胃组织HE染色诊断幽门螺杆菌感染
作者：李惠珍 袁福业 候晓华
单位：李惠珍 袁福业 同济医科大学附属协和医院病理科(武汉 430022)；候晓华 消化内科
关键词：幽门螺杆菌；HE染色；Giemsa染色
临床消化病杂志990108 摘 要 目的：评价胃组织常规HE染色在诊断HP中的作用。方法：胃镜下钳取的 262例胃粘膜组织活检标本，分别进行Giemsa染色和HE染色，以Giemsa染色+尿素酶实验作为 标准，比较分析HE染色作为观察HP感染诊断的可能性。结果：HE染色显示了95%的诊断准确 率和96%的敏感性。结论：HE染色是观察HP的一种价廉、可靠的方法，但特异性尚不如Giems a染色。
Hemetoxylin and Eosin Staining of Gastric Tissue for the Diagnosis Infection of Helicobacter Pylori
, http://www.100md.com
Li Hui-zhen， Yuan Fu-ye， Hou Xiao-ha
Department of Pathology, Union Hospital, Tongji Medical University
Abstract Purpose: To assess hemetoxylin and eosin staining of g astric tissue, a relatively inexpensive and widely available method of helicobacter pylori(HP) detection. Methods:The hemetoxylin and eosin st ain was assessed as a mehtod of HP detection, analysis using giemsa staining+urea enzyme test as a standard in 262 gastric biopsy specimen s obtained from patients. Results: Performance of the hemetoxylin and eosin stain was accuary of 95% and sensitivity of 96%. Conclusion:The hemetoxylin and eosin stain is an inexpensive method of HP detection but with test performance characteristics inferior to giemsa stain.
, 百拇医药
Key words Helicobacter pylori Hemetoxylin and eosin stain Giemsa stain
大量研究资料表明，幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, HP)感染与 慢性胃炎、消化性溃疡、粘膜相关性淋巴瘤的病理发生有关，还可能是胃癌的协同致癌因子 [1]。诊断HP感染的方法很多，如：细菌培养、Warthin-Starry银染色、Giemsa染 色、尿素酶试验、血清抗HP抗体等。常规组织切片HE染色HP也能被显示，本研究的目的就是 以Giemsa染色+尿素酶实验作为标准，对比评估常规组织HE染色作为诊断HP方法的可能性。
1 材料与方法
1.1 标本来源：262例来自本院内窥镜钳取的十二指肠溃疡病成年患者的胃粘膜标本(每例取胃体、胃窦各2块)，其中233例为溃疡活动期，29例为溃疡愈合期。男 194例，女68例，年龄18～65岁，平均42岁。
, 百拇医药
1.2 检验方法：标本首先压片进行尿素酶试纸法检测，然后经10%福尔马林固定，石腊包埋，切片厚度为3～4 μm，每个组织块进行连续切片3～4张，分别进行 苏木素(Haris'苏木素)-伊红(HE)染色及改良Giemsa染色(①石腊切片常规脱腊复水，②入2 % Giemsa染色30分钟，③自来水洗，④迅速入纯酒精内脱水，⑤二甲苯透明，树胶封固)。
1.3 结果判断：尿素酶试纸呈红色，Giemsa染色及HE染色找到细菌为阳性结果。我们在组织切片上对HP进行分级，参考杨海涛等[2]半定量法分为Ⅰ～Ⅳ级：Ⅰ级，阴性，即未见HP；Ⅱ级偶见，需要仔细观察才能找到少量HP；Ⅲ级，介于Ⅱ级至Ⅳ级之间；Ⅳ级，整个粘膜上皮表面可见到大量HP。
2 结 果
262例Giemsa染色+尿素酶实验有233例HP阳性(Ⅳ级115例，Ⅲ级83例，Ⅱ级35例)，29例阴性。HE染色切片上有229例HP阳性(Ⅳ级110例，Ⅲ级74例，Ⅱ级45例)，33例阴性。二者HP分级无显著差异(P>0.05)，见表1。诊断准确率为94.6%，敏感度为96.1%，阳性预测值97.8%，阴性预测值73.7%，见表2。
, 百拇医药
表1 Giemsa与HE染色HP的分级比较 级别
Giemsa
HE
相符数
Ⅰ
29
33
24
Ⅱ
35
45
26
Ⅲ
, 百拇医药
83
74
72
Ⅳ
115
110
110
合计
262
262
232
P>0.05
表2 HP对比Giemsa的HE检测
, 百拇医药
Giemsa+
Giemsa-
总数
HE+
224
5
229
HE-
9
24
33
总数
233
, 百拇医药
29
262
准确率：248/262=94.6% 敏感度：224/223=96.6%
阳性预测值：224/229=97.8% 阴性预测值：24/33=73.7%
3 讨 论
检查HP感染的方法众多，但金标准是细菌培养或观察胃粘膜活检标本的Warthin-Starry银染色[3]，细菌培养费时较长，需一定的条件和技术，且操作较繁琐，价格较贵 [4]。改良Giemsa染色操作简单、快速，检出效果与银染色相似，甚至敏感性还高 于后者[4]，但仍为一种附带的染色，也随之加上了附带的费用。常规组织切片HE 染色HP为一种呈“S”形、弧形或弯曲形的淡紫色细菌，其位于胃粘膜的粘液层下面、上表 细胞表面、胃小凹内，因此根据在组织切片的形态特点及分布特征可正确诊断HP感染。本研 究以Giemsa染色+尿素酶实验为标准，其结果超过了Fallone等[5]报告的结果(其诊 断的准确率及敏感性分别为92%和93%)。HE染色与其它检测HP方法比较，避免了HP培养需要 微氧设备与技术，培养周期长，银染色法繁琐费时，血清学不能表示现症感染及C-UBT设备 复杂和费用昂贵，难以推广等缺点。
, 百拇医药
本研究中出现9个假阴性结果(占3.8%)，这9例的Giemsa染色显示细菌较少(均在Ⅱ级)。HE染色切片有4例伊红染色太淡且不均匀，5例切片质量欠佳且背景染料沉渣多，故造成HP辨认困难，出现假阴性结果。由于有一个假阴性结果，那些患者不能得到及时的治疗，因此可用一个更敏感的染色如Giemsa来避免。依靠HE染色的另一潜在问题就是要求病理科医生熟练掌握观察HP的技巧，否则就会导致一个较低的诊断准确率。值得一提的是本研究还出现了5个假阳性结果。重复阅片时，发现细菌为短杆状，未见典型的HP形态，故HE染色诊断HP必须是见到形态典型的HP方可下诊断，否则就有可能出现假阳性的结果。
总的来说，HE染色诊断HP尽管不如Giemsa染色清晰、易辨，但它仍显示了95%的诊断准确率，不失为一种简便易行、廉价可靠，在观察组织学改变的同时又可观察HP的方法。
(本文承蒙我院胃镜室大力协助，特此致谢)
参考文献
, http://www.100md.com
1 Blaser MJ. Helicobacter pylori phenotypes associared with peptic ulceration. Scand J Gastroenterol，1994,29(suppl 205)∶1～5.
2 周殿元，杨海涛，张万岱主编.幽门螺感菌与胃十二指肠疾病：幽门螺感菌的研究方 法.上海：上海科学技术文献出版社，1992，468.
3 Marshall BJ. Helicobacter Pylori. Am J Gastroenterol，1994,89∶116～28.
4 周殿元，杨海涛，张万岱主编.幽门螺感菌与胃十二指肠疾病：组织学方法诊断幽门 螺感菌感染.上海：上海科学技术文献出版社，1992，154.
5 Garlo A. Fallone, Vivian G Loo, John Lough, el al. Hematoxylin and eosin staining of gastric tissue for the detection of helicobacter pylori. Helicobacter，1997,2(1)∶32.
(1998 06 05收稿), 百拇医药
单位：李惠珍 袁福业 同济医科大学附属协和医院病理科(武汉 430022)；候晓华 消化内科
关键词：幽门螺杆菌；HE染色；Giemsa染色
临床消化病杂志990108 摘 要 目的：评价胃组织常规HE染色在诊断HP中的作用。方法：胃镜下钳取的 262例胃粘膜组织活检标本，分别进行Giemsa染色和HE染色，以Giemsa染色+尿素酶实验作为 标准，比较分析HE染色作为观察HP感染诊断的可能性。结果：HE染色显示了95%的诊断准确 率和96%的敏感性。结论：HE染色是观察HP的一种价廉、可靠的方法，但特异性尚不如Giems a染色。
Hemetoxylin and Eosin Staining of Gastric Tissue for the Diagnosis Infection of Helicobacter Pylori
, http://www.100md.com
Li Hui-zhen， Yuan Fu-ye， Hou Xiao-ha
Department of Pathology, Union Hospital, Tongji Medical University
Abstract Purpose: To assess hemetoxylin and eosin staining of g astric tissue, a relatively inexpensive and widely available method of helicobacter pylori(HP) detection. Methods:The hemetoxylin and eosin st ain was assessed as a mehtod of HP detection, analysis using giemsa staining+urea enzyme test as a standard in 262 gastric biopsy specimen s obtained from patients. Results: Performance of the hemetoxylin and eosin stain was accuary of 95% and sensitivity of 96%. Conclusion:The hemetoxylin and eosin stain is an inexpensive method of HP detection but with test performance characteristics inferior to giemsa stain.
, 百拇医药
Key words Helicobacter pylori Hemetoxylin and eosin stain Giemsa stain
大量研究资料表明，幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, HP)感染与 慢性胃炎、消化性溃疡、粘膜相关性淋巴瘤的病理发生有关，还可能是胃癌的协同致癌因子 [1]。诊断HP感染的方法很多，如：细菌培养、Warthin-Starry银染色、Giemsa染 色、尿素酶试验、血清抗HP抗体等。常规组织切片HE染色HP也能被显示，本研究的目的就是 以Giemsa染色+尿素酶实验作为标准，对比评估常规组织HE染色作为诊断HP方法的可能性。
1 材料与方法
1.1 标本来源：262例来自本院内窥镜钳取的十二指肠溃疡病成年患者的胃粘膜标本(每例取胃体、胃窦各2块)，其中233例为溃疡活动期，29例为溃疡愈合期。男 194例，女68例，年龄18～65岁，平均42岁。
, 百拇医药
1.2 检验方法：标本首先压片进行尿素酶试纸法检测，然后经10%福尔马林固定，石腊包埋，切片厚度为3～4 μm，每个组织块进行连续切片3～4张，分别进行 苏木素(Haris'苏木素)-伊红(HE)染色及改良Giemsa染色(①石腊切片常规脱腊复水，②入2 % Giemsa染色30分钟，③自来水洗，④迅速入纯酒精内脱水，⑤二甲苯透明，树胶封固)。
1.3 结果判断：尿素酶试纸呈红色，Giemsa染色及HE染色找到细菌为阳性结果。我们在组织切片上对HP进行分级，参考杨海涛等[2]半定量法分为Ⅰ～Ⅳ级：Ⅰ级，阴性，即未见HP；Ⅱ级偶见，需要仔细观察才能找到少量HP；Ⅲ级，介于Ⅱ级至Ⅳ级之间；Ⅳ级，整个粘膜上皮表面可见到大量HP。
2 结 果
262例Giemsa染色+尿素酶实验有233例HP阳性(Ⅳ级115例，Ⅲ级83例，Ⅱ级35例)，29例阴性。HE染色切片上有229例HP阳性(Ⅳ级110例，Ⅲ级74例，Ⅱ级45例)，33例阴性。二者HP分级无显著差异(P>0.05)，见表1。诊断准确率为94.6%，敏感度为96.1%，阳性预测值97.8%，阴性预测值73.7%，见表2。
, 百拇医药
表1 Giemsa与HE染色HP的分级比较 级别
Giemsa
HE
相符数
Ⅰ
29
33
24
Ⅱ
35
45
26
Ⅲ
, 百拇医药
83
74
72
Ⅳ
115
110
110
合计
262
262
232
P>0.05
表2 HP对比Giemsa的HE检测
, 百拇医药
Giemsa+
Giemsa-
总数
HE+
224
5
229
HE-
9
24
33
总数
233
, 百拇医药
29
262
准确率：248/262=94.6% 敏感度：224/223=96.6%
阳性预测值：224/229=97.8% 阴性预测值：24/33=73.7%
3 讨 论
检查HP感染的方法众多，但金标准是细菌培养或观察胃粘膜活检标本的Warthin-Starry银染色[3]，细菌培养费时较长，需一定的条件和技术，且操作较繁琐，价格较贵 [4]。改良Giemsa染色操作简单、快速，检出效果与银染色相似，甚至敏感性还高 于后者[4]，但仍为一种附带的染色，也随之加上了附带的费用。常规组织切片HE 染色HP为一种呈“S”形、弧形或弯曲形的淡紫色细菌，其位于胃粘膜的粘液层下面、上表 细胞表面、胃小凹内，因此根据在组织切片的形态特点及分布特征可正确诊断HP感染。本研 究以Giemsa染色+尿素酶实验为标准，其结果超过了Fallone等[5]报告的结果(其诊 断的准确率及敏感性分别为92%和93%)。HE染色与其它检测HP方法比较，避免了HP培养需要 微氧设备与技术，培养周期长，银染色法繁琐费时，血清学不能表示现症感染及C-UBT设备 复杂和费用昂贵，难以推广等缺点。
, 百拇医药
本研究中出现9个假阴性结果(占3.8%)，这9例的Giemsa染色显示细菌较少(均在Ⅱ级)。HE染色切片有4例伊红染色太淡且不均匀，5例切片质量欠佳且背景染料沉渣多，故造成HP辨认困难，出现假阴性结果。由于有一个假阴性结果，那些患者不能得到及时的治疗，因此可用一个更敏感的染色如Giemsa来避免。依靠HE染色的另一潜在问题就是要求病理科医生熟练掌握观察HP的技巧，否则就会导致一个较低的诊断准确率。值得一提的是本研究还出现了5个假阳性结果。重复阅片时，发现细菌为短杆状，未见典型的HP形态，故HE染色诊断HP必须是见到形态典型的HP方可下诊断，否则就有可能出现假阳性的结果。
总的来说，HE染色诊断HP尽管不如Giemsa染色清晰、易辨，但它仍显示了95%的诊断准确率，不失为一种简便易行、廉价可靠，在观察组织学改变的同时又可观察HP的方法。
(本文承蒙我院胃镜室大力协助，特此致谢)
参考文献
, http://www.100md.com
1 Blaser MJ. Helicobacter pylori phenotypes associared with peptic ulceration. Scand J Gastroenterol，1994,29(suppl 205)∶1～5.
2 周殿元，杨海涛，张万岱主编.幽门螺感菌与胃十二指肠疾病：幽门螺感菌的研究方 法.上海：上海科学技术文献出版社，1992，468.
3 Marshall BJ. Helicobacter Pylori. Am J Gastroenterol，1994,89∶116～28.
4 周殿元，杨海涛，张万岱主编.幽门螺感菌与胃十二指肠疾病：组织学方法诊断幽门 螺感菌感染.上海：上海科学技术文献出版社，1992，154.
5 Garlo A. Fallone, Vivian G Loo, John Lough, el al. Hematoxylin and eosin staining of gastric tissue for the detection of helicobacter pylori. Helicobacter，1997,2(1)∶32.
(1998 06 05收稿), 百拇医药