高效液相色谱法用于西洋参与白参的分析和鉴别
作者：王红燕 徐绥绪
单位：沈阳药科大学中药系，沈阳 110015
关键词：西洋参；人参皂苷-Rb-1；HPLC
沈阳药科大学学报990107 摘 要 采用高效液相色谱法测定了10个不同地区栽培的西洋参与白参中人参皂苷-Rb-1的含量，并利用相对保留时间和相对含量对两者进行定性鉴别.
分类号 R284.1
Analyses and Identification by the High-Performance Liquid Chromatographic Quantitative and Qualitative Method of Ginsenosides in Panax quinquefolium L.and P.ginseng C.A.Meyer.
, 百拇医药
Wang Hongyan,Xu Suixu
Department of Traditional Chinese Medicines,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015
Abstract This paper reports a quantitative method for determing ginsenoside-Rb-1 in Panax quinquefolium L and P.ginseng C.A.Mey.by HPLC.Examination of ten specimens of P.quinquefolium and P.ginseng showed that the HPLC patterns of P.quinquefolium are always simpler than those of P.ginseng,the minor ginsenosides in P.ginseng are easier to be observed and the patterns are therefore more complicated.It was obvious that there was no ginsenoside- Rf in P.quinquefolium,but it was detected in P.ginseng by means of HPLC.
, http://www.100md.com
Key words Panax quinquefolium;ginsenoside-Rb-1;HPLC
西洋参为五加科植物西洋参(Panax quinquefolium L.)的干燥根，原产于美国和加拿大，本世纪70年代以来，在我国许多地区大面积引种、栽培并取得成功.人参和西洋参为同科同属植物，两者的外形基本相似，但由于性味、功效的不同，中医临床上区别应用.近年来，西洋参的使用量大增，且价格昂贵，市场上不断出现用人参加工后充当西洋参出售，用传统的外观鉴别法极不易区别.因此有必要建立一个能准确、灵敏、快速分析西洋参质量的方法.
西洋参总皂苷是西洋参的主要有效成分，其中人参皂苷-Rb-1又是西洋参主要特征性成分，其含量高于人参，也是西洋参与人参鉴定的主要依据.卫生部部颁的定性分析方法为薄层层析法〔1〕；但该法操作比较繁琐、费时，条件要求比较严格.本文采用高效液相色谱法，以乙腈-水(30∶70)为流动相，紫外203 nm检测，测定西洋参与人参中人参皂苷-Rb-1的含量并利用谱峰的差异对两者进行定性比较，从而达到控制西洋参质量的目的.
, http://www.100md.com
1 仪器与试药
美国PERKIN-ELMER公司高效液相色谱仪；紫外-可见检测器LC 295；1022型数据处理机；Sep-Pak C18 Cartridge(Waters);乙腈为色谱纯；人参皂苷-Rb-1由卫生部生物制品检定所及沈阳药科大学天然药物化学教研室提供；其它试剂均为分析纯规格；水为去离子水.
2 方法与结果
2.1 色谱条件
采用Hypersil-C18 ODS柱(4.6 mm×250 mm)(大连依利特科学仪器有限公司)，比较不同溶剂系统，采用乙腈-水(30∶70)为流动相，可较好分离出待测成分；其它条件为：流速1 ml/min，柱温40℃，纸速3 mm/min，检测波长203 nm.以峰面积定量.
, 百拇医药
2.2 检测波长的选择
测定了人参皂苷-Rb-1在流动相中的紫外吸收光谱，在紫外区的最大吸收波长为203 nm，故选用该波长进行检测.
2.3 线性试验
取人参皂苷-Rb-1对照品适量，加甲醇制成1 mL含1.00 mg的溶液，分别进样4，8，12，16，20 μL，测定峰面积，以人参皂苷-Rb-1(mg)为横坐标(X)，积分值为纵坐标(Y)，进行线性回归，得回归方程
Y=-72 342+220 915 775X，r=0.999 5.
结果表明，在选定的浓度范围内(4～20 μg)，标准曲线线性关系良好，符合用外标法定量测定要求.
, 百拇医药
2.4 精密度试验
取线性试验项下溶液，每次进样12 μL，进样5次，根据峰面积计算，RSD=1.63%.
2.5 回收率试验
精密量取对照液置5份西洋参药材中，按样品测定法测定含量，结果见表1.
表1 人参皂苷-Rb-1的回收率试验 西洋参样品中人参皂苷-Rb-1的量/μg
加入量/μg
测得量/μg
回收量/μg
回收率/%
, http://www.100md.com 4.8
5.4
10.4
5.6
103.7
4.6
5.4
9.8
5.2
96.3
4.6
5.4
10.1
, 百拇医药
5.5
101.9
4.7
5.4
10.0
5.3
98.1
4.7
5.4
10.2
5.5
101.9
平均值=100.4%
, 百拇医药
RSD=3.05%
2.6 样品含量测定
取已干燥、恒重的样品1 g，精密称定，水煎煮3次，每次加水25 mL,第一次煎煮3 h，第二次煎煮2 h，第三次煎煮1 h，合并水煎液.减压浓缩约25 mL，转移至25 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀.取2.5 mL通过Sep-Pak C18预处理柱，分别用水5 mL，30%甲醇10 mL和甲醇5 mL洗脱，甲醇洗脱液转移至5 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度.精密吸取适量注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标计算，结果见表2.表2 西洋参及白参中人参皂苷Rb-1测定结果 药材
产地
人参皂苷Rb1的含量/%，n=3
RSD/%
, 百拇医药
西洋参
美国，威斯康星洲
2.64
3.94
吉林农业大学，引进原种
2.14
3.07
吉林，延寿县
2.22
2.38
辽宁，本溪
2.24
1.78
, 百拇医药
加拿大，安大略省
2.70
1.61
人参
黑龙江，伊春
0.65
4.07
吉林，延边
0.30
3.85
吉林，靖宇龙泉乡
0.28
3.57
, 百拇医药
吉林，靖宇二参场
0.72
1.39
黑龙江，牡丹江
0.36
4.81
2.7 样品的定性鉴别
以人参皂苷-Rb-1为基准物，计算各主要人参皂苷的相对保留时间，并将各人参皂苷的相对含量(AX/A总)列于表3.表3 西洋参与白参中各主要人参皂苷的相对保留时间和含量比较
谱峰数
人参皂苷的相对保留时间和含量比较
, 百拇医药
Rr
Rb-1
Rc
Rb2
其它
对照品
5
0.73
1
1.25
1.71
2.77(Rd)
西洋参
, http://www.100md.com
1＃
3
-
1(79)
1.24(10)
-
1.81(11)
2＃
2
-
1(83)
1.23(17)
3＃
, http://www.100md.com
2
-
1(84)
1.25(16)
4＃
2
-
1(85)
1.24(15)
5＃
2
-
1(85)
, http://www.100md.com
1.22(15)
人参
6＃
5
0.76(10)
1(39)
1.23(24)
1.60(17)
2.60(10)
7＃
4
0.88(16)
, 百拇医药
1(41)
1.26(26)
1.67(17)
8＃
4
0.849(16)
1(40)
1.24(24)
1.62(11)
9＃
4
0.83(8)
, 百拇医药
1(60)
1.26(21)
1.68(11)
10＃
4
0.83(11)
1(43)
1.25(25)
1.66(21)
从表3可以看出，西洋参的谱峰较少，仅为一主峰(Rb-1)、一次峰(Rc)，而人参的谱峰为一主峰(Rb-1)、三次峰(Rf、Rc、Rb2)出峰先后顺序为Rf、Rb-1、Rc、Rb2.各人参皂苷相对含量大小排列顺序为：西洋参Rb-1Rc；人参Rb-1>Rc>Rb2>Rf.根据Rb-1谱峰前有无Rf峰，Rb1相对含量>75%及绝对含量>2%(见表2)可初步确定西洋参中有无掺入人参.
, 百拇医药
2 讨论
a.本文采用水煎煮法提取人参皂苷，水煎液直接通过Sep-Pak C18预处理柱净化处理，简化了手续，提高了效率，方法快速，重现性好.
b.用水煎法提取人参皂苷，提取液中存在大量糖和少量色素，对测定有干扰.曾用水饱和正丁醇多次萃取去除杂质，但效果不明显.后改用Sep-Pak C18固相萃取法，效果良好.
c.以标准品对照，采用高效液相色谱的相对保留时间和相对含量对西洋参及人参提取液中各主要人参单体皂苷定性分析.
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部进口药材标准.1986.16(WS4-16-86)
收稿日期:1998-07-01, http://www.100md.com
单位：沈阳药科大学中药系，沈阳 110015
关键词：西洋参；人参皂苷-Rb-1；HPLC
沈阳药科大学学报990107 摘 要 采用高效液相色谱法测定了10个不同地区栽培的西洋参与白参中人参皂苷-Rb-1的含量，并利用相对保留时间和相对含量对两者进行定性鉴别.
分类号 R284.1
Analyses and Identification by the High-Performance Liquid Chromatographic Quantitative and Qualitative Method of Ginsenosides in Panax quinquefolium L.and P.ginseng C.A.Meyer.
, 百拇医药
Wang Hongyan,Xu Suixu
Department of Traditional Chinese Medicines,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015
Abstract This paper reports a quantitative method for determing ginsenoside-Rb-1 in Panax quinquefolium L and P.ginseng C.A.Mey.by HPLC.Examination of ten specimens of P.quinquefolium and P.ginseng showed that the HPLC patterns of P.quinquefolium are always simpler than those of P.ginseng,the minor ginsenosides in P.ginseng are easier to be observed and the patterns are therefore more complicated.It was obvious that there was no ginsenoside- Rf in P.quinquefolium,but it was detected in P.ginseng by means of HPLC.
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Key words Panax quinquefolium;ginsenoside-Rb-1;HPLC
西洋参为五加科植物西洋参(Panax quinquefolium L.)的干燥根，原产于美国和加拿大，本世纪70年代以来，在我国许多地区大面积引种、栽培并取得成功.人参和西洋参为同科同属植物，两者的外形基本相似，但由于性味、功效的不同，中医临床上区别应用.近年来，西洋参的使用量大增，且价格昂贵，市场上不断出现用人参加工后充当西洋参出售，用传统的外观鉴别法极不易区别.因此有必要建立一个能准确、灵敏、快速分析西洋参质量的方法.
西洋参总皂苷是西洋参的主要有效成分，其中人参皂苷-Rb-1又是西洋参主要特征性成分，其含量高于人参，也是西洋参与人参鉴定的主要依据.卫生部部颁的定性分析方法为薄层层析法〔1〕；但该法操作比较繁琐、费时，条件要求比较严格.本文采用高效液相色谱法，以乙腈-水(30∶70)为流动相，紫外203 nm检测，测定西洋参与人参中人参皂苷-Rb-1的含量并利用谱峰的差异对两者进行定性比较，从而达到控制西洋参质量的目的.
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1 仪器与试药
美国PERKIN-ELMER公司高效液相色谱仪；紫外-可见检测器LC 295；1022型数据处理机；Sep-Pak C18 Cartridge(Waters);乙腈为色谱纯；人参皂苷-Rb-1由卫生部生物制品检定所及沈阳药科大学天然药物化学教研室提供；其它试剂均为分析纯规格；水为去离子水.
2 方法与结果
2.1 色谱条件
采用Hypersil-C18 ODS柱(4.6 mm×250 mm)(大连依利特科学仪器有限公司)，比较不同溶剂系统，采用乙腈-水(30∶70)为流动相，可较好分离出待测成分；其它条件为：流速1 ml/min，柱温40℃，纸速3 mm/min，检测波长203 nm.以峰面积定量.
, 百拇医药
2.2 检测波长的选择
测定了人参皂苷-Rb-1在流动相中的紫外吸收光谱，在紫外区的最大吸收波长为203 nm，故选用该波长进行检测.
2.3 线性试验
取人参皂苷-Rb-1对照品适量，加甲醇制成1 mL含1.00 mg的溶液，分别进样4，8，12，16，20 μL，测定峰面积，以人参皂苷-Rb-1(mg)为横坐标(X)，积分值为纵坐标(Y)，进行线性回归，得回归方程
Y=-72 342+220 915 775X，r=0.999 5.
结果表明，在选定的浓度范围内(4～20 μg)，标准曲线线性关系良好，符合用外标法定量测定要求.
, 百拇医药
2.4 精密度试验
取线性试验项下溶液，每次进样12 μL，进样5次，根据峰面积计算，RSD=1.63%.
2.5 回收率试验
精密量取对照液置5份西洋参药材中，按样品测定法测定含量，结果见表1.
表1 人参皂苷-Rb-1的回收率试验 西洋参样品中人参皂苷-Rb-1的量/μg
加入量/μg
测得量/μg
回收量/μg
回收率/%
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5.4
10.4
5.6
103.7
4.6
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9.8
5.2
96.3
4.6
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10.1
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5.5
101.9
4.7
5.4
10.0
5.3
98.1
4.7
5.4
10.2
5.5
101.9
平均值=100.4%
, 百拇医药
RSD=3.05%
2.6 样品含量测定
取已干燥、恒重的样品1 g，精密称定，水煎煮3次，每次加水25 mL,第一次煎煮3 h，第二次煎煮2 h，第三次煎煮1 h，合并水煎液.减压浓缩约25 mL，转移至25 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀.取2.5 mL通过Sep-Pak C18预处理柱，分别用水5 mL，30%甲醇10 mL和甲醇5 mL洗脱，甲醇洗脱液转移至5 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度.精密吸取适量注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标计算，结果见表2.表2 西洋参及白参中人参皂苷Rb-1测定结果 药材
产地
人参皂苷Rb1的含量/%，n=3
RSD/%
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西洋参
美国，威斯康星洲
2.64
3.94
吉林农业大学，引进原种
2.14
3.07
吉林，延寿县
2.22
2.38
辽宁，本溪
2.24
1.78
, 百拇医药
加拿大，安大略省
2.70
1.61
人参
黑龙江，伊春
0.65
4.07
吉林，延边
0.30
3.85
吉林，靖宇龙泉乡
0.28
3.57
, 百拇医药
吉林，靖宇二参场
0.72
1.39
黑龙江，牡丹江
0.36
4.81
2.7 样品的定性鉴别
以人参皂苷-Rb-1为基准物，计算各主要人参皂苷的相对保留时间，并将各人参皂苷的相对含量(AX/A总)列于表3.表3 西洋参与白参中各主要人参皂苷的相对保留时间和含量比较
谱峰数
人参皂苷的相对保留时间和含量比较
, 百拇医药
Rr
Rb-1
Rc
Rb2
其它
对照品
5
0.73
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2.77(Rd)
西洋参
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1.22(15)
人参
6＃
5
0.76(10)
1(39)
1.23(24)
1.60(17)
2.60(10)
7＃
4
0.88(16)
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1(41)
1.26(26)
1.67(17)
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1(40)
1.24(24)
1.62(11)
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1(60)
1.26(21)
1.68(11)
10＃
4
0.83(11)
1(43)
1.25(25)
1.66(21)
从表3可以看出，西洋参的谱峰较少，仅为一主峰(Rb-1)、一次峰(Rc)，而人参的谱峰为一主峰(Rb-1)、三次峰(Rf、Rc、Rb2)出峰先后顺序为Rf、Rb-1、Rc、Rb2.各人参皂苷相对含量大小排列顺序为：西洋参Rb-1Rc；人参Rb-1>Rc>Rb2>Rf.根据Rb-1谱峰前有无Rf峰，Rb1相对含量>75%及绝对含量>2%(见表2)可初步确定西洋参中有无掺入人参.
, 百拇医药
2 讨论
a.本文采用水煎煮法提取人参皂苷，水煎液直接通过Sep-Pak C18预处理柱净化处理，简化了手续，提高了效率，方法快速，重现性好.
b.用水煎法提取人参皂苷，提取液中存在大量糖和少量色素，对测定有干扰.曾用水饱和正丁醇多次萃取去除杂质，但效果不明显.后改用Sep-Pak C18固相萃取法，效果良好.
c.以标准品对照，采用高效液相色谱的相对保留时间和相对含量对西洋参及人参提取液中各主要人参单体皂苷定性分析.
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部进口药材标准.1986.16(WS4-16-86)
收稿日期:1998-07-01, http://www.100md.com