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编号:10233233
促胃液素及其受体拮抗剂丙谷胺对人胃癌细胞系生长的影响*
http://www.100md.com 《世界华人消化杂志》 1999年第1期
     作者:高 平1 姜希望11 袁伟健2

    单位:

    关键词:胃肿瘤/病理学;胃泌素;丙谷胺;肿瘤细胞,培养的

    中国图书资料分类号 R735中国图书资料分类号 R735.2

    摘 要

    目的 观察和分析五肽促胃液素PG及其受体拮抗剂丙谷胺PGM对人胃癌细胞系MGC生长的影响,为临床应用促胃液素受体拮抗剂协助治疗胃癌提供依据.

    方法 选用5mg/L,10mg/L,15mg/L,20mg/L 4种浓度的PG和30mg/L的PGM分别作用于体外培养的浓度为2.5×108/L的MGC,分别培养24,48,72h,于酶标仪上选用波长540nm测定吸光值A,并对数据进行比较分析.
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    结果 4种浓度的PG作用于MGC,MGC连续3d的生长状态与对照组无明显差异,而MGC在PGM作用下,其连续3d的平均A值分别为0.029,0.046和0.084,而未被PGM作用的MGC的平均A值分别是0.101,0.115和0.182,MGC在PGM作用下生长明显低于对照组(P<0.05).

    结论 外源性的PG对MGC无营养促进作用,而PGM能抑制MGC的生长.

    Effects of gastrin and

    gastrin receptor antagonist

    proglumide on gastric cancer line*

    GAO Ping1, JIANG Xi-Wang1 and YUAN Wei-Jian2
, 百拇医药
    Department of Gastroenterology, 1The Third Affiliated Hospital and 2Xiangya Hospital, Hunan Medical University, Changsha 410078, Hunan Province, China

    Subject headings stomach neoplasms; gastrin; proglumide; tumor cells, cultured

    Abstract

    AIM To observe and analyze the effect of pentagastrin (PG) and gastrin receptor antagonist proglumide (PGM) on gastric cancer cell line MGC.
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    METHODS A range of PG concentrations (5mg/L-20mg/L) and a PGM concentration (30mg/L) were separately added to MGC seeded into 96-well plate at a concentration of 2.5×108/L. The control was maintained without PG and PGM. After 24, 48 and 72 hours incubation, cell viability was measured by MTT assay (A).

    RESULTS Cell viability was not significantly different in PG groups as compared with that of control group. The A of MGC with PGM after 24, 48 and 72 hours incubation were 0.029, 0.046 and 0.084. But the A of MGC without PGM was 0.101, 0.115 and 0.182. Cell viability was significantly lower in PGM group as compared with that of control group (P<0.05).
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    CONCLUSION Exogenous PG has no effect on growth of MGC and PGM can inhibit the growth of MGC.

    0 引言

    一些研究证实,促胃液素对胃肠道肿瘤的发生和发展均有营养促进作用. 然而,促胃液素对体外培养的人胃癌细胞系的作用却不十分明确. 促胃液素受体拮抗剂丙谷胺PGM,能与促胃液素受体结合,在许多实验中表现出拮抗促胃液素的作用,并因此抑制了胃肠肿瘤的生长. 然而,在我们目前所检索的国内外文献中,PGM是否对胃癌细胞系有抑制作用,尚无报道. 因此,为了进一步了解促胃液素及PGM对胃癌细胞系生长的影响,探讨PGM协助治疗胃癌的可能性,我们选用了人胃癌细胞系MGC,采用了噻唑氮蓝(MTT)比色分析法,观察4种浓度的PG及PGM对MGC生长的影响,为临床应用提供依据.

    1 材料和方法
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    1.1 材料 人胃癌细胞系:MGC(代数不详),由湖南医科大学肿瘤研究所细胞中心提供. 五肽促胃液素(PG)上海丽珠东风生物有限公司,批号940513,以pH=8稀氨液为溶剂;PGM:江苏省南通勤奋制药厂,以40g/L的碳酸氢钠为溶剂;MTT:北京华美公司;RPMI Medium 1640:美国生命技术公司;小牛血清:杭州四季青生物材料研究所;二甲基亚砜(DMSO):上海生物试剂厂. 96孔板:华粤公司.

    1.2 方法

    1.2.1 药物处理细胞 选择对数生长期MGC,用2.5g/L胰酶消化,加入100mL/L小牛血清1640培养液使之成为细胞悬液,调整细胞浓度至2.5×108/L. 用加样枪点样至96孔板. 第1孔为空白对照,即100μL小牛血清培养液;第2孔为PG实验对照,90μL细胞悬液+稀氨液10μL;第3~6为细胞悬液各90μL,并分别加入50mg/L,100mg/L,150mg/L,200mg/L的PG溶液各10μL,使PG终浓度为5mg/L,10mg/L,15mg/L,20mg/L;第7孔为PGM实验对照,即细胞悬液90μL+碳酸氢钠溶液10μL;第8孔为细胞悬液90μL+300mg/L PGM溶液10μL,使PGM终浓度为30mg/L,每孔均重复8次. 为动态观察细胞生长情况,同时点样3块96孔板,分别培养24,48及72h后观察结果.
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    1.2.2 MTT比色分析 点样后的96孔板于37℃含50mL/L CO2的培养箱中分别培养24,48及72h后,每孔加MTT 10μL,继续培养4h,弃去上清液,每孔加入DMSO 100μL显色,30min内在酶标仪上选用540nm测吸光值(A).

    统计学处理 结果以A值的均数±标准差(x±sImage179.gif (856 bytes))表示,多组数据间采用方差分析,两组数据间采用t检验.

    2 结果

    2.1 PG对MGC生长的影响 本实验采用4种浓度的PG溶液处理MGC,观察PG对MGC生长的影响,发现各PG组在不同时间,其细胞生长状态与对照组无明显差异,说明PG对MGC无明显促进作用(表1).
, 百拇医药
    表1 PG对MGC生长的影响

    (x±sImage179.gif (856 bytes))

    分组

    24h

    48h

    72h

    实验对照

    0.052±0.014

    0.150±0.033

    0.152±0.035
, 百拇医药
    PG(5mg/L)

    0.095±0.024

    0.129±0.036

    0.150±0.019

    PG(10mg/L)

    0.097±0.020

    0.150±0.021

    0.130±0.020

    PG(15mg/L)

    0.082±0.020

    0.134±0.027
, 百拇医药
    0.101±0.016

    PG(20mg/L)

    0.048±0.011

    0.100±0.021

    0.160±0.027

    2.2 PGM对MGC生长的影响 本实验用PGM溶液处理MGC,观察PGM对MGC生长的影响,发现PGM组与对照组相比,其细胞生长明显低下,其差别有显著意义(P<0.05),说明PGM对MGC生长有抑制作用(表2,图1).表2 PGM对MGC生长的影响

    (x±sImage179.gif (856 bytes))
, 百拇医药
    分组

    24h

    48h

    72h

    实验对照

    0.101±0.001

    0.115±0.023

    0.182±0.012

    PGM(30mg/L)

    0.029±0.009a

    0.046±0.015a

, 百拇医药     0.084±0.017a

    aP<0.05,vs 对照组.23-1.gif (5605 bytes)

    图1 PGM对MGC生长的影响动态曲线图.

    3 讨论

    促胃液素对胃癌的营养促进作用在一些动物实验中已得到了证实[1,2]. 然而,体外培养的胃癌细胞系对外源性促胃液素的反应却不相一致. Moyer et al[3]将不同浓度的17肽促胃液素作用于胃癌细胞,结果显示,低浓度的促胃液素即能对癌细胞产生较明显的促进作用. Watson et al[4]在实验中却发现胃癌细胞株MKN45对外源性的五肽促胃液素无营养反应. 我们的结果与Watson et al相似. 我们用4种不同浓度的PG作用MGC,发现MGC连续3d的生长状态均与对照组无明显差异. 可是,我们在实验中却观察到MGC在PGM的作用下,其生长受到抑制,吸光值明显低于对照组.
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    1995年,Beauchamp et al[5]报道对促胃液素有反应的肠癌细胞移植入裸鼠后,PGM能延缓肿瘤的生长,延长裸鼠的生命. 1997年,何双梧et al[6]利用PGM成功地拮抗了促胃液素对体外培养的肠癌细胞的作用,抑制了肠癌细胞的生长. 然而,在我们的实验中,为什么会在PG对MGC生长无影响的情况下,PGM却能抑制MGC的生长呢我们推测可能与胃癌细胞的自分泌自促进作用以及促胃液素的种类有关.

    一些癌细胞具有分泌激素或激素样物质的作用,并且这些物质能与癌细胞表面的受体结合. 在这种情况下,癌细胞能够实现自促进生长,并因此降低了对外源性同类物质的需求[7]. 胃癌细胞可能具有自分泌促胃液素或促胃液素样物质的作用. 杨善民et al[8]通过对胃癌细胞超微结构的分析研究,认为胃癌组织中存在3种类型的内分泌细胞,其中C型细胞即相当促胃液素分泌细胞. Natson et al[9]在MKN45无血清培养基中检测出促胃液素水平. Baldwin et al[10]用PCR方法检测出胃癌细胞内有促胃液素mRNA的存在.
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    癌细胞表面受体的存在是实现自促进作用的必要条件. 实验证明,除正常胃肠粘膜外,恶性胃肠组织粘膜表面及胃肠癌细胞系上也存在着促胃液素受体[11]. 与正常胃肠组织细胞外,癌细胞表面受体数量增多,活性增强,且癌组织中具有活性的受体的细胞增多[12]. 胃癌细胞表面促胃液素受体的特点导致了癌细胞对促胃液素的敏感性大大增强,同时也表明促胃液素受体在促胃液素对胃癌的作用中起着重要的媒介作用. PGM可能正是消除了受体的媒介作用,从而阻断了促胃液素对胃癌细胞的营养作用.

    借鉴于有关文献的报道和我们实验的结果,我们认为MGC可能具有自分泌促胃液素或促胃液素样物质的作用. MGC在自分泌作用下,自身已存在一定的促胃液素浓度,外源性的PG浓度不足以显示其作用,故PG未能表现出对MGC的营养作用. 更何况PG是一种低肽链低活性的促胃液素. PGM却能与胃癌细胞表面促胃液素受体结合,阻断其自分泌自促进作用,从而抑制MGC的生长.

, 百拇医药     胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,其治疗方法仍是临床医师及众多研究者有待解决的棘手难题. 内分泌治疗的研究也许能为胃癌治疗提供新的思路. Harrison et al[13]在1990年将PGM用于手术后的胃癌患者,结果发现服用PGM的患者的平均寿命长于未服用PGM的患者,但差异缺乏统计学意义. PGM毕竟是一种较弱的促胃液素受体拮抗剂,缺乏受体特异性,因此将作用更强,特异性更高的促胃液素受体拮抗剂用于实验是我们努力的方向. 同时将内分泌治疗与传统抗癌治疗相结合的方法有待进一步的研究.

    作者简介:高平,女,1971-06-17生,湖南省长沙市人,汉族. 1998-07湖南医科大学硕士研究生毕业.

    *湖南省卫生厅基金资助课题,No.69

    通讯作者 高平,410013,湖南医科大学附属第三医院消化科,湖南省长沙市.
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    *Supported by the fund of Department of Health, Hunan Province.

    Correspondence to:GAO Ping, The Third Affiliated Hospital, Hunan Medical University, Changsha 410013, Hunan Province, China

    Tel. +86.731.8806600 Ext. 7301

    作者单位:高 平 姜希望 湖南医科大学附属第三医院消化科 湖南省长沙市 410013

    袁伟健 湖南医科大学湘雅医院消化科 湖南省长沙市 410078

, 百拇医药     4 参考文献

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, 百拇医药
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    收稿日期 1998-07-09 修回日期 1998-12-31, http://www.100md.com(高 平1 姜希望11 袁伟健2)