NUT/94.6
[4] 包日新，阎玉芹，陈祖培，等.天津市实施全民食盐加碘后人群碘营养状况的调查研究[J].天津医药，发表中
(收稿日期：1998-05-04；修订日期：1998-07-25), http://www.100md.com
单位：郑 红 赵学勤 杜红艳 张镜宇(天津医科大学内分泌研究所，300070)；王 泽(天津市儿童保健所，300074)
关键词：THS；ELISA；DELFIA；新生儿脐血；新生儿足血
中国地方病学杂志990123 【摘要】 目的 比较双位点酶免法(Two-site ELISA)和时间分辨荧光免疫法(DELFIA)测定新生儿TSH的结果。方法 采用芬兰进口试剂盒测定218例足月正常新生儿足血和脐血的成对TSH值。结果 ELISA法和DELFIA法测定的脐血TSH值有明显的相关性，其相关系数r=0.91(t=32.41,P<0.001);两种方法测定的足血TSH值也有良好的相关性，其相关系数r=0.78(t=18.40,P<0.001);ELISA法测定值在足血和脐血间的相关系数却甚低，r=0.21(t=3.17,P<0.01);DELFIA法测定值在两者间的相关系数也很低，r=0.15(t=2.24,P<0.05)。结论 ELISA和DELFIA两种方法测定的脐血和脐血之间、足血和足血之间均呈现良好的正相关，但两种方法各自测定的脐血和足血之间相关性均不明显。
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分类号 Q575.14 文献标识码：A 论文编号：1000-4955(1999)01-0067-69
Comparative analysis of TSH detection in neonates by ELISA and DELFIA
ZHENG Hong,ZHAO Xueqin,DU Hongyan et al.
The Institute of Endocrinology,Tianjin Medical University
【Abstract】 Objective To make comparation of cord and heel blood thyrod stimulating hormone levels in neonates.Methods A total pairs of TSH values in both cord and heel blood samples from 218 newborns were detemined by highly sensitive immunoassay (ELISA as well as DELFIA).Results The correlation coefficient of pair-results by two methods are as follows:r=0.91(t=32.41,P<0.001);for cord bloods and r=0.78(t=18.40,P<0.001) for heel specimens,respectively.The correlation coefficient of cord and heel sample are as follows: r=0.21(t=3.17,P<0.01) for ELISA and r=0.15(t=2.24,P<0.05) for DELFIA,respectively.Conclusions It was demonstrated that the values detemined by two methods were significantly correlated,but those between cord and heel blood data were not so good.
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【Key words】 ELISA DELFIA Cord blood Heel blood TSH
新生儿滤纸血斑TSH测定不仅可用于先天性“甲低”的筛查，同时其测定值也是反映一个地区群体碘营养状况的指标，这是国际控制碘缺乏病理事会(ICCIDD)推荐的方法，并已被许多国家广泛采用。目前，用滤纸血斑测定新生儿TSH的方法主要有免疫放射分析法(IRMA)、酶免疫分析法(ELISA)、时间分辨荧光免疫法(DELFIA)、荧光免疫法(IFMA)等，ELISA法因操作简便、快捷、对操作人员和环境无污染、试剂盒有效期长、仪器费用低等优点受到国际组织的优先推荐。为探讨ELISA和DELFIA两种方法之间的内在联系，现将两种方法测定的同一新生儿脐血和足血TSH的对比结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 样品的收集 用进口采血滤纸(S&S 903)，随机选取天津市市内医院出生的足月顺产新生儿(胎龄在38～42周，出生体重2600～4100g)，生后30分钟内采集脐带血，第3天采集足跟血，滴于滤纸上，共218例，自然干燥后，密封-20℃保存待测。
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1.2 TSH检测 用ELISA方法(芬兰LABSYSTEM公司试剂盒和Multiskan MS酶标仪)和DELFIA方法(芬兰WALLAC公司试剂盒和1234DELFIA荧光仪)，分别在两个实验室由专人进行测定，同一新生儿的脐血和足血在同一批实验中完成，利用试剂盒内的质控血斑进行质量控制，结果符合质控要求。ELISA法批间变异系数是6.09%，批内变异系数是5.26%；DELFIA法批间变异系数是6.52%，批内变异系数是5.62%。
1.3 统计学处理 所有资料均输入计算机，采用统计软件EPINFO6.0进行统计分析。分别计算两种方法的脐血和足血TSH测定值的中位数、均值和标准差；用配对t检验分别比较不同方法(ELISA和DELFIA)测定的同种血样(脐血或足血)之间TSH值中位数的差异,以及比较同一方法(ELISA或DELFIA)测定的不同血样(脐血和足血)之间TSH值中位数的差异;用χ2检验分别比较两种方法测定的脐血之间、足血之间、ELISA法测定的脐血和足血之间、DELFIA法测定的脐血和足血之间TSH≤5mU/L比率的差异。
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2 结果
两种方法测定新生儿足血和脐血各218例，其测定结果见表1，频数分别见表2。
表1 两种方法测定新生儿脐血和足血TSH结果(mU/L) 血样
测定法
n
x±s
M
足血
ELISA
218
3.334±1.452
3.130a
, 百拇医药
DELFIA
218
1.869±1.506
1.670b
脐血
ELISA
218
4.444±2.720
3.675c
DELFIA
218
3.291±2.815
, http://www.100md.com
2.515d
a与b比较、c与d比较、a与c比较、b与d比较，P<0.01
表2 两种方法测定新生儿脐血和足血TSH频数分布(%) 血样
测定法
n
0～
5～
10～
15～
足血
脐血
ELISA
, 百拇医药
DELFIA
ELISA
DELFIA
218
218
218
218
90.8a
96.8b
75.7c
84.4d
9.2
, 百拇医药
2.8
19.3
11.9
-
0.5
3.2
2.8
-
-
1.8
0.9
a与b比较、c与d比较、a与c比较、b与d比较，P<0.05。
根据统计，97.71%的足血样品TSH测定值ELISA>DELFIA,91.28%的脐血样品TSH测定值ELISA>DELFIA。从表1、表2可知，ELISA法测定的脐血和足血TSH结果均明显高于DELFIA法的相应数值，两种方法分别测定的各自结果脐血TSH值均明显高于足血TSH值。经相关分析，用两种方法测定的相同足血样品之间呈良好的正相关，其相关系数r=0.78(t=18.40,P<0.0005)，直线回归方程是：Y(DELFIA)=-0.815+0.805X(ELISA);用两种方法测定的相同脐血样品之间呈明显的正相关，其相关系数r=0.91(t=32.41,P<0.0005),直线回归方程是Y(DELFIA)=-0.895+0.942X(ELISA).ELISA法测定的同一新生儿脐血和足血间的相关系数r=0.21(t=3.17,P<0.01)，DELFIA法测定的同一新生儿脐血和足血间的相关系数r=0.15(t=2.24,P<0.05)。两种方法各自测得的同一新生儿足血和脐血之间相关性均不明显。
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3 讨论
两种方法测得的结果，新生儿出生第3天的足血TSH值均明显低于脐血(P<0.01)，与其他作者的观察结果一致[1，2]。从测定结果可知，脐血的标准差大于足血，说明脐血的离散程度较大，即新生儿出生时应激反应的个体差异较为明显。从频数分布来看，两种方法测定的TSH≤5mU/L的比率足血均明显高于脐血(P<0.05)，而且两种方法测定的脐血和足血之间均没有明显的相关性，因此是否可用脐血TSH≤5mU/L的比率来评估一个地区的碘营养状况，是一个值得商榷的问题，仍需广大同仁进行多方面的探讨。
从两种方法对同一样品测定的结果来看，ELISA法明显高于DELFIA法(P<0.01)，说明两种方法之间存在着一定的差异,但因两者均具备精密度好，准确性高等特点，因此用于新生儿的甲低筛查都是可行的。由于方法之间存在着差异,诊断甲低、亚甲低的切限值也应不相同。
WHO/ICCIDD建议在开展全民新生儿筛查的国家，使用高灵敏度的试剂盒，当TSH≤5mU/L的比率达97%(出生72小时以后采集足血)，即可作为非缺碘的标志，而无须再用其他指标[3]。天津属于适碘地区，居民尿碘水平在200μg/L以上[4]，两种方法测定足血TSH≤5mU/L的比率均未达97%，造成这种结果的原因可能是与采集足血的时间有关。本实验足血采集的时间是生后第3天，这其中可能存在一些样品其TSH值还处于由升高到降低的过程中，尚未达到稳定时期，使得测定的结果出现假阳性。
, 百拇医药
ELISA法是以酶作为标记物的双位点固相夹心法，因其无放射性污染，试剂盒有效期长(至少半年以上)，灵敏度高，操作简便，测量仪器费用低等特点，将逐渐取代目前国内常用的IRMA法。从结果可知，DELFIA法测定的精密度、准确性均不低于ELISA法，但其测定所需的仪器费用较高，不便于基层单位推广，因此其使用受到了限制。
作者简介：郑红，女，1964年生，助理研究员
参考文献
[1] 吴艺捷，时钟孚，张家秀，等.新生儿脐血和足血TSH水平的比较[J].中华内分泌代谢杂志，1992,8(3):144
[2] 吕建国，李健群，张井泉，等.新生儿脐带血与足跟血TSH免放测定的对比研究[A].全国第四届碘缺乏病学术会议论文专辑[C].174
[3] WHO UNICEF ICCIDD.Indicators for assessing Iodine Deficiency Disorders and their control though salt Iodigation[R].WHO/NUT/94.6
[4] 包日新，阎玉芹，陈祖培，等.天津市实施全民食盐加碘后人群碘营养状况的调查研究[J].天津医药，发表中
(收稿日期：1998-05-04；修订日期：1998-07-25), http://www.100md.com