AP胶囊毒性和致突变性研究
作者:陈冠敏 姜瑞钗 范福荣 陈韧雄 林健
单位:福建省卫生防疫站 (福州 350001)
关键词:
卫生毒理学杂志990123 AP胶囊是从菇料中分离获得的一种菌制剂,该菌及发酵物含丰富的多糖、氨基酸、亚油酸等不饱和脂肪酸及维生素、微量元素,经动物试验具有调节血脂等多种功能,正作为保健食品首次被开发利用。为此我们进行了整体和离体的毒性试验。
材料与方法
1.样品:AP菌粉与发酵物制成黄白色粉末。
2.试验动物:昆明种小鼠体重22~25g,由福建省动物实验中心提供,断乳SD大鼠购自中科院上海实验动物中心。
3.致突变性试验[1,2]:(1) Ames试验:选用标准的平板掺入法在加与不加S9的条件下进行,实验设3个剂量:100,50,25μg/皿,另设阴性(蒸馏水)、阳性对照组,阳性物:2-AF,2、4、7-TNFone,NaN3,MMC。实验结果以各剂量组平均回变菌落数与自发回变菌落数的比值(MR)来判断。(2) 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验:选用昆明种小鼠每组10只,雌雄各半,受试物设3个剂量:5,10,20mg/kg及阴性(蒸馏水)、阳性(CP100mg/kg)对照组,动物以0.02ml/g灌胃,按常规进行实验。(3) 小鼠精子畸形试验:选用昆明种小鼠每组5只,受试物设3个剂量:5,10,20mg/kg及阴性(蒸馏水)、阳性(CP40mg/kg)对照组,动物以0.02ml/g灌胃,按常规进行实验。
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4.大鼠90天毒性试验:动物按体重随机分成4组,每组20只,雌雄各半,受试物设3个剂量,3.75,7.5,15g/kg,拌入饲料喂养,另设阴性对照组(基础饲料)。平均体重雌鼠为(69.25±4.36)g,雄鼠为(70.27±3.52)g,单笼喂养,自由进食饮水,实验期间观察动物一般状态,每周称体重,记录饲料消耗量。喂养45,90天时,尾静脉采血作血常规及生化指标:血清谷丙转氨酸、尿素氮、总蛋白、白蛋白等测定,实验结束时取肝、肾称重,计算脏器系数,同时取出肝、肾、脾、胃作组织病理学检查。
病理检查几种阳性判断标准:
贲门与胃炎症细胞浸润:指的是在粘膜层中出现炎细胞,其表现为有小堆聚集者方计为阳性。
肝脂变:肝细胞胞浆出现微小空泡直径不到一半者均不计,只要切片中发现肝细胞胞浆空泡直经大于1/2胞核者定肝脂变为阳性(但数量并不重要,即不一定要多少肝细胞大空泡才列为“阳性”)。
, 百拇医药
脾小体数目增生:表现为(1)脾小体数目增多或(2)脾小体出现融合现象。
5.数据处理:用spss软件进行t检验。
结果与讨论
1.致突变性试验:
(1) Ames试验:在加S9和不加S9代谢活化系统的条件下,实验各剂量组的MR值TA97:0.765~1.269,TA98:0.799~1.254,TA100:0.885~1.056,TA102:0.769~1.140,4个指示菌阳性组的MR值:4.003~52.174,受试物各组回变菌落数的MR<2。提示基因突变检测结果为阴性。
(2) 小鼠骨髓微核试验:结果显示阳性对照组微核率高达23.6‰~25.6‰,而各实验组的微核率在0.04‰~1.80‰,与阴性对照组(0.61‰~1.0‰)相比差异无显著性(P>0.05)。
, 百拇医药
(3) 小鼠精子畸形试验:结果显示各剂量组的精子畸形率在1.00%~1.56%,与阴性对照组相近,而阳性对照组的精子畸形率高达6.82%,提示本试验结果为阴性。
2.大鼠毒性试验:
(1) 一般状态观察:实验组喂养的大鼠毛质白,有光泽,一般状态与阴性对照组比较无区别,也无死亡现象。
(2) 动物血常规检验:实验组和对照组45,90天动物血红蛋白、红细胞、白细胞分类均在正常值范围内,无明显差异(P>0.05)。
(3) 动物血清生化学检验:各组动物两次采血所测的总蛋白、白蛋白、球蛋白、白/球比、血糖、胆固醇、肌肝等均在正常值范围,且差异无显著性(P>0.05)。实验组动物谷丙转氨酶、谷草转氨酶指标均接近或低于阴性对照组,结果见表1。
表1 大鼠血清ALT、AST检测结果(±s)(U/L) 剂量
, 百拇医药
g/kg
ALT(1)
AST(1)
ALT(2)
AST(2)
雌
雄
雌
雄
雌
雄
雌
雄
, 百拇医药 0
47.60±5.23
68.30±9.79
198.60±37.13
221.80±29.15
63.60±8.76
84.84±8.29
198.10±38.29
222.3±30.10
3.75
45.10±5.58
60.10±6.84
, 百拇医药
181.10±31.85
207.70±32.74
68.10±15.77
70.10±6.44
194.10±25.32
218.9±22.79
7.50
42.80±2.57
56.40±4.35
175.40±21.93
210.50±19.40
, http://www.100md.com
64.80±5.67
75.80±5.57
184.50±26.61
220.3±33.72
15.0
43.20±4.18
67.90±5.95
173.00±33.82
199.90±23.33
68.90±11.52
77.10±8.72
, http://www.100md.com
187.60±41.29
204.7±31.30
表中数字代表出现阳性的动物数
(4) 内脏观察及脏器系数:实验组与对照组动物心、肝、肾、脾、胃等内脏肉眼观察均正常。3个剂量组的脏器系数与阴性对照组相比均差异无显著性(P>0.05)。
(5) 组织病理学检查:镜检可知实验组与阴性对照组动物的肝、肾、胃、脾变经近于相仿,且均无重要病理变化。实验组肝脏、肾脏指标还优于对照组(见表2)各组食道粘膜均无炎细胞浸润,而大多数动物贲门部胃粘膜出现轻度慢性炎细胞浸润。各组动物肝小叶结构完整,无纤维分离,未出现肝细胞浊肿、坏死等现象,各组少数动物虽出现轻度肝细胞脂变,但给药组动物比阴性对照组出现的例数少,且肝窦细胞均无增生。各组动物肾小球毛细血管、肾间质虽呈轻度充血,但肾小球无纤维化现象,肾曲管上皮呈轻度浊肿,对照组与给药低组动物均出现管型或钙化性结石,而中、高组却未出现(见表2)
, 百拇医药
表2 大鼠病理检查结果
剂量g/kg
肝细胞脂变
肝汇管区炎细胞浸润
肾曲管上皮管型或结石
肾孟炎
脾小体增生
雌
雄
雌
雄
雌
雄
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雌
雄
雌
雄
0
5
3
4
1
1
1
3
3
4
, 百拇医药
8
3.75
1
1
4
0
1
1
3
2
7
8
7.50
3
, 百拇医药
1
1
0
0
0
1
2
5
2
15.0
1
0
2
1
, 百拇医药
0
1
2
1
2
5
从整体和离体试验结果可知:AP胶囊对体细胞及生殖细胞的遗传物质无致突变作用、对基因无碱基对置换和移码突变作用。毒性试验结果表明:AP胶囊对动物无毒副作用,建议可作为新资源食品进行开发利用。
参考文献
1.陈祖辉,等.环境致癌物生物系短期试验.北京:人民卫生出版社,1975,21~25.
2.黄幸舒,等.环境化学物致突变致畸致癌试验方法.杭州:浙江科学技术出版社,1985,13~46.216~235.264~270.
(修回日期 1998年5月), 百拇医药
单位:福建省卫生防疫站 (福州 350001)
关键词:
卫生毒理学杂志990123 AP胶囊是从菇料中分离获得的一种菌制剂,该菌及发酵物含丰富的多糖、氨基酸、亚油酸等不饱和脂肪酸及维生素、微量元素,经动物试验具有调节血脂等多种功能,正作为保健食品首次被开发利用。为此我们进行了整体和离体的毒性试验。
材料与方法
1.样品:AP菌粉与发酵物制成黄白色粉末。
2.试验动物:昆明种小鼠体重22~25g,由福建省动物实验中心提供,断乳SD大鼠购自中科院上海实验动物中心。
3.致突变性试验[1,2]:(1) Ames试验:选用标准的平板掺入法在加与不加S9的条件下进行,实验设3个剂量:100,50,25μg/皿,另设阴性(蒸馏水)、阳性对照组,阳性物:2-AF,2、4、7-TNFone,NaN3,MMC。实验结果以各剂量组平均回变菌落数与自发回变菌落数的比值(MR)来判断。(2) 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验:选用昆明种小鼠每组10只,雌雄各半,受试物设3个剂量:5,10,20mg/kg及阴性(蒸馏水)、阳性(CP100mg/kg)对照组,动物以0.02ml/g灌胃,按常规进行实验。(3) 小鼠精子畸形试验:选用昆明种小鼠每组5只,受试物设3个剂量:5,10,20mg/kg及阴性(蒸馏水)、阳性(CP40mg/kg)对照组,动物以0.02ml/g灌胃,按常规进行实验。
, http://www.100md.com
4.大鼠90天毒性试验:动物按体重随机分成4组,每组20只,雌雄各半,受试物设3个剂量,3.75,7.5,15g/kg,拌入饲料喂养,另设阴性对照组(基础饲料)。平均体重雌鼠为(69.25±4.36)g,雄鼠为(70.27±3.52)g,单笼喂养,自由进食饮水,实验期间观察动物一般状态,每周称体重,记录饲料消耗量。喂养45,90天时,尾静脉采血作血常规及生化指标:血清谷丙转氨酸、尿素氮、总蛋白、白蛋白等测定,实验结束时取肝、肾称重,计算脏器系数,同时取出肝、肾、脾、胃作组织病理学检查。
病理检查几种阳性判断标准:
贲门与胃炎症细胞浸润:指的是在粘膜层中出现炎细胞,其表现为有小堆聚集者方计为阳性。
肝脂变:肝细胞胞浆出现微小空泡直径不到一半者均不计,只要切片中发现肝细胞胞浆空泡直经大于1/2胞核者定肝脂变为阳性(但数量并不重要,即不一定要多少肝细胞大空泡才列为“阳性”)。
, 百拇医药
脾小体数目增生:表现为(1)脾小体数目增多或(2)脾小体出现融合现象。
5.数据处理:用spss软件进行t检验。
结果与讨论
1.致突变性试验:
(1) Ames试验:在加S9和不加S9代谢活化系统的条件下,实验各剂量组的MR值TA97:0.765~1.269,TA98:0.799~1.254,TA100:0.885~1.056,TA102:0.769~1.140,4个指示菌阳性组的MR值:4.003~52.174,受试物各组回变菌落数的MR<2。提示基因突变检测结果为阴性。
(2) 小鼠骨髓微核试验:结果显示阳性对照组微核率高达23.6‰~25.6‰,而各实验组的微核率在0.04‰~1.80‰,与阴性对照组(0.61‰~1.0‰)相比差异无显著性(P>0.05)。
, 百拇医药
(3) 小鼠精子畸形试验:结果显示各剂量组的精子畸形率在1.00%~1.56%,与阴性对照组相近,而阳性对照组的精子畸形率高达6.82%,提示本试验结果为阴性。
2.大鼠毒性试验:
(1) 一般状态观察:实验组喂养的大鼠毛质白,有光泽,一般状态与阴性对照组比较无区别,也无死亡现象。
(2) 动物血常规检验:实验组和对照组45,90天动物血红蛋白、红细胞、白细胞分类均在正常值范围内,无明显差异(P>0.05)。
(3) 动物血清生化学检验:各组动物两次采血所测的总蛋白、白蛋白、球蛋白、白/球比、血糖、胆固醇、肌肝等均在正常值范围,且差异无显著性(P>0.05)。实验组动物谷丙转氨酶、谷草转氨酶指标均接近或低于阴性对照组,结果见表1。
表1 大鼠血清ALT、AST检测结果(±s)(U/L) 剂量
, 百拇医药
g/kg
ALT(1)
AST(1)
ALT(2)
AST(2)
雌
雄
雌
雄
雌
雄
雌
雄
, 百拇医药 0
47.60±5.23
68.30±9.79
198.60±37.13
221.80±29.15
63.60±8.76
84.84±8.29
198.10±38.29
222.3±30.10
3.75
45.10±5.58
60.10±6.84
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181.10±31.85
207.70±32.74
68.10±15.77
70.10±6.44
194.10±25.32
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42.80±2.57
56.40±4.35
175.40±21.93
210.50±19.40
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64.80±5.67
75.80±5.57
184.50±26.61
220.3±33.72
15.0
43.20±4.18
67.90±5.95
173.00±33.82
199.90±23.33
68.90±11.52
77.10±8.72
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187.60±41.29
204.7±31.30
表中数字代表出现阳性的动物数
(4) 内脏观察及脏器系数:实验组与对照组动物心、肝、肾、脾、胃等内脏肉眼观察均正常。3个剂量组的脏器系数与阴性对照组相比均差异无显著性(P>0.05)。
(5) 组织病理学检查:镜检可知实验组与阴性对照组动物的肝、肾、胃、脾变经近于相仿,且均无重要病理变化。实验组肝脏、肾脏指标还优于对照组(见表2)各组食道粘膜均无炎细胞浸润,而大多数动物贲门部胃粘膜出现轻度慢性炎细胞浸润。各组动物肝小叶结构完整,无纤维分离,未出现肝细胞浊肿、坏死等现象,各组少数动物虽出现轻度肝细胞脂变,但给药组动物比阴性对照组出现的例数少,且肝窦细胞均无增生。各组动物肾小球毛细血管、肾间质虽呈轻度充血,但肾小球无纤维化现象,肾曲管上皮呈轻度浊肿,对照组与给药低组动物均出现管型或钙化性结石,而中、高组却未出现(见表2)
, 百拇医药
表2 大鼠病理检查结果
剂量g/kg
肝细胞脂变
肝汇管区炎细胞浸润
肾曲管上皮管型或结石
肾孟炎
脾小体增生
雌
雄
雌
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雌
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从整体和离体试验结果可知:AP胶囊对体细胞及生殖细胞的遗传物质无致突变作用、对基因无碱基对置换和移码突变作用。毒性试验结果表明:AP胶囊对动物无毒副作用,建议可作为新资源食品进行开发利用。
参考文献
1.陈祖辉,等.环境致癌物生物系短期试验.北京:人民卫生出版社,1975,21~25.
2.黄幸舒,等.环境化学物致突变致畸致癌试验方法.杭州:浙江科学技术出版社,1985,13~46.216~235.264~270.
(修回日期 1998年5月), 百拇医药