慢性肝病患者肝组织Fas抗原的表达及意义
作者：李 琳 陈乃玲 陈佩兰
单位：北京军区总医院解放军肝病研究所 北京市 100700
关键词：肝炎，乙型；肝硬化；肝肿瘤；Fas抗原
中国图书资料分类号 R735中国图书资料分类号 R735.7
Subject headings hepatitis B; liver cirrhosis; liver neoplasms; fas antigen
Fas是多种细胞表面的一种膜蛋白，为Fas配体(FasL)的受体，效应细胞的FasL与靶细胞的Fas结合时，可诱导靶细胞凋亡[1]. 有研究报道[2]，病毒性肝炎患者肝细胞的Fas抗原表达与肝组织病理损伤相关，本研究旨在探讨慢性乙型、丙型病毒性肝炎、肝硬变及原发性肝癌患者Fas抗原的表达与肝细胞损伤的关系及其临床意义.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 112例慢性肝病患者包括乙型慢性肝炎25例，肝炎后肝硬变(LC)6例，原发性肝癌(HCC)18例，丙型病毒性肝炎63例，其中丙型肝炎均为血清抗-HCV抗体和(或)HCV RNA阳性. 男80例，女38例，平均年龄30.9岁±10.5岁. 标本系采用快速肝穿或超声引导下细针肝穿刺获得，HCC标本系手术时自肝癌或癌周部位取材，经10%福尔马林固定，石蜡包埋后制成4μm厚连续切片.
1.2 Fas抗原表达的检测 兔抗-Fas多克隆抗体及免疫组化染色的过氧化酶标记的链霉卵白素试剂盒购自北京中山生物技术公司，分别为美国Santacruz公司及Ezyme Lab公司产品，按试剂盒说明进行染色，兔抗-Fas多克隆抗体工作稀释滴度1∶100. 实验中分别设阴、阳性对照，阴性对照用8例正常肝组织，其血清学其他各型肝炎病毒标志均为阴性. 阳性对照为预试验中Fas呈阳性的肝组织. 并分别用兔血清和PBS替代第一抗体作为空白对照，以确定其特异性. Fas免疫组化半定量判断根据Kiyoshi et al[3]报道方法进行半定量：(-)未见Fas阳性细胞：(+)Fas阳性细胞占肝小叶全部肝细胞的1/3以下：(++)Fas阳性细胞占肝小叶全部肝细胞的1/3～2/3：(+++)Fas阳性细胞占肝小叶全部肝细胞2/3以上.
, 百拇医药
1.3 肝组织HAI积分 常规HE染色进行病理诊断，根据Knodell方法[4]计算炎症活动度积分(HAI)前三项，不包括纤维化积分部分.
1.4 血清学检测 谷丙转氨酶(ALT)为赖氏法正常值40单位. 乙型肝炎病毒标志检测：采用亚利生物工程公司ELISA试剂盒. 异羟基洋地黄毒甙(Dig)试剂盒为德国Boehringe Mannheim公司生产，HBV-DNA探针系本所制备.
统计学处理 χ2检验.
2 结果
2.1 Fas抗原的表达及特点 结果见表1，Fas抗原阳性率丙型肝炎(中度)(84.5%). 乙型肝炎(72%)明显高于丙型肝炎(轻度)(64.9%，P<0.05)，LC(33%)，HCC(44%). Fas抗原主要呈颗粒状分布于肝细胞胞质内和胆管上皮细胞胞质内，少数表达于肝细胞膜上，多呈弥漫性散在分布，主要围绕于碎屑样坏死灶周围. 原发性肝癌的癌组织Fas抗原表达特点呈片状或点状分布，以胞质型为主.
, 百拇医药
表1 肝细胞Fas抗原的表达
临床诊断
n
Fas抗原阳性例数(阳性率%)
总阳性率(%)
+
++
+++
丙型(中度)
26
10(38.4)
9(34.6)
, 百拇医药 3(11.6)
84.5
乙型肝炎
25
13(52.0)
3(12.0)
2(8.0)
72.0
丙型(轻度)
37
22(59.5)
2(5.4)
0(0.0)
, 百拇医药
64.9
LC
6
2(33.0)
0(0.0)
0(0.0)
33.0
HCC
18
7(39.0)
1(5.0)
0(0.0)
44.0
, 百拇医药
*Fas抗原阳性率丙型(中度)、乙型肝炎明显高于丙型(轻度)、LC，HCC(P<0.05).
2.2 Fas抗原的表达与丙型肝炎患者肝组织HAI积分的关系 结果见表2. 从表2可见碎屑桥样坏死及小叶炎症越严重，Fas抗原的表达越高，二者具有明显的相关性(P<0.05).
表2 Fas抗原的表达与肝组织炎症相关性分析
Fas抗原
的表达
Fas抗原阳性例数(阳性率%)
Ⅰ(碎屑桥样坏死)
Ⅱ(小叶炎症)
Ⅲ(汇管炎症)
, http://www.100md.com
0～1
≥3
0～1
≥3
0～1
≥3
-
16(28.6)
1(14.3)
15(30.0)
2(15.3)
13(37.1)
4(14.3)
, 百拇医药
+
31(55.4)
1(14.3)
29(58.0)
3(23.1)
21(60.0)
11(39.3)
++
8(14.3)
3(42.8)
5(10.0)
6(46.2)
, http://www.100md.com
1(2.8)
10(35.7)
+++
1(17.9)
2(28.6)
1(2.0)
2(15.3)
0(0.0)
3(10.7)
2.3 本文对7例α-2b干扰素治疗的慢性乙型肝炎患者进行了治疗前、后肝组织Fas抗原与HBV DNA的观察，7例患者治疗前HBeAg及HBV DNA均为阳性. 3例HBV DNA阴转，其中2例疗后肝组织Fas抗原表达由(+)至(++)有增高趋势.3 讨论
, http://www.100md.com
细胞死亡形式有两种，一种是由各种原因引起的细胞被动性坏死，另一种为主动的程序性细胞死亡(PCD)，亦称凋亡(Apoptosis). Fas抗原是多种细胞表面的一种膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体家族类，当效应细胞的FasL和靶细胞的Fas结合时，可诱导靶细胞凋亡.
本文采用免疫组化方法，检测了不同肝病患者肝组织Fas抗原的表达，表达阳性率以慢性肝炎最高，其次肝硬变和肝癌. 进一步对63例丙肝组织进行了Fas抗原半定量分析，并分析了Fas抗原表达状况与肝组织HAI积分的关系. 结果显示，Fas抗原在丙型肝炎的阳性率为74%，其中丙型肝炎(中度)组高于丙型肝炎(轻度)组(P<0.05)，阳性细胞呈散在点状或小片状分布，Fas抗原表达多呈颗粒状，主要分布于肝细胞胞质，少数可见于细胞膜上. 阳性细胞多见于碎屑样坏死周边部位. HAI积分与Fas抗原半定量分析显示，碎屑桥样坏死及小叶炎症越严重，Fas抗原的表达越高，二者具有明显的相关性(P<0.05). 该结果提示Fas抗原的表达与肝组织病理损伤相关，细胞凋亡可能是丙型病毒性肝炎肝细胞坏死形式之一，与Hirametsn et al研究结果类似. Ruggerieri et al[5]最近报道，HCV核心蛋白可诱导FAS系统介导的肝细胞系凋亡，因此HCV抗原的表达与Fas抗原及FasL表达及其相互关系均待深入研究.
, http://www.100md.com
本文对7例α-2b干扰素治疗的慢性乙型肝炎患者进行了治疗前、后肝组织HAI，Fas抗原与血清HBV DNA的观察，7例患者治疗前HBeAg及HBV DNA均为阳性. 3例HBV DNA阴转，其中2例疗后肝组织Fas抗原表达由(+)至(++)有增高趋势，提示干扰素治疗增强机体免疫应答，诱导细胞凋亡，可能是其抗病毒机制之一，但本文病例数尚少，有待深入研究.
通讯作者 李琳
4 参考文献
[1] Hiramatsa N, Hayashi N, Katayama K, Mochizuki K, Kawanish Y, Kasahara A et al. Immunohistochemical detection of Fas antigen to liver tissue of patients with chronic hepatitis C. Hepatology, 1994;19:1354-1359
, 百拇医药
[2] Ryo K. Fas and Fas ligand strongly expressed in liver of fulminant hepatitis patients. Hepatology, 1995;22(4 pt 2):230A
[3] Kiyoshi M, Norio H, Naoki H, Kazuhiro K, Yuko K, Akinori K. Fas antigen expression in liver tissues of patients with chronic hepatitis B. Journal of Hepatology, 1996;24:1-7
[4] Knodell GR, Lshak KG, Black WC, Chen TS, Craig R, Kaplowitz N. Formulation and application of a numerical scoring systerm for assessing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis. Hepatology, 1981;1:431-435
[5] Ruggerieri A, Haradaf, Matsuura Y. Sensitization to Fas-mediated apoptosis by hepatitis C virus core pretein. Virology, 1997;229:68-72
收稿日期 1998-08-02, 百拇医药
单位：北京军区总医院解放军肝病研究所 北京市 100700
关键词：肝炎，乙型；肝硬化；肝肿瘤；Fas抗原
中国图书资料分类号 R735中国图书资料分类号 R735.7
Subject headings hepatitis B; liver cirrhosis; liver neoplasms; fas antigen
Fas是多种细胞表面的一种膜蛋白，为Fas配体(FasL)的受体，效应细胞的FasL与靶细胞的Fas结合时，可诱导靶细胞凋亡[1]. 有研究报道[2]，病毒性肝炎患者肝细胞的Fas抗原表达与肝组织病理损伤相关，本研究旨在探讨慢性乙型、丙型病毒性肝炎、肝硬变及原发性肝癌患者Fas抗原的表达与肝细胞损伤的关系及其临床意义.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 112例慢性肝病患者包括乙型慢性肝炎25例，肝炎后肝硬变(LC)6例，原发性肝癌(HCC)18例，丙型病毒性肝炎63例，其中丙型肝炎均为血清抗-HCV抗体和(或)HCV RNA阳性. 男80例，女38例，平均年龄30.9岁±10.5岁. 标本系采用快速肝穿或超声引导下细针肝穿刺获得，HCC标本系手术时自肝癌或癌周部位取材，经10%福尔马林固定，石蜡包埋后制成4μm厚连续切片.
1.2 Fas抗原表达的检测 兔抗-Fas多克隆抗体及免疫组化染色的过氧化酶标记的链霉卵白素试剂盒购自北京中山生物技术公司，分别为美国Santacruz公司及Ezyme Lab公司产品，按试剂盒说明进行染色，兔抗-Fas多克隆抗体工作稀释滴度1∶100. 实验中分别设阴、阳性对照，阴性对照用8例正常肝组织，其血清学其他各型肝炎病毒标志均为阴性. 阳性对照为预试验中Fas呈阳性的肝组织. 并分别用兔血清和PBS替代第一抗体作为空白对照，以确定其特异性. Fas免疫组化半定量判断根据Kiyoshi et al[3]报道方法进行半定量：(-)未见Fas阳性细胞：(+)Fas阳性细胞占肝小叶全部肝细胞的1/3以下：(++)Fas阳性细胞占肝小叶全部肝细胞的1/3～2/3：(+++)Fas阳性细胞占肝小叶全部肝细胞2/3以上.
, 百拇医药
1.3 肝组织HAI积分 常规HE染色进行病理诊断，根据Knodell方法[4]计算炎症活动度积分(HAI)前三项，不包括纤维化积分部分.
1.4 血清学检测 谷丙转氨酶(ALT)为赖氏法正常值40单位. 乙型肝炎病毒标志检测：采用亚利生物工程公司ELISA试剂盒. 异羟基洋地黄毒甙(Dig)试剂盒为德国Boehringe Mannheim公司生产，HBV-DNA探针系本所制备.
统计学处理 χ2检验.
2 结果
2.1 Fas抗原的表达及特点 结果见表1，Fas抗原阳性率丙型肝炎(中度)(84.5%). 乙型肝炎(72%)明显高于丙型肝炎(轻度)(64.9%，P<0.05)，LC(33%)，HCC(44%). Fas抗原主要呈颗粒状分布于肝细胞胞质内和胆管上皮细胞胞质内，少数表达于肝细胞膜上，多呈弥漫性散在分布，主要围绕于碎屑样坏死灶周围. 原发性肝癌的癌组织Fas抗原表达特点呈片状或点状分布，以胞质型为主.
, 百拇医药
表1 肝细胞Fas抗原的表达
临床诊断
n
Fas抗原阳性例数(阳性率%)
总阳性率(%)
+
++
+++
丙型(中度)
26
10(38.4)
9(34.6)
, 百拇医药 3(11.6)
84.5
乙型肝炎
25
13(52.0)
3(12.0)
2(8.0)
72.0
丙型(轻度)
37
22(59.5)
2(5.4)
0(0.0)
, 百拇医药
64.9
LC
6
2(33.0)
0(0.0)
0(0.0)
33.0
HCC
18
7(39.0)
1(5.0)
0(0.0)
44.0
, 百拇医药
*Fas抗原阳性率丙型(中度)、乙型肝炎明显高于丙型(轻度)、LC，HCC(P<0.05).
2.2 Fas抗原的表达与丙型肝炎患者肝组织HAI积分的关系 结果见表2. 从表2可见碎屑桥样坏死及小叶炎症越严重，Fas抗原的表达越高，二者具有明显的相关性(P<0.05).
表2 Fas抗原的表达与肝组织炎症相关性分析
Fas抗原
的表达
Fas抗原阳性例数(阳性率%)
Ⅰ(碎屑桥样坏死)
Ⅱ(小叶炎症)
Ⅲ(汇管炎症)
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0～1
≥3
0～1
≥3
0～1
≥3
-
16(28.6)
1(14.3)
15(30.0)
2(15.3)
13(37.1)
4(14.3)
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+
31(55.4)
1(14.3)
29(58.0)
3(23.1)
21(60.0)
11(39.3)
++
8(14.3)
3(42.8)
5(10.0)
6(46.2)
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1(2.8)
10(35.7)
+++
1(17.9)
2(28.6)
1(2.0)
2(15.3)
0(0.0)
3(10.7)
2.3 本文对7例α-2b干扰素治疗的慢性乙型肝炎患者进行了治疗前、后肝组织Fas抗原与HBV DNA的观察，7例患者治疗前HBeAg及HBV DNA均为阳性. 3例HBV DNA阴转，其中2例疗后肝组织Fas抗原表达由(+)至(++)有增高趋势.3 讨论
, http://www.100md.com
细胞死亡形式有两种，一种是由各种原因引起的细胞被动性坏死，另一种为主动的程序性细胞死亡(PCD)，亦称凋亡(Apoptosis). Fas抗原是多种细胞表面的一种膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体家族类，当效应细胞的FasL和靶细胞的Fas结合时，可诱导靶细胞凋亡.
本文采用免疫组化方法，检测了不同肝病患者肝组织Fas抗原的表达，表达阳性率以慢性肝炎最高，其次肝硬变和肝癌. 进一步对63例丙肝组织进行了Fas抗原半定量分析，并分析了Fas抗原表达状况与肝组织HAI积分的关系. 结果显示，Fas抗原在丙型肝炎的阳性率为74%，其中丙型肝炎(中度)组高于丙型肝炎(轻度)组(P<0.05)，阳性细胞呈散在点状或小片状分布，Fas抗原表达多呈颗粒状，主要分布于肝细胞胞质，少数可见于细胞膜上. 阳性细胞多见于碎屑样坏死周边部位. HAI积分与Fas抗原半定量分析显示，碎屑桥样坏死及小叶炎症越严重，Fas抗原的表达越高，二者具有明显的相关性(P<0.05). 该结果提示Fas抗原的表达与肝组织病理损伤相关，细胞凋亡可能是丙型病毒性肝炎肝细胞坏死形式之一，与Hirametsn et al研究结果类似. Ruggerieri et al[5]最近报道，HCV核心蛋白可诱导FAS系统介导的肝细胞系凋亡，因此HCV抗原的表达与Fas抗原及FasL表达及其相互关系均待深入研究.
, http://www.100md.com
本文对7例α-2b干扰素治疗的慢性乙型肝炎患者进行了治疗前、后肝组织HAI，Fas抗原与血清HBV DNA的观察，7例患者治疗前HBeAg及HBV DNA均为阳性. 3例HBV DNA阴转，其中2例疗后肝组织Fas抗原表达由(+)至(++)有增高趋势，提示干扰素治疗增强机体免疫应答，诱导细胞凋亡，可能是其抗病毒机制之一，但本文病例数尚少，有待深入研究.
通讯作者 李琳
4 参考文献
[1] Hiramatsa N, Hayashi N, Katayama K, Mochizuki K, Kawanish Y, Kasahara A et al. Immunohistochemical detection of Fas antigen to liver tissue of patients with chronic hepatitis C. Hepatology, 1994;19:1354-1359
, 百拇医药
[2] Ryo K. Fas and Fas ligand strongly expressed in liver of fulminant hepatitis patients. Hepatology, 1995;22(4 pt 2):230A
[3] Kiyoshi M, Norio H, Naoki H, Kazuhiro K, Yuko K, Akinori K. Fas antigen expression in liver tissues of patients with chronic hepatitis B. Journal of Hepatology, 1996;24:1-7
[4] Knodell GR, Lshak KG, Black WC, Chen TS, Craig R, Kaplowitz N. Formulation and application of a numerical scoring systerm for assessing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis. Hepatology, 1981;1:431-435
[5] Ruggerieri A, Haradaf, Matsuura Y. Sensitization to Fas-mediated apoptosis by hepatitis C virus core pretein. Virology, 1997;229:68-72
收稿日期 1998-08-02, 百拇医药