nm 23-H１基因在舌癌中的表达及临床意义
作者：刘卫平 周 磊 李岩松 曹 军 黄 冰
单位：(刘卫平 周磊)广东医学院附属医院口腔科；(李岩松 曹军 黄冰)广东医学院附属医院病理科，湛江 524001
关键词：nm23-H1基因；舌癌；淋巴结转移；预后
广东医学院学报JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE1999年 第17卷 第1期 Vol 摘要 目的：探讨nm23-H1基因表达与舌癌淋巴结转移和预后的关系.方法：应用免疫组化SP法，观察46例病理确诊的舌癌石蜡标本中nm23-H1基因产物的表达.结果：46例中20例(43.48%)呈nm23-H1阳性表达，阳性产物主要位于细胞浆内.nm23-H1基因表达与患者性别、年龄及肿瘤病理分级、临床分期均无关(P>0.05)，但与颈淋巴结转移及术后生存期显著相关，在不伴淋巴结转移及术后生存3 a以上组中nm23-H1阳性率(55.17%，57.69%)明显高于伴有淋巴结转移及生存小于3 a组(23.53%，16.67%)(P<0.05).结论：nm23-H1基因在抑制舌癌淋巴结转移过程中起重要作用，其表达水平可能是预测舌癌淋巴结转移趋势和预后及指导临床治疗有意义的一项生物学指标。
, 百拇医药
Expression of nm23-H1 gene in tongue cancer and its clinical significance
Liu Weiping，Zhou Lei，Li Yansong，et al
Department of Stomatology，Affiliated Hospital of Guangdong Medical College，Zhanjiang 524001
Abstract Objective：To determine the relationship between expression of nm23-H1 gene and lymph node metastasis，prognosis in tongue cancer.Methods：Using SP immunohistochemical method，the expression of nm23-H1 gene products were examined in paraffin-embedded specimens from 46 cases of tongue cancer confirmed by pathology. Results：20 cases were found with nm23-H1 positive expression(43.48%).These immunoreactions were most common in cytoplasm of tumor cells.There were significant relations between nm23-H1 gene expression with cervical lymph node metastasis and postoperative survival period of patients，but not with sex，age of patients，pathological grade and clinical stage of the tutmor.The positive ates of nm23-H1 gene were significantly higher in patients without lymph node metastasis who lived postoperatively for more than 3 years than those in group with lymph node metastasis who died within 3 years(55.17%，57.69% vs 23.53%，16.67% respectively，P<0.05).Conclusions：nm23-H1 gene plays an important role in the inhibition of lymph node metastasis of tongue cancer.The expression levels of nm23-H1 gene may be a valuable biological indicator for predicting lymph node metastasis and prognosis of thetumoranddirectingclinicaltreatment.
, 百拇医药
Key words：nm23-H1 gene；tongue cancer；lymph node metastasis；prognosis
在动物转移模型及人类某些恶性肿瘤如乳腺癌、肝癌、肺癌、肾癌、胃癌及结肠癌等均证实nm23-H1基因表达与肿瘤转移或预后密切相关[1～6].但其是否与舌癌的颈淋巴结转移和预后有关，国内外尚未见报道。舌癌的发病居口腔癌之首，且具有淋巴转移早，预后不良的特点 .为此，作者应用免疫组化SP法对nm23-H1基因产物在舌癌中的表达进行研究，探讨nm23-H1基因表达与舌癌淋巴结转移和预后的关系，并评价其临床应用价值.
1 材料和方法
1.1 材料 标本来自广东医学院附属医院口腔科1988年2月～1995年4月舌癌术后存档石蜡标本，剔除术前行放疗或化疗者，共计46例.其中男性32例，女性14例，年龄24～71岁，平均48 .6岁.肿瘤部位：舌缘22例，舌尖11例，舌腹10例，舌根3例.所有标本均再次复查、确诊，46例均为鳞状细胞癌，按 WHO 1971年标准病理分级：1、2、3级分别为18、12、16例，临床分期采用UICC1987年公布的标准：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为12、13、12、9例.手术采取舌颌颈联合根治，术后经病理确诊有颈部淋巴结转移17例，占36.96%，术后失访8例，随访38例中，生存3 a以上26例，占68.42%，术后1～3 a内死亡12例，占31.58%.
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1.2 方法 标本按4μm厚连续切片，分别行HE染色及nm23-H1免疫组化染色，免疫组化试剂盒购自美国Maxim公司，操作按说明书进行，以PBS代替一抗作阴性对照.
1.3 结果测定 阳性信号为棕黄色颗粒，主要定位于癌细胞胞浆中，随机选取5个高倍视野(×400)计数阳性细胞比例，阳性细胞<30%，定为阴性(低表达)，≥30%为阳性表达.
1.4 统计分析 采用χ2检验
2 结果
46例中20例呈阳性表达，阳性率43.48%.阳性产物主要位于胞浆中，部分胞核、胞膜上亦有表达(图1).
图1 nm23-H1基因在舌癌中的表达，阳性产物主要
, 百拇医药
位于细胞浆内(×400)
nm23-H1表达结果与舌癌临床病理特征及预后的关系见表1 .
表1 nm23-H1表达与舌癌临床病理特征及预后的关系 项目
例数
nm23-H1
阳性率/%
P值
-
+
性别
男
, 百拇医药
32
17
15
46.88
>0.05
女
14
9
5
35.71
年龄(岁)
<48.6
21
, http://www.100md.com
12
9
42.86
>0.05
>48.6
25
14
11
44.00
病理分级
1
18
9
, http://www.100md.com
9
50.00
>0.05
2
12
7
5
41.67
3
16
10
6
37.50
, http://www.100md.com 临床分期
12
7
5
41.67
>0.05
13
8
5
38.46
12
6
6
50.00
, http://www.100md.com
9
5
4
44.44
颈部淋巴转移
(+)
17
13
4
23.53
<0.05
(-)
29
, 百拇医药
13
16
55.17
预后
<3a
12
10
2
16.67
<0.05
>3a
26
11
, 百拇医药 15
57.69
从表中可见，nm23-H1表达与患者性别、年龄及临床分期均无明显关系，随舌癌病理分级的高，nm23-H1阳性率呈逐渐减低的趋势，但差别无统计学意义(P>0.05).在不伴和伴有颈部淋巴结转移的舌癌组织中，nm23-H1阳性率分别为55.17%和23.53%，两者相比有显著差异(P<0.05).术后生存大于3 a组中nm23-H1阳性率(57.69%)较小于3 a组(16.67%)明显为高(P<0.05) .
3 讨论
nm23基因是steeg等[1]于1988年从鼠的不同转移潜能的恶性黑色素瘤细胞系K1735中克隆和鉴定出来，其mRNA水平在低转移的瘤细胞较高转移者高出10倍，将nm23基因导入高转移鼠黑色素瘤细胞，其转移表型明显降低.在人类乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌及结肠癌中均存在nm23等位基因缺失现象，这些等位基因的缺失与肿瘤转移密切相关[2].因此，nm23基因目前被认为是最具代表性的肿瘤转移抑制基因.
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人类的nm23基因位于17号染色体q22区，现已鉴定出二种亚型：nm23-H1，nm23-H2，它们受两个独立的调控系统所调节，其中nm23-H1与肿瘤转移更为密切[3].Bevilacgua等[4]采用Northern杂交技术对乳腺浸润性导管癌的研究发现nm23-H1mRNA水平与有无腋窝淋巴结转移明显相关，无腋窝淋巴结转移者其表达水平明显高于有转移者.Hennessy等[5]的研究也得出相同的结果，并发现nm23-H1表达水平与乳腺癌患者生存时间呈显著正相关.Yamaguchi等[6]用抗nm23-H1单克隆抗体对肝细胞癌石蜡切片进行分析研究，也发现nm23-H1表达水平与肝内转移呈负相关，nm23-H1表达低下者生存期短.作者应用nm23-H1单克隆抗体对46例舌癌组织进行免疫组化染色，结果显示：nm23-H1表达与颈部淋巴结转移和预后有显著相关性，在不伴和伴有颈淋巴结转移的舌癌组织中，nm23-H1阳性率分别为55.17%和23.53%，两者相比差异有显著性(P<0.05)，随访生存3 a以上及以下二组资料显示，nm23-H1阳性率高的预后明显为好(P<0.05).表明nm23-H1基因在抑制舌癌颈淋巴结转移过程中起重要作用，其表达水平可作为预测舌癌颈淋巴结转移及预后的一项重要指标.
, 百拇医药
nm23-H1基因抑制舌癌淋巴结转移的确切机制尚不清楚，已知其蛋白产物与二磷酸核苷激酶(NDPK)的 α 链氨基酸序列高度相似，NDPK是一种普遍存在的酶，相对分子质量(Mr)17000～18000，主要存在于胞浆和质膜上 .现已证实NDPK至少参与两个在肿瘤和发育上起重要作用的功能：微管聚合与解聚[7]，G蛋白介导的信号传播[8].NDPK改变，一方面可引起由微管聚合而成的纺锤体的异常，导致非整倍体形成，进而促进肿瘤的发展；另一方面可通过影响细胞骨架及对细胞素等信号反应性的改变引起细胞运动而参予浸润转移过程.
一直以来，对无明显颈淋巴结转移临床指征的舌癌患者主要根据病理分级和临床分期来预测其转移的可能性，并作为指导临床治疗的主要指标。但近期越来越多的研究表明，舌癌病理分级及临床分期在反应其生物学行为如侵袭性、淋巴结受累等均有一定局限，并不能准确地判定舌癌早期是否存在淋巴结转移，二者指导临床意义不大[9，10].本实验结果显示：nm23-H1表达与舌癌病理分级及临床分期均无明显相关性(P>0..05)，与多数肿瘤的研究结果一致[1～4，6] .表明nm23-H1基因对舌癌组织分化及演进过程不起调控作用，提示舌癌颈淋巴结转移并不取决于其病理分级和临床分期.
, 百拇医药
肿瘤转移是一个多步复杂的过程，涉及多癌基因的共同作用，是宿主和肿瘤共同作用的结果 .尽管nm23-H1表达水平不是判定舌癌颈淋巴结转移和预后的唯一标准，但nm23-H1低表达可能预示该患者的肿瘤细胞有较高的转移潜能，较易发生颈淋巴结转移且预后不良。通过对术前活检标本的免疫组化染色，对nm23-H1低表达的舌癌患者采取更加彻底的治疗和密切的随访是必要的.nm23-H1表达水平可作为指导临床治疗的一项有价值的指标.
4 参考文献
1 Steeg PS，Bevilacqua G，Kopper L，et al.Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatic potential.J Natl Cancer Inst，1988，80：200
, 百拇医药
2 Leone A，Mcbride OW，Weston A，et al.Somatic allelic deletion of nm23 in humam cancer.Cancer Res，1991，51：2490
3 Rosengard AM，Krutasch HC，Shearn A，et al.Reduced nm23/NDPK protein in tumor metastasis and abrrant drosophila development.Nature，1989，342：177
4 Bevilacqua G，Sobel ME，Liotta LA，et al.Association of low nm23 mRNA levels in human primary infiltrating ductal breast carcinomas with lymph node involvement and other histopathological indicators of high metastatic potential.Cancer Res，1989，49：5185
, 百拇医药
5 Hennessy C，Henry JA，May FEB，et al.Expression of the antimetastatic gene nm23 in human breast cancer：An association with good prognosis.J Natl Cancer Inst，1991，83：281
6 Yamaguchi A，Urano T，Goi T，et al.Expression of human nm23-H1 and nm23-H2 protein in hepatocellular carcinoma.Cancer，1994，73：2280
7 Nickerson J，Wells W.The microtubule associated nucleoside diphosphate kinase.J Biol Chem，1984，259：11297
, http://www.100md.com
8 Kimura N，Tohnson G.Increased membrane associated nucleoside diphosphate kinase activity as possible basis for enhanced guanine nucleoside dependent adenylate cyciase activity induced by picolinic acid treatment of simian vinus 40-transformed normal rat kidney cells.J Biol Chem，1983，258：12609
9 刘少臣，赵福运，贲呈瑞.影响舌鳞癌淋巴结转移的临床和病理因素评价，中华口腔医学杂志，1996，31(5)：259
10 Holm LE，Lundquist PG，Silfversward C，et al. Histological grading of malignancy in squamous cell carcinoma of the oral tongue.Acta Otolaryngol，1982，94：185
收稿日期：1998-06-18, 百拇医药
单位：(刘卫平 周磊)广东医学院附属医院口腔科；(李岩松 曹军 黄冰)广东医学院附属医院病理科，湛江 524001
关键词：nm23-H1基因；舌癌；淋巴结转移；预后
广东医学院学报JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE1999年 第17卷 第1期 Vol 摘要 目的：探讨nm23-H1基因表达与舌癌淋巴结转移和预后的关系.方法：应用免疫组化SP法，观察46例病理确诊的舌癌石蜡标本中nm23-H1基因产物的表达.结果：46例中20例(43.48%)呈nm23-H1阳性表达，阳性产物主要位于细胞浆内.nm23-H1基因表达与患者性别、年龄及肿瘤病理分级、临床分期均无关(P>0.05)，但与颈淋巴结转移及术后生存期显著相关，在不伴淋巴结转移及术后生存3 a以上组中nm23-H1阳性率(55.17%，57.69%)明显高于伴有淋巴结转移及生存小于3 a组(23.53%，16.67%)(P<0.05).结论：nm23-H1基因在抑制舌癌淋巴结转移过程中起重要作用，其表达水平可能是预测舌癌淋巴结转移趋势和预后及指导临床治疗有意义的一项生物学指标。
, 百拇医药
Expression of nm23-H1 gene in tongue cancer and its clinical significance
Liu Weiping，Zhou Lei，Li Yansong，et al
Department of Stomatology，Affiliated Hospital of Guangdong Medical College，Zhanjiang 524001
Abstract Objective：To determine the relationship between expression of nm23-H1 gene and lymph node metastasis，prognosis in tongue cancer.Methods：Using SP immunohistochemical method，the expression of nm23-H1 gene products were examined in paraffin-embedded specimens from 46 cases of tongue cancer confirmed by pathology. Results：20 cases were found with nm23-H1 positive expression(43.48%).These immunoreactions were most common in cytoplasm of tumor cells.There were significant relations between nm23-H1 gene expression with cervical lymph node metastasis and postoperative survival period of patients，but not with sex，age of patients，pathological grade and clinical stage of the tutmor.The positive ates of nm23-H1 gene were significantly higher in patients without lymph node metastasis who lived postoperatively for more than 3 years than those in group with lymph node metastasis who died within 3 years(55.17%，57.69% vs 23.53%，16.67% respectively，P<0.05).Conclusions：nm23-H1 gene plays an important role in the inhibition of lymph node metastasis of tongue cancer.The expression levels of nm23-H1 gene may be a valuable biological indicator for predicting lymph node metastasis and prognosis of thetumoranddirectingclinicaltreatment.
, 百拇医药
Key words：nm23-H1 gene；tongue cancer；lymph node metastasis；prognosis
在动物转移模型及人类某些恶性肿瘤如乳腺癌、肝癌、肺癌、肾癌、胃癌及结肠癌等均证实nm23-H1基因表达与肿瘤转移或预后密切相关[1～6].但其是否与舌癌的颈淋巴结转移和预后有关，国内外尚未见报道。舌癌的发病居口腔癌之首，且具有淋巴转移早，预后不良的特点 .为此，作者应用免疫组化SP法对nm23-H1基因产物在舌癌中的表达进行研究，探讨nm23-H1基因表达与舌癌淋巴结转移和预后的关系，并评价其临床应用价值.
1 材料和方法
1.1 材料 标本来自广东医学院附属医院口腔科1988年2月～1995年4月舌癌术后存档石蜡标本，剔除术前行放疗或化疗者，共计46例.其中男性32例，女性14例，年龄24～71岁，平均48 .6岁.肿瘤部位：舌缘22例，舌尖11例，舌腹10例，舌根3例.所有标本均再次复查、确诊，46例均为鳞状细胞癌，按 WHO 1971年标准病理分级：1、2、3级分别为18、12、16例，临床分期采用UICC1987年公布的标准：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为12、13、12、9例.手术采取舌颌颈联合根治，术后经病理确诊有颈部淋巴结转移17例，占36.96%，术后失访8例，随访38例中，生存3 a以上26例，占68.42%，术后1～3 a内死亡12例，占31.58%.
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1.2 方法 标本按4μm厚连续切片，分别行HE染色及nm23-H1免疫组化染色，免疫组化试剂盒购自美国Maxim公司，操作按说明书进行，以PBS代替一抗作阴性对照.
1.3 结果测定 阳性信号为棕黄色颗粒，主要定位于癌细胞胞浆中，随机选取5个高倍视野(×400)计数阳性细胞比例，阳性细胞<30%，定为阴性(低表达)，≥30%为阳性表达.
1.4 统计分析 采用χ2检验
2 结果
46例中20例呈阳性表达，阳性率43.48%.阳性产物主要位于胞浆中，部分胞核、胞膜上亦有表达(图1).
图1 nm23-H1基因在舌癌中的表达，阳性产物主要
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位于细胞浆内(×400)
nm23-H1表达结果与舌癌临床病理特征及预后的关系见表1 .
表1 nm23-H1表达与舌癌临床病理特征及预后的关系 项目
例数
nm23-H1
阳性率/%
P值
-
+
性别
男
, 百拇医药
32
17
15
46.88
>0.05
女
14
9
5
35.71
年龄(岁)
<48.6
21
, http://www.100md.com
12
9
42.86
>0.05
>48.6
25
14
11
44.00
病理分级
1
18
9
, http://www.100md.com
9
50.00
>0.05
2
12
7
5
41.67
3
16
10
6
37.50
, http://www.100md.com 临床分期
12
7
5
41.67
>0.05
13
8
5
38.46
12
6
6
50.00
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9
5
4
44.44
颈部淋巴转移
(+)
17
13
4
23.53
<0.05
(-)
29
, 百拇医药
13
16
55.17
预后
<3a
12
10
2
16.67
<0.05
>3a
26
11
, 百拇医药 15
57.69
从表中可见，nm23-H1表达与患者性别、年龄及临床分期均无明显关系，随舌癌病理分级的高，nm23-H1阳性率呈逐渐减低的趋势，但差别无统计学意义(P>0.05).在不伴和伴有颈部淋巴结转移的舌癌组织中，nm23-H1阳性率分别为55.17%和23.53%，两者相比有显著差异(P<0.05).术后生存大于3 a组中nm23-H1阳性率(57.69%)较小于3 a组(16.67%)明显为高(P<0.05) .
3 讨论
nm23基因是steeg等[1]于1988年从鼠的不同转移潜能的恶性黑色素瘤细胞系K1735中克隆和鉴定出来，其mRNA水平在低转移的瘤细胞较高转移者高出10倍，将nm23基因导入高转移鼠黑色素瘤细胞，其转移表型明显降低.在人类乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌及结肠癌中均存在nm23等位基因缺失现象，这些等位基因的缺失与肿瘤转移密切相关[2].因此，nm23基因目前被认为是最具代表性的肿瘤转移抑制基因.
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人类的nm23基因位于17号染色体q22区，现已鉴定出二种亚型：nm23-H1，nm23-H2，它们受两个独立的调控系统所调节，其中nm23-H1与肿瘤转移更为密切[3].Bevilacgua等[4]采用Northern杂交技术对乳腺浸润性导管癌的研究发现nm23-H1mRNA水平与有无腋窝淋巴结转移明显相关，无腋窝淋巴结转移者其表达水平明显高于有转移者.Hennessy等[5]的研究也得出相同的结果，并发现nm23-H1表达水平与乳腺癌患者生存时间呈显著正相关.Yamaguchi等[6]用抗nm23-H1单克隆抗体对肝细胞癌石蜡切片进行分析研究，也发现nm23-H1表达水平与肝内转移呈负相关，nm23-H1表达低下者生存期短.作者应用nm23-H1单克隆抗体对46例舌癌组织进行免疫组化染色，结果显示：nm23-H1表达与颈部淋巴结转移和预后有显著相关性，在不伴和伴有颈淋巴结转移的舌癌组织中，nm23-H1阳性率分别为55.17%和23.53%，两者相比差异有显著性(P<0.05)，随访生存3 a以上及以下二组资料显示，nm23-H1阳性率高的预后明显为好(P<0.05).表明nm23-H1基因在抑制舌癌颈淋巴结转移过程中起重要作用，其表达水平可作为预测舌癌颈淋巴结转移及预后的一项重要指标.
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nm23-H1基因抑制舌癌淋巴结转移的确切机制尚不清楚，已知其蛋白产物与二磷酸核苷激酶(NDPK)的 α 链氨基酸序列高度相似，NDPK是一种普遍存在的酶，相对分子质量(Mr)17000～18000，主要存在于胞浆和质膜上 .现已证实NDPK至少参与两个在肿瘤和发育上起重要作用的功能：微管聚合与解聚[7]，G蛋白介导的信号传播[8].NDPK改变，一方面可引起由微管聚合而成的纺锤体的异常，导致非整倍体形成，进而促进肿瘤的发展；另一方面可通过影响细胞骨架及对细胞素等信号反应性的改变引起细胞运动而参予浸润转移过程.
一直以来，对无明显颈淋巴结转移临床指征的舌癌患者主要根据病理分级和临床分期来预测其转移的可能性，并作为指导临床治疗的主要指标。但近期越来越多的研究表明，舌癌病理分级及临床分期在反应其生物学行为如侵袭性、淋巴结受累等均有一定局限，并不能准确地判定舌癌早期是否存在淋巴结转移，二者指导临床意义不大[9，10].本实验结果显示：nm23-H1表达与舌癌病理分级及临床分期均无明显相关性(P>0..05)，与多数肿瘤的研究结果一致[1～4，6] .表明nm23-H1基因对舌癌组织分化及演进过程不起调控作用，提示舌癌颈淋巴结转移并不取决于其病理分级和临床分期.
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肿瘤转移是一个多步复杂的过程，涉及多癌基因的共同作用，是宿主和肿瘤共同作用的结果 .尽管nm23-H1表达水平不是判定舌癌颈淋巴结转移和预后的唯一标准，但nm23-H1低表达可能预示该患者的肿瘤细胞有较高的转移潜能，较易发生颈淋巴结转移且预后不良。通过对术前活检标本的免疫组化染色，对nm23-H1低表达的舌癌患者采取更加彻底的治疗和密切的随访是必要的.nm23-H1表达水平可作为指导临床治疗的一项有价值的指标.
4 参考文献
1 Steeg PS，Bevilacqua G，Kopper L，et al.Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatic potential.J Natl Cancer Inst，1988，80：200
, 百拇医药
2 Leone A，Mcbride OW，Weston A，et al.Somatic allelic deletion of nm23 in humam cancer.Cancer Res，1991，51：2490
3 Rosengard AM，Krutasch HC，Shearn A，et al.Reduced nm23/NDPK protein in tumor metastasis and abrrant drosophila development.Nature，1989，342：177
4 Bevilacqua G，Sobel ME，Liotta LA，et al.Association of low nm23 mRNA levels in human primary infiltrating ductal breast carcinomas with lymph node involvement and other histopathological indicators of high metastatic potential.Cancer Res，1989，49：5185
, 百拇医药
5 Hennessy C，Henry JA，May FEB，et al.Expression of the antimetastatic gene nm23 in human breast cancer：An association with good prognosis.J Natl Cancer Inst，1991，83：281
6 Yamaguchi A，Urano T，Goi T，et al.Expression of human nm23-H1 and nm23-H2 protein in hepatocellular carcinoma.Cancer，1994，73：2280
7 Nickerson J，Wells W.The microtubule associated nucleoside diphosphate kinase.J Biol Chem，1984，259：11297
, http://www.100md.com
8 Kimura N，Tohnson G.Increased membrane associated nucleoside diphosphate kinase activity as possible basis for enhanced guanine nucleoside dependent adenylate cyciase activity induced by picolinic acid treatment of simian vinus 40-transformed normal rat kidney cells.J Biol Chem，1983，258：12609
9 刘少臣，赵福运，贲呈瑞.影响舌鳞癌淋巴结转移的临床和病理因素评价，中华口腔医学杂志，1996，31(5)：259
10 Holm LE，Lundquist PG，Silfversward C，et al. Histological grading of malignancy in squamous cell carcinoma of the oral tongue.Acta Otolaryngol，1982，94：185
收稿日期：1998-06-18, 百拇医药