二个非对映异构三萜皂甙的结构鉴定
作者：邹 坤 赵玉英 张如意
单位：邹 坤:湖北三峡学院医学院医用化学教研室(宜昌 443003) 赵玉英 张如意:北京医科大学药学院天然药物研究室
关键词：豆科；合欢皮；三萜皂甙；非对映异构；合欢甙J14；合欢皂甙J15
实用医学进修杂志990108
摘 要 从合欢皮95%乙醇提取物中分得二个三糖链九糖皂甙(1，2)，经化学方法和光谱分析，将其结构分别鉴定为3-O-[β-D-xylopyranosyl-(1→2)-β-D-fucopyranosyl-(1→6)-β-D-2-deoxy-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-β-D-quinovopyranosyl-2,7-octadienoyl)-β-D-quinovopyranosyl]-2,7-octadienoyl} acacic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[α-L-arabinofuranosyl-(1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl ester (1) 和3-O-[β-D-xylopyranosyl-(1→2)-β-D-fucopyranosyl-(1→6)-β-D-2-deoxy-2-acetamido-glucopyranosyl]-21-O-{(6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-[4-O-((6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-β-D-quinovopyranosyl-2,7-octadienoyl)-β-D-quinovopyranosyl]-2,7-octadienoyl} acacic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[α-L-arabinofuranosyl-(1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl ester (2),分别命名为合欢皂甙J14(julibroside J14)和合欢皂甙J15(julibroside J15).
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Structural Identification of Two Diastereoisomeric
Saponins from Albizia Julibrissin
Zou Kun1 Zhao Yuying2 Zhang Ruyi2
1 Department of Medical Chemistry,Three Gorges University Medical College Yichang 443003
2 Department of Natural Medicine Chemistry,Beijing Medical University
Abstract Two diastereoisomeric saponins were isolated from the dried stem barks of Albizia julibrissin.Their structures were elucidated as 3-O-[β-D-xylopyranosyl-(1→2)-β-D-fucopyranosyl-(1→6)-β-D-2-deoxy-2-acetamido-glucopyranosyl]-21-O-{(6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-[4-O-((6R)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-β-D-quinovopyranosyl-2,7-octadienoyl)-β-D-quinovopyranosyl]-2,7-octadienoyl} acacic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[α-L-arabinofuranosyl-(1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl ester(1) and 3-O-[β-D-xylopyranosyl-(1→2)-β-D-fucopyranosyl-(1→6)-β-D-2-deoxy-2-acetamide-glucopyranosyl]-21-O-{(6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-[4-O-((6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-β-D-quinovopyranosyl-2,7-octadienoyl)-β-D-quinovopyranosyl]-2,7-octadienoyl} acacic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[α-L-arabinofuranosyl-(1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl ester(2),respectively,on the basis of chemical and spectral methods,and were named as Julibroside J14and Julibroside J15,respectively.
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Key words leguminousae;albizia julibrissin;diastereoisomerism;triterpenoid saponins;julibroside J14;julibroside J15
合欢皮为豆科植物合欢(Albizia julibrissin Durazz.)的干燥茎皮，中国药典一部(1995年版)记载合欢皮具有解郁安神，活血消肿的功能，用于心神不安，忧郁失眠，肺痈疮肿，跌扑伤痛等症。日本学者从其甲醇提取液中得到一极性很强的湿性粉末，能抑制Yoshida肿瘤[1]，另有报道从其提取物中分得6个皂甙[2]，其中三个皂甙具有细胞毒活性[2]。本室通过各种色谱方法尤其是HPLC制备法，对合欢皮95%乙醇提取物中正丁醇可溶部分进行了系统分离，利用多种溶剂系统，多种规格的液相柱与不同色谱仪结合，成功地从中分得三十二个五环三萜皂甙，所得大多数皂甙(28个)在几种展开剂的正相薄层层析中比移值相同；利用化学和波谱的方法，鉴定了其中二十八个皂甙的结构，其中有6对非对映异构体，5对位置异构体，二十三个皂甙为新化合物；其甙元大多为金合欢酸，具有3位、21位及28位三糖链；分子中含有7至9个残基，2个单萜烯酸残基，分子量大多在2000左右。本文报道合欢皂甙J14(1)和J15(2)的分离与鉴定。
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1 化合物的结构鉴定
合欢皮经95%乙醇渗漉，石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取。正丁醇部分经丙酮处理，D101、Sephadex LH-20、正相及反相硅胶柱层析，最后经反复HPLC色谱分离得化合物1和2。
1与2在高效液相色谱中是保留时间极为接近的一对化合物。1为白色粉末，正离子FAB-MS给出准分子离子峰m/z 2164+，与分子式C101H160O48相一致。Molish反应呈紫红色，Libermann-Buchard反应呈紫红色。其盐酸水解液经高效薄层层析与标准品对照，检出金合欢酸内酯，经纸层析与标准单糖对照检出葡萄糖，阿拉伯糖，木糖、鼠李糖及呋糖；鸡纳糖经与文献8对照Rf值一致。
1的氢谱有7个单峰角甲基质子信号[δ 1.28，1.01，0.95，1.16，1.87，1.01，1.06],3个相对低场的含氧碳上质子信号(δ3.50，5.21和6.21)， 1个宽单峰烯基质子信号(δ5.62)；1的碳谱也显示出与合欢皂甙J1中金合欢酸残基完全一致的碳信号(Table 1),证实1分子中含有金合欢酸残基。
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1的氢谱显示9个糖残基端基质子信号[δ4.90(1H，d,J=7.6Hz,H-glc-1),5.14(1H,br s,H-arap-1),4.98(1H,d,J=7.1 Hz,H-xyl-1),6.05(1H,d,J=8.1Hz,H-glc′-1),5.91(1H,s,H-rha-1),6.25(1H,s,H-araf-1),5.30(1H,d,J=7.4 Hz,H-glc″-1),4.84(1H,d,J=6.9Hz,H-qui-1),4.82(1H,d,J=7.7Hz,H-qui′-1)],3个去氧糖上双峰甲基质子信号[δ1.75(3H,d,J=5.2Hz,H-rha-6),1.58(3H,d,J=5.0Hz,H-qui′-6),1.34(3H,d,J=5.7Hz,H-qui-6)];碳谱出现9个糖残基端基碳信号(δ95.7，99.2，99.3，101.8，102.3，105.7，106.2，106.7，111.1)，3个去氧糖上甲基碳信号(δ18.4，18.6，18.8)。仔细对照1与合欢皂甙J1[3]的糖残基碳谱数据(Table 2)，发现二者基本一致，说明1分子中各糖残基种类以及连接方式均与合欢皂甙J1相同。
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1氢谱显示二组单萜烯酸酯衍生物的质子信号(Table 3)，后一组质子信号与合欢皂甙J1的MT’残基的质子信号基本吻合；将前一组质子信号与J1的MT残基对应值比较，其MT-9质子已高场位移成典型的甲基质子信号(δ4.71→1.82)，表明MT-9甲基没有被氧化成羟甲基[2]。
比较1与合欢皂甙J1的MT残基碳谱数据(Table 3)得知，1的MT残基无较低场的羟甲基碳信号(δ56.4)，多1个甲基碳信号(δ12.7)，其MT-2碳也高场位移了约6.0ppm(δ133.9→127.9)，说明1与合欢皂甙J1的区别在于1的MT-9碳没有被氧化成羟基，这一推论为1和合欢皂甙J1的质谱结果所证实，=即[2140+16]=[2156]。
综上所述，1的结构鉴定为3-ο-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)-β-D-吡喃呋糖基-(1→6)-β-D-2-去氧-2-乙酰胺基葡萄糖基]-21-O-{(6S)-2-反式-2,6-二甲基-6-O-[4-O-((6R)-2-反式-2,6-二甲基-6-O-β-D-吡喃鸡纳糖基-2,7-辛二烯酸基)-β-D-吡喃鸡纳糖基]-2,7-辛二烯酸基}金合欢酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)]-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基酯(3-O-[β-D-xylopyranosyl-(1→2)β-D-fucopyranosyl-(1→6)-β-D-2-deoxy-2-acetamido-glucopyranosyl]-21-O-{(6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-[4-O-((6R)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-β-D-quinovopyranosyl-2,7-octadienoyl)-β-D-quinovopyranosyl]-2,7-octadienoyl} acacic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[α-L-arabinofuranosyl-(1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl ester),命名为合欢皂甙J14(Julibroside J14)，为一新化合物，其结构为：
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2为白色粉末，正离子FAB-MS给出其准分子离子峰m/z 2142+，与分子式C101H160O48一致，这与1的分子式相同。2的氢谱有典型的金合欢酸残基的质子信号，9个与1几乎一致的糖端基质子信号和去氧糖的甲基质子信号(见实验部分)，2的碳谱显示出与1的甙元及单糖残基碳信号基本一致的碳信号(Tables 1-2,4)，说明1与2的甙元及单糖残基的组成及连接方式相同。
2的碳氢谱中也显示出二组单萜烯酸酯的碳氢信号(见Table 3)，其中MT残基部分与1的对应碳氢信号完全一致，所不同的是MT’残基碳氢信号，二者的关系也正如我们前文[3]报道的合欢皂甙J5与J8，J12与J13间的关系，因此确定2中MT’残基为(6S)构型。
综上所述，2的结构鉴定为3-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)-β-D-吡喃呋糖基-(1→6)-β-D-2-去氧-2-乙酰胺基葡萄糖基]-21-O-{(6S)-2-反式-2，6-二甲基-6-O-[4-O-((6S)-2-反式-2，6-二甲基-6-O-β-D-吡喃鸡纳糖基-2，7-辛二烯酸基)-β-D-吡喃鸡纳糖基]-2,7-辛二烯酸基}金合欢酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)]-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基酯(3-O-[β-D-xylopyranosyl-(1→2))-β-D-fucopyranosyl-(1→6)-β-D-2-deoxy-2-acetamido-glucopyranosyl]-21-O-{(6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-[4-O-((6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-β-D-quinovopyranosyl-2,7-octadienoyl)-β-D-quinovopyranosyl]-2,7-octadienoyl} acacic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[α-L-arabinofuranosyl-(1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl ester)，命名为合欢皂甙J14(Julibroside J14)，为一新化合物，结构见Scheme 1。
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比较合欢皂甙J1的MT残基与1，2的MT残基的对应质子信号可发现，尽管MT-9位羟基化影响最大的是MT-9质子，但对MT-3，MT-4质子的影响也是明显的：羟基化使MT-3质子低场位移了约0.14ppm，但使MT-4质子低场位移了约0.26ppm。
2 实验部分
2.1 仪器与样品
红外光谱用Perkin-Elmer 983型仪器测定，KBr压片。紫外光谱用Shimadzu UV-260型分光光度仪测定，核磁共振谱用Bruker AM-500型核磁共振俯测定，TMS作为内标，质谱用Zabspec型质谱仪测定，甘油为底物(正离子FAB-MS)，高效液相色谱仪为制备型Gilson高效液相色谱系统(Gilson 306 pump,800C Dynamic Mixer,506C system,118 UV/Vis Detector,201 Fraction Colletor)及Waters 600高效液相色谱系统(Waters 600 pump,600 Controller,486 Tunable Absorbance Detector)。
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合欢皮生药材购自四川省绵阳市医药公司药材站。生药材样品由北京医科大学生药学教研室李胜华教授鉴定为合欢属植物合欢(Albizia jubrissin Durazz)的干燥树皮，生药材样品保存于本室。
2.2 提取与分离
13.5公斤干燥合欢皮粉碎后，以40升95%卫生酒精浸泡二天，渗漉。渗漉液经薄膜浓缩(t<70℃)至小体积。药渣继续以25升95%乙醇浸泡，渗漉，减压浓缩。如此反复多次。浓缩液合并后经旋转蒸发仪回收溶剂得绿色浸膏1140克，将其悬浮于水，依次用p-ether,EtOAc，n-BuOH萃取，所得n-BuOH部分用丙酮处理，D101柱层析，得甲醇洗脱部分248克(总皂甙)。
取总皂甙150克，粗孔硅胶柱层析，氯仿-甲醇-水梯度(100∶1∶0→6∶4∶1)洗脱，收集65份(500ml/份)。所得Fr.41-43合并，分别经Sephadex LH-20柱层析，甲醇洗脱；反相C18硅胶柱层析，甲醇-水梯度(55%→75%)洗脱；最后经多次Gilson高效液相制备色谱(色谱柱Alltima C18.10μ,60A,22×250mm ID,流动相为甲醇/水梯度，流速5ml/min，检测波长216nm)分离，得化合物1(15.7mg)，2(24.8mg)。
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2.3 结构鉴定
化合物1：a white powder,[α]17D-35.7℃(c0.070,70% CH3OH);C101H160O48，positive FAB-MS m/z:2164+,1578+;IR(KBr)υmax:34.8,2923,1696,1640,1383,1074(cm-1)；1H NMR(500 MHz,py-d5)δ(ppm):1.28,1.01,0.95,1.16,1.87,1.01,1.06(3H×7,s,H-23,24,25,26,27,29,30),5.62(1H,brs,H-12);4.90(1H,d,J=7.6Hz,H-glc-l),5.14(1H,br s,H-arap-1),4.98(1H,d,J=7.1 Hz,H-xyl-1),6.05(1H,d,J=8.1Hz,H-glc′-1),5.91(1H,s,H-rha-1),6.25(1H,s,H-araf-1),5.30(1H,d,J=7.4Hz,H-glc″-1),4.84(1H,d,J=6.9Hz,H-qui-1),4.82(1H,d,J=7.7Hz,H-qui′-1),1.75(3H,d,J=5.2Hz,H-rha-6),1.58(3H,d,J=5.0Hz,H-qui′-6),1.34(3H,d,J=5.7Hz,H-qui-6);6.88(1H,t,J=7.2Hz,H-MT-3),6.21(1H,dd,J=10.7,17.4Hz,H-MT-7),5.25(1h,D,J=10.7Hz,H-MT-8a),5.44(1H,d,J=17.4Hz,H-MT-8b),1.82(3H,s,H-MT-9),1.53(3H,s,H-MT-10);7.09(1H,t,J=7.1Hz,H-MT′-3),6.30(1h,J=10.9,17.6Hz,H-MT′-7),5.18(1H,d,J=10.9Hz,H-MT′-8a),5.32(1H,d,J=17.6Hz,H-MT′-8b),1.93(3H,s,H-MT′-9),1.45(3H,s,H-MT′-10);13C NMR(125MHz,py-d5) data see Tables 1-2 and 4。
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化合物2：a white powder,[α]17D-28.0(c 0.070,70% CH3OH);C101H160O48，positive FAB-MS m/z:2142+,2010+,1847+,1710+.IR(KBr)υmax:3411,2922,1692,1638,1383,1074(cm-1)；1H NMR(500 MHz,py-d5)δ(ppm):1.29,1.01,0.96,1.16,1.87,1.01,1.06(3H×7,s,H-23,24,25,26,27,29,30),5.63(1H,brs,H-12);4.90(1H,d,J=7.2Hz,H-glc-l),5.15(1H,br s,H-arap-1),4.99(1H,d,J=7.4 Hz,H-xyl-1),6.06(1H,d,J=8.1Hz,H-glc′-1),5.92(1H,s,H-rha-1),6.26(1H,s,H-araf-1),5.34(1H,d,J=7.8Hz,H-glc″-1),4.84(1H,d,J=7.2Hz,H-qui-1),4.86(1H,d,J=7.6Hz,H-qui′-1),1.76(3H,d,J=5.4Hz,H-rha-6),1.58(3H,d,J=5.0Hz,H-qui′-6),1.34(3H,d,J=5.4Hz,H-qui-6);6.88(1H,t,J=7.4Hz,H-MT-3),6.20(1H,dd,J=10.9,17.4Hz,H-MT-7),5.21(1h,D,J=10.9Hz,H-MT-8a),5.45(1H,d,J=17.4Hz,H-MT-8b),1.82(3H,s,H-MT-9),1.53(3H,s,H-MT-10);7.02(1H,t,J=7.5Hz,H-MT′-3),6.19(1h,J=11.0,17.9Hz,H-MT′-7),5.26(1H,d,J=11.0Hz,H-MT′-8a),5.42(1H,d,J=17.9Hz,H-MT′-8b),1.87(3H,s,H-MT′-9),1.53(3H,s,H-MT′-10);13C NMR(125MHz,py-d5) data see Tables 1-2 and 4。
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(本文Table1～4 略)
参考文献
1 Chemieal Abstiacts.55;11770b
2 Tsuyoshi Ikeda,et al.Cytotoxic Saponins Acylated with Monoferpenoids from A. julibrissin. Bull Chem Soc Jpn 1995;68:3483
3 ZOU Kun,et al.Diasterevisomeric Saponins from A. julibrissin. Tetrahedron Lett.(accepted in August 1998)
(1998-12-07 收稿), 百拇医药
单位：邹 坤:湖北三峡学院医学院医用化学教研室(宜昌 443003) 赵玉英 张如意:北京医科大学药学院天然药物研究室
关键词：豆科；合欢皮；三萜皂甙；非对映异构；合欢甙J14；合欢皂甙J15
实用医学进修杂志990108
摘 要 从合欢皮95%乙醇提取物中分得二个三糖链九糖皂甙(1，2)，经化学方法和光谱分析，将其结构分别鉴定为3-O-[β-D-xylopyranosyl-(1→2)-β-D-fucopyranosyl-(1→6)-β-D-2-deoxy-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-β-D-quinovopyranosyl-2,7-octadienoyl)-β-D-quinovopyranosyl]-2,7-octadienoyl} acacic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[α-L-arabinofuranosyl-(1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl ester (1) 和3-O-[β-D-xylopyranosyl-(1→2)-β-D-fucopyranosyl-(1→6)-β-D-2-deoxy-2-acetamido-glucopyranosyl]-21-O-{(6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-[4-O-((6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-β-D-quinovopyranosyl-2,7-octadienoyl)-β-D-quinovopyranosyl]-2,7-octadienoyl} acacic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[α-L-arabinofuranosyl-(1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl ester (2),分别命名为合欢皂甙J14(julibroside J14)和合欢皂甙J15(julibroside J15).
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Structural Identification of Two Diastereoisomeric
Saponins from Albizia Julibrissin
Zou Kun1 Zhao Yuying2 Zhang Ruyi2
1 Department of Medical Chemistry,Three Gorges University Medical College Yichang 443003
2 Department of Natural Medicine Chemistry,Beijing Medical University
Abstract Two diastereoisomeric saponins were isolated from the dried stem barks of Albizia julibrissin.Their structures were elucidated as 3-O-[β-D-xylopyranosyl-(1→2)-β-D-fucopyranosyl-(1→6)-β-D-2-deoxy-2-acetamido-glucopyranosyl]-21-O-{(6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-[4-O-((6R)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-β-D-quinovopyranosyl-2,7-octadienoyl)-β-D-quinovopyranosyl]-2,7-octadienoyl} acacic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[α-L-arabinofuranosyl-(1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl ester(1) and 3-O-[β-D-xylopyranosyl-(1→2)-β-D-fucopyranosyl-(1→6)-β-D-2-deoxy-2-acetamide-glucopyranosyl]-21-O-{(6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-[4-O-((6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-β-D-quinovopyranosyl-2,7-octadienoyl)-β-D-quinovopyranosyl]-2,7-octadienoyl} acacic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[α-L-arabinofuranosyl-(1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl ester(2),respectively,on the basis of chemical and spectral methods,and were named as Julibroside J14and Julibroside J15,respectively.
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合欢皮为豆科植物合欢(Albizia julibrissin Durazz.)的干燥茎皮，中国药典一部(1995年版)记载合欢皮具有解郁安神，活血消肿的功能，用于心神不安，忧郁失眠，肺痈疮肿，跌扑伤痛等症。日本学者从其甲醇提取液中得到一极性很强的湿性粉末，能抑制Yoshida肿瘤[1]，另有报道从其提取物中分得6个皂甙[2]，其中三个皂甙具有细胞毒活性[2]。本室通过各种色谱方法尤其是HPLC制备法，对合欢皮95%乙醇提取物中正丁醇可溶部分进行了系统分离，利用多种溶剂系统，多种规格的液相柱与不同色谱仪结合，成功地从中分得三十二个五环三萜皂甙，所得大多数皂甙(28个)在几种展开剂的正相薄层层析中比移值相同；利用化学和波谱的方法，鉴定了其中二十八个皂甙的结构，其中有6对非对映异构体，5对位置异构体，二十三个皂甙为新化合物；其甙元大多为金合欢酸，具有3位、21位及28位三糖链；分子中含有7至9个残基，2个单萜烯酸残基，分子量大多在2000左右。本文报道合欢皂甙J14(1)和J15(2)的分离与鉴定。
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1 化合物的结构鉴定
合欢皮经95%乙醇渗漉，石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取。正丁醇部分经丙酮处理，D101、Sephadex LH-20、正相及反相硅胶柱层析，最后经反复HPLC色谱分离得化合物1和2。
1与2在高效液相色谱中是保留时间极为接近的一对化合物。1为白色粉末，正离子FAB-MS给出准分子离子峰m/z 2164+，与分子式C101H160O48相一致。Molish反应呈紫红色，Libermann-Buchard反应呈紫红色。其盐酸水解液经高效薄层层析与标准品对照，检出金合欢酸内酯，经纸层析与标准单糖对照检出葡萄糖，阿拉伯糖，木糖、鼠李糖及呋糖；鸡纳糖经与文献8对照Rf值一致。
1的氢谱有7个单峰角甲基质子信号[δ 1.28，1.01，0.95，1.16，1.87，1.01，1.06],3个相对低场的含氧碳上质子信号(δ3.50，5.21和6.21)， 1个宽单峰烯基质子信号(δ5.62)；1的碳谱也显示出与合欢皂甙J1中金合欢酸残基完全一致的碳信号(Table 1),证实1分子中含有金合欢酸残基。
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1的氢谱显示9个糖残基端基质子信号[δ4.90(1H，d,J=7.6Hz,H-glc-1),5.14(1H,br s,H-arap-1),4.98(1H,d,J=7.1 Hz,H-xyl-1),6.05(1H,d,J=8.1Hz,H-glc′-1),5.91(1H,s,H-rha-1),6.25(1H,s,H-araf-1),5.30(1H,d,J=7.4 Hz,H-glc″-1),4.84(1H,d,J=6.9Hz,H-qui-1),4.82(1H,d,J=7.7Hz,H-qui′-1)],3个去氧糖上双峰甲基质子信号[δ1.75(3H,d,J=5.2Hz,H-rha-6),1.58(3H,d,J=5.0Hz,H-qui′-6),1.34(3H,d,J=5.7Hz,H-qui-6)];碳谱出现9个糖残基端基碳信号(δ95.7，99.2，99.3，101.8，102.3，105.7，106.2，106.7，111.1)，3个去氧糖上甲基碳信号(δ18.4，18.6，18.8)。仔细对照1与合欢皂甙J1[3]的糖残基碳谱数据(Table 2)，发现二者基本一致，说明1分子中各糖残基种类以及连接方式均与合欢皂甙J1相同。
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1氢谱显示二组单萜烯酸酯衍生物的质子信号(Table 3)，后一组质子信号与合欢皂甙J1的MT’残基的质子信号基本吻合；将前一组质子信号与J1的MT残基对应值比较，其MT-9质子已高场位移成典型的甲基质子信号(δ4.71→1.82)，表明MT-9甲基没有被氧化成羟甲基[2]。
比较1与合欢皂甙J1的MT残基碳谱数据(Table 3)得知，1的MT残基无较低场的羟甲基碳信号(δ56.4)，多1个甲基碳信号(δ12.7)，其MT-2碳也高场位移了约6.0ppm(δ133.9→127.9)，说明1与合欢皂甙J1的区别在于1的MT-9碳没有被氧化成羟基，这一推论为1和合欢皂甙J1的质谱结果所证实，=即[2140+16]=[2156]。
综上所述，1的结构鉴定为3-ο-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)-β-D-吡喃呋糖基-(1→6)-β-D-2-去氧-2-乙酰胺基葡萄糖基]-21-O-{(6S)-2-反式-2,6-二甲基-6-O-[4-O-((6R)-2-反式-2,6-二甲基-6-O-β-D-吡喃鸡纳糖基-2,7-辛二烯酸基)-β-D-吡喃鸡纳糖基]-2,7-辛二烯酸基}金合欢酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)]-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基酯(3-O-[β-D-xylopyranosyl-(1→2)β-D-fucopyranosyl-(1→6)-β-D-2-deoxy-2-acetamido-glucopyranosyl]-21-O-{(6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-[4-O-((6R)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-β-D-quinovopyranosyl-2,7-octadienoyl)-β-D-quinovopyranosyl]-2,7-octadienoyl} acacic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[α-L-arabinofuranosyl-(1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl ester),命名为合欢皂甙J14(Julibroside J14)，为一新化合物，其结构为：
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2为白色粉末，正离子FAB-MS给出其准分子离子峰m/z 2142+，与分子式C101H160O48一致，这与1的分子式相同。2的氢谱有典型的金合欢酸残基的质子信号，9个与1几乎一致的糖端基质子信号和去氧糖的甲基质子信号(见实验部分)，2的碳谱显示出与1的甙元及单糖残基碳信号基本一致的碳信号(Tables 1-2,4)，说明1与2的甙元及单糖残基的组成及连接方式相同。
2的碳氢谱中也显示出二组单萜烯酸酯的碳氢信号(见Table 3)，其中MT残基部分与1的对应碳氢信号完全一致，所不同的是MT’残基碳氢信号，二者的关系也正如我们前文[3]报道的合欢皂甙J5与J8，J12与J13间的关系，因此确定2中MT’残基为(6S)构型。
综上所述，2的结构鉴定为3-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)-β-D-吡喃呋糖基-(1→6)-β-D-2-去氧-2-乙酰胺基葡萄糖基]-21-O-{(6S)-2-反式-2，6-二甲基-6-O-[4-O-((6S)-2-反式-2，6-二甲基-6-O-β-D-吡喃鸡纳糖基-2，7-辛二烯酸基)-β-D-吡喃鸡纳糖基]-2,7-辛二烯酸基}金合欢酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-[α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)]-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基酯(3-O-[β-D-xylopyranosyl-(1→2))-β-D-fucopyranosyl-(1→6)-β-D-2-deoxy-2-acetamido-glucopyranosyl]-21-O-{(6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-[4-O-((6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-β-D-quinovopyranosyl-2,7-octadienoyl)-β-D-quinovopyranosyl]-2,7-octadienoyl} acacic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-[α-L-arabinofuranosyl-(1→4)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranosyl ester)，命名为合欢皂甙J14(Julibroside J14)，为一新化合物，结构见Scheme 1。
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比较合欢皂甙J1的MT残基与1，2的MT残基的对应质子信号可发现，尽管MT-9位羟基化影响最大的是MT-9质子，但对MT-3，MT-4质子的影响也是明显的：羟基化使MT-3质子低场位移了约0.14ppm，但使MT-4质子低场位移了约0.26ppm。
2 实验部分
2.1 仪器与样品
红外光谱用Perkin-Elmer 983型仪器测定，KBr压片。紫外光谱用Shimadzu UV-260型分光光度仪测定，核磁共振谱用Bruker AM-500型核磁共振俯测定，TMS作为内标，质谱用Zabspec型质谱仪测定，甘油为底物(正离子FAB-MS)，高效液相色谱仪为制备型Gilson高效液相色谱系统(Gilson 306 pump,800C Dynamic Mixer,506C system,118 UV/Vis Detector,201 Fraction Colletor)及Waters 600高效液相色谱系统(Waters 600 pump,600 Controller,486 Tunable Absorbance Detector)。
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合欢皮生药材购自四川省绵阳市医药公司药材站。生药材样品由北京医科大学生药学教研室李胜华教授鉴定为合欢属植物合欢(Albizia jubrissin Durazz)的干燥树皮，生药材样品保存于本室。
2.2 提取与分离
13.5公斤干燥合欢皮粉碎后，以40升95%卫生酒精浸泡二天，渗漉。渗漉液经薄膜浓缩(t<70℃)至小体积。药渣继续以25升95%乙醇浸泡，渗漉，减压浓缩。如此反复多次。浓缩液合并后经旋转蒸发仪回收溶剂得绿色浸膏1140克，将其悬浮于水，依次用p-ether,EtOAc，n-BuOH萃取，所得n-BuOH部分用丙酮处理，D101柱层析，得甲醇洗脱部分248克(总皂甙)。
取总皂甙150克，粗孔硅胶柱层析，氯仿-甲醇-水梯度(100∶1∶0→6∶4∶1)洗脱，收集65份(500ml/份)。所得Fr.41-43合并，分别经Sephadex LH-20柱层析，甲醇洗脱；反相C18硅胶柱层析，甲醇-水梯度(55%→75%)洗脱；最后经多次Gilson高效液相制备色谱(色谱柱Alltima C18.10μ,60A,22×250mm ID,流动相为甲醇/水梯度，流速5ml/min，检测波长216nm)分离，得化合物1(15.7mg)，2(24.8mg)。
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2.3 结构鉴定
化合物1：a white powder,[α]17D-35.7℃(c0.070,70% CH3OH);C101H160O48，positive FAB-MS m/z:2164+,1578+;IR(KBr)υmax:34.8,2923,1696,1640,1383,1074(cm-1)；1H NMR(500 MHz,py-d5)δ(ppm):1.28,1.01,0.95,1.16,1.87,1.01,1.06(3H×7,s,H-23,24,25,26,27,29,30),5.62(1H,brs,H-12);4.90(1H,d,J=7.6Hz,H-glc-l),5.14(1H,br s,H-arap-1),4.98(1H,d,J=7.1 Hz,H-xyl-1),6.05(1H,d,J=8.1Hz,H-glc′-1),5.91(1H,s,H-rha-1),6.25(1H,s,H-araf-1),5.30(1H,d,J=7.4Hz,H-glc″-1),4.84(1H,d,J=6.9Hz,H-qui-1),4.82(1H,d,J=7.7Hz,H-qui′-1),1.75(3H,d,J=5.2Hz,H-rha-6),1.58(3H,d,J=5.0Hz,H-qui′-6),1.34(3H,d,J=5.7Hz,H-qui-6);6.88(1H,t,J=7.2Hz,H-MT-3),6.21(1H,dd,J=10.7,17.4Hz,H-MT-7),5.25(1h,D,J=10.7Hz,H-MT-8a),5.44(1H,d,J=17.4Hz,H-MT-8b),1.82(3H,s,H-MT-9),1.53(3H,s,H-MT-10);7.09(1H,t,J=7.1Hz,H-MT′-3),6.30(1h,J=10.9,17.6Hz,H-MT′-7),5.18(1H,d,J=10.9Hz,H-MT′-8a),5.32(1H,d,J=17.6Hz,H-MT′-8b),1.93(3H,s,H-MT′-9),1.45(3H,s,H-MT′-10);13C NMR(125MHz,py-d5) data see Tables 1-2 and 4。
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化合物2：a white powder,[α]17D-28.0(c 0.070,70% CH3OH);C101H160O48，positive FAB-MS m/z:2142+,2010+,1847+,1710+.IR(KBr)υmax:3411,2922,1692,1638,1383,1074(cm-1)；1H NMR(500 MHz,py-d5)δ(ppm):1.29,1.01,0.96,1.16,1.87,1.01,1.06(3H×7,s,H-23,24,25,26,27,29,30),5.63(1H,brs,H-12);4.90(1H,d,J=7.2Hz,H-glc-l),5.15(1H,br s,H-arap-1),4.99(1H,d,J=7.4 Hz,H-xyl-1),6.06(1H,d,J=8.1Hz,H-glc′-1),5.92(1H,s,H-rha-1),6.26(1H,s,H-araf-1),5.34(1H,d,J=7.8Hz,H-glc″-1),4.84(1H,d,J=7.2Hz,H-qui-1),4.86(1H,d,J=7.6Hz,H-qui′-1),1.76(3H,d,J=5.4Hz,H-rha-6),1.58(3H,d,J=5.0Hz,H-qui′-6),1.34(3H,d,J=5.4Hz,H-qui-6);6.88(1H,t,J=7.4Hz,H-MT-3),6.20(1H,dd,J=10.9,17.4Hz,H-MT-7),5.21(1h,D,J=10.9Hz,H-MT-8a),5.45(1H,d,J=17.4Hz,H-MT-8b),1.82(3H,s,H-MT-9),1.53(3H,s,H-MT-10);7.02(1H,t,J=7.5Hz,H-MT′-3),6.19(1h,J=11.0,17.9Hz,H-MT′-7),5.26(1H,d,J=11.0Hz,H-MT′-8a),5.42(1H,d,J=17.9Hz,H-MT′-8b),1.87(3H,s,H-MT′-9),1.53(3H,s,H-MT′-10);13C NMR(125MHz,py-d5) data see Tables 1-2 and 4。
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(本文Table1～4 略)
参考文献
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2 Tsuyoshi Ikeda,et al.Cytotoxic Saponins Acylated with Monoferpenoids from A. julibrissin. Bull Chem Soc Jpn 1995;68:3483
3 ZOU Kun,et al.Diasterevisomeric Saponins from A. julibrissin. Tetrahedron Lett.(accepted in August 1998)
(1998-12-07 收稿), 百拇医药