妇科恶性肿瘤PCNA与P53表达的临床意义
作者：张彦娜 张昌卿 李孟达 刘继红 黄 欣
单位：中山医科大学肿瘤防治中心(510060)
关键词：P53；PCNA；妇科肿瘤；预后
广东医学990107 【摘要】 目的 检测妇科恶性肿瘤中P53及PCNA的表达，观察此两种蛋白在妇科恶性肿瘤中的临床意义。方法 用抗P53以及抗PCNA单克隆抗体经LSAB免疫组化法检测妇科恶性肿瘤27例组织标本。结果 当肿瘤组织无P53突变时PCNA多为弱阳性表达；多数病例无转移；当肿瘤组织含有P53突变时，PCNA多为强阳性表达，且多数病例发生转移。结论 联合检测PCNA、P53蛋白在肿瘤组织中表达，对判断妇科恶性肿瘤的预后有重要参考价值。
The clinical significance of expression of PCNA and P53 in the gynecological malignant tumors Zhang Yanna,Zhang Changqing,Li Mengda,et al.Cancer Center,Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510060
, 百拇医药
【Abstract】 Objectives Detecting expression of PCNA and P53 to observe the clinical significance of these two proteins on the gynecological malignant tumors.Methods With anti-PCNA and anti-P53 monoclonal antibody by LSAB immuno-histochemical method,the 27 histo-specimens of gynecological malignant tumors were exanined.Results PCNA were expressed weakly positive in tumors without P53 mutation and there were no metastatis existing mostly.Conclusion The results suggest that the examination of PCNA and P53 expression on the gynecological malignant tumors might have important significance on the prognosis.
, 百拇医药
【Key words】 P53 PCNA Expression Gynecolgical tumors Prognosis
本文通过检测妇科恶性肿瘤中P53及PCNA的表达，以观察此两种蛋白对妇科恶性肿瘤的临床意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 1994年6月～1995年8月，手术切除的妇科恶性肿瘤 27例，年龄21～70岁，其中宫颈癌7例，宫内膜癌4例，卵巢癌13例，绒癌2例，阴道鳞癌1例。
1.2 实验方法 标本经福尔马林固定，石蜡包埋，用抗P53单克隆抗体(DO-7)和抗PCNA单克隆抗体(Pc-10)，LSAB免疫组化方法(Dako，LASB试剂盒)，P53在免疫组化检测前，脱蜡切片必需作微波处理[1]。本组PCNA指数和P53表达标准为：在160倍镜下，计算8 ～10个随机的视野中核阳性细胞所占的百分数，PCNA核阳性细胞分为四级：“+”为阳性细胞少于25%，“++”为阳性细胞占25%～50%，“+++”为阳性细胞数占51%～75%，“++++”为阳性细胞多于75%；P53核阳性细胞分为四级：“-”无阳性细胞，“+”为阳性细胞少于30%，“++”为阳性细胞占31%～70%，“+++”为阳性细胞数多于70%。
, 百拇医药
1.3 统计学处理 Fisher精确检验法。
2 结果
2.1 PCNA强阳性(++或以上)及弱阳性(+)与病理分级及转移的关系 见表1。
其中病理高分Ⅰ组，中分化为Ⅱ级，低分化为Ⅲ～Ⅳ级。由此可见，PCNA弱阳性，多数病例无转移，PCNA强阳性或极强阳性，多数病例发生转移(P<0.05)；PCNA弱阳性时，病理以中高分化居多，反之病理以低分化为主(P<0.05)。
2.2 PCNA及P53联合表达 见表2。
表1 PCNA强阳性及弱阳性与病理分级及转移的关系 PCNA
病理分级
转移情况
, 百拇医药
低
中
高
有
无
+
1
6
4
1
10
++～++++
9
6
, 百拇医药
1
12
4
表2 PCNA及P53联合表达 P53
PCNA
转移情况
+++～++++
有
无
-
8
3
1
, 百拇医药
10
+
3
13
12
4
由此可见，肿瘤组织无P53突变时，PCNA多为弱阳性表达，当肿瘤组织有P53突变时，PCNA多为强阳性表达(P<0.05)；肿瘤组织无P53突变时，多数病例无转移，反之，多数病例发生转移(P<0.05)。3 讨论
PCNA是一种分子量为36 kD的酸性核内蛋白质，其实质上是DNA多聚酶δ的辅助蛋白，起调节DNA多聚酶δ活性的作用[2]。PCNA随细胞增殖周期的不同而变化。G1后期开始增加，S期达高峰，G2、M期又降低，其变化与DNA合成一致[3]，这说明PCNA参于DNA合成，而DNA的合成又是细胞尤其是肿瘤细胞分裂增殖的必要条件。因此PCNA可用来评价细胞的增殖状态。PCNA指数越高，DNA的合成越活跃，细胞的分裂增殖越快，肿瘤的生长也越快。我们共检测了27例妇科恶性肿瘤的组织标本，PCNA皆为阳性表达，且细胞的分化越差，PCNA的阳性程度越高。
, 百拇医药
PCNA作为细胞增殖力学的一个重要参数，在肿瘤研究方面已广泛应用。国外学者对全身不同部位的癌肿进行PCNA免疫组化的广泛研究，多数认为PCNA与肿瘤病理分级、临床分期、淋巴结或脏器转移及预后有关[4，5]。从本实验亦可看出，PCNA弱阳性(+)，多数病例无转移(10/11)，病理以中高分化为主(10/11)；而PCNA强阳性或极强阳性，多数病例发生转移(12/16)，病理以低分化居多(9/16)。
上皮组织癌变是一个渐进性过程，在发展为恶性肿瘤之前，常经历持续的癌前病变。例如子宫颈癌的发生发展目前认为是一个渐进的过程，由子宫颈的不典型增生(轻中重)原位癌旱期浸润癌浸润癌。但在不典型增生及原位癌间，诊断有时存在一定的困难，且受一定的主观因素影响。PCNA的研究为诊断宫颈肿瘤的各级发展提供了一个量的指标。Kobayashi[6]检测了宫颈上皮异型增生和原位癌的PCNA指数后发现，轻度异型增生时为(38.5±4.6)%，中度异型增生(47.1±3.4)%，重度异型增生(45.1±4.5)%，而原位癌为(63.5±3.6)%，后两者差异显著。我们检测了7例宫颈鳞癌、1例阴道鳞癌的组织标本，其中PCNA极强阳性(++++)6例，强阳性(+++)1例，阳性(++)1例，且多数(6/8)为低分化鳞癌。
, 百拇医药
PCNA单抗原位检测能同时观察组织形态，还可以与其它肿瘤标志物结合研究肿瘤标志物与增殖活性、细胞周期的关系。目前与PCNA结合研究较多的是P53。当DNA损伤时，如放疗或化疗引起的DNA链断裂、缺氧、病毒感染等诱导产生P53蛋白，其在转录水平激活细胞周期抑制物P21 WAF 1/CLP1的表达，后者可限制PCNA及PCNA-DNA多聚酶δ的活性而导致S期阻滞[7]，当P53发生突变时即失去这种抑制能力，并促进肿瘤细胞增生。Wiethege认为P53突变型应全部在PCNA阳性细胞核内[8]。本实验亦可看出，P53阴性时，即肿瘤组织无P53突变时，PCNA多为弱阳性表达(8/11)，多数病例无转移(10/11)；当肿瘤组织存在P53突变时，PCNA多为强阳性表达(13/16)，且多数病例发生转移(12/16)。提示联合检测PCNA、P53蛋白在肿瘤组织中的表达，对判断肿瘤的临床分期及预后有重要参考价值。
在本实验中，我们还发现在子宫内膜癌中，P53突变率不高(0/4)，PCNA强阳性表达率亦不高(1/4)，这是否可认为与子宫内膜癌的生物学行为有关，由于我们病例数少，有待进一步研究证实。
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 冯凯涛，张昌卿，张锦霞，等.介绍一种较佳的显示P53蛋白的免疫组化方法.诊断病理杂志，1994，1(1)：50
2 Prelich G,Stillman B.Coordinated leading and lagging strand synthesis during SV40 DNA replication in vitro requires PCNA.Cell,1988,53(1):117
3 Bravo R, Frank R, Blundell PA,et al.Cyclin/PCNA is the auxiliary protein of DNA polimerase-delta.Nature,1987,326(6 112):515
4 Kawai T,Suzuki M,Kono S,et al.Proliferating cell nuclear antigen and Ki-67 in lung carcinoma.Correlation with DNA flow cytometric analysis. Cancer,1994,74(9):2468
, 百拇医药
5 Ng IO,Lai EC,Fan ST,et al.Prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen expression in hepatocellular carcinoma.Cancer,1994,73(9):2268
6 Kobayashi I.The Proliferative activity in dysplasia and carcinoma in situ of the uterine cervix analyzed by proliferating cell nuclear antigen immunostaining and silver-bindingargyrophilic nucleolar organizer region staining.Hum Patho,1994,25(2):198
7 Victor E,Velculescu,Wafik S,et al.Biological and clinical importance of the P53 tumor suppression gene.Clinical Chemistry,1996,42(6):858
8 Wiethege T,Voss B,Muller KM.P53 accumulation and proliferating-cellnuclear antigen expression in human lung cancer.J Cancer Res Clin Oncol,1995,121(6):371, 百拇医药
单位：中山医科大学肿瘤防治中心(510060)
关键词：P53；PCNA；妇科肿瘤；预后
广东医学990107 【摘要】 目的 检测妇科恶性肿瘤中P53及PCNA的表达，观察此两种蛋白在妇科恶性肿瘤中的临床意义。方法 用抗P53以及抗PCNA单克隆抗体经LSAB免疫组化法检测妇科恶性肿瘤27例组织标本。结果 当肿瘤组织无P53突变时PCNA多为弱阳性表达；多数病例无转移；当肿瘤组织含有P53突变时，PCNA多为强阳性表达，且多数病例发生转移。结论 联合检测PCNA、P53蛋白在肿瘤组织中表达，对判断妇科恶性肿瘤的预后有重要参考价值。
The clinical significance of expression of PCNA and P53 in the gynecological malignant tumors Zhang Yanna,Zhang Changqing,Li Mengda,et al.Cancer Center,Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510060
, 百拇医药
【Abstract】 Objectives Detecting expression of PCNA and P53 to observe the clinical significance of these two proteins on the gynecological malignant tumors.Methods With anti-PCNA and anti-P53 monoclonal antibody by LSAB immuno-histochemical method,the 27 histo-specimens of gynecological malignant tumors were exanined.Results PCNA were expressed weakly positive in tumors without P53 mutation and there were no metastatis existing mostly.Conclusion The results suggest that the examination of PCNA and P53 expression on the gynecological malignant tumors might have important significance on the prognosis.
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【Key words】 P53 PCNA Expression Gynecolgical tumors Prognosis
本文通过检测妇科恶性肿瘤中P53及PCNA的表达，以观察此两种蛋白对妇科恶性肿瘤的临床意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 1994年6月～1995年8月，手术切除的妇科恶性肿瘤 27例，年龄21～70岁，其中宫颈癌7例，宫内膜癌4例，卵巢癌13例，绒癌2例，阴道鳞癌1例。
1.2 实验方法 标本经福尔马林固定，石蜡包埋，用抗P53单克隆抗体(DO-7)和抗PCNA单克隆抗体(Pc-10)，LSAB免疫组化方法(Dako，LASB试剂盒)，P53在免疫组化检测前，脱蜡切片必需作微波处理[1]。本组PCNA指数和P53表达标准为：在160倍镜下，计算8 ～10个随机的视野中核阳性细胞所占的百分数，PCNA核阳性细胞分为四级：“+”为阳性细胞少于25%，“++”为阳性细胞占25%～50%，“+++”为阳性细胞数占51%～75%，“++++”为阳性细胞多于75%；P53核阳性细胞分为四级：“-”无阳性细胞，“+”为阳性细胞少于30%，“++”为阳性细胞占31%～70%，“+++”为阳性细胞数多于70%。
, 百拇医药
1.3 统计学处理 Fisher精确检验法。
2 结果
2.1 PCNA强阳性(++或以上)及弱阳性(+)与病理分级及转移的关系 见表1。
其中病理高分Ⅰ组，中分化为Ⅱ级，低分化为Ⅲ～Ⅳ级。由此可见，PCNA弱阳性，多数病例无转移，PCNA强阳性或极强阳性，多数病例发生转移(P<0.05)；PCNA弱阳性时，病理以中高分化居多，反之病理以低分化为主(P<0.05)。
2.2 PCNA及P53联合表达 见表2。
表1 PCNA强阳性及弱阳性与病理分级及转移的关系 PCNA
病理分级
转移情况
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低
中
高
有
无
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1
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4
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++～++++
9
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表2 PCNA及P53联合表达 P53
PCNA
转移情况
+++～++++
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由此可见，肿瘤组织无P53突变时，PCNA多为弱阳性表达，当肿瘤组织有P53突变时，PCNA多为强阳性表达(P<0.05)；肿瘤组织无P53突变时，多数病例无转移，反之，多数病例发生转移(P<0.05)。3 讨论
PCNA是一种分子量为36 kD的酸性核内蛋白质，其实质上是DNA多聚酶δ的辅助蛋白，起调节DNA多聚酶δ活性的作用[2]。PCNA随细胞增殖周期的不同而变化。G1后期开始增加，S期达高峰，G2、M期又降低，其变化与DNA合成一致[3]，这说明PCNA参于DNA合成，而DNA的合成又是细胞尤其是肿瘤细胞分裂增殖的必要条件。因此PCNA可用来评价细胞的增殖状态。PCNA指数越高，DNA的合成越活跃，细胞的分裂增殖越快，肿瘤的生长也越快。我们共检测了27例妇科恶性肿瘤的组织标本，PCNA皆为阳性表达，且细胞的分化越差，PCNA的阳性程度越高。
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PCNA作为细胞增殖力学的一个重要参数，在肿瘤研究方面已广泛应用。国外学者对全身不同部位的癌肿进行PCNA免疫组化的广泛研究，多数认为PCNA与肿瘤病理分级、临床分期、淋巴结或脏器转移及预后有关[4，5]。从本实验亦可看出，PCNA弱阳性(+)，多数病例无转移(10/11)，病理以中高分化为主(10/11)；而PCNA强阳性或极强阳性，多数病例发生转移(12/16)，病理以低分化居多(9/16)。
上皮组织癌变是一个渐进性过程，在发展为恶性肿瘤之前，常经历持续的癌前病变。例如子宫颈癌的发生发展目前认为是一个渐进的过程，由子宫颈的不典型增生(轻中重)原位癌旱期浸润癌浸润癌。但在不典型增生及原位癌间，诊断有时存在一定的困难，且受一定的主观因素影响。PCNA的研究为诊断宫颈肿瘤的各级发展提供了一个量的指标。Kobayashi[6]检测了宫颈上皮异型增生和原位癌的PCNA指数后发现，轻度异型增生时为(38.5±4.6)%，中度异型增生(47.1±3.4)%，重度异型增生(45.1±4.5)%，而原位癌为(63.5±3.6)%，后两者差异显著。我们检测了7例宫颈鳞癌、1例阴道鳞癌的组织标本，其中PCNA极强阳性(++++)6例，强阳性(+++)1例，阳性(++)1例，且多数(6/8)为低分化鳞癌。
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PCNA单抗原位检测能同时观察组织形态，还可以与其它肿瘤标志物结合研究肿瘤标志物与增殖活性、细胞周期的关系。目前与PCNA结合研究较多的是P53。当DNA损伤时，如放疗或化疗引起的DNA链断裂、缺氧、病毒感染等诱导产生P53蛋白，其在转录水平激活细胞周期抑制物P21 WAF 1/CLP1的表达，后者可限制PCNA及PCNA-DNA多聚酶δ的活性而导致S期阻滞[7]，当P53发生突变时即失去这种抑制能力，并促进肿瘤细胞增生。Wiethege认为P53突变型应全部在PCNA阳性细胞核内[8]。本实验亦可看出，P53阴性时，即肿瘤组织无P53突变时，PCNA多为弱阳性表达(8/11)，多数病例无转移(10/11)；当肿瘤组织存在P53突变时，PCNA多为强阳性表达(13/16)，且多数病例发生转移(12/16)。提示联合检测PCNA、P53蛋白在肿瘤组织中的表达，对判断肿瘤的临床分期及预后有重要参考价值。
在本实验中，我们还发现在子宫内膜癌中，P53突变率不高(0/4)，PCNA强阳性表达率亦不高(1/4)，这是否可认为与子宫内膜癌的生物学行为有关，由于我们病例数少，有待进一步研究证实。
, http://www.100md.com
4 参考文献
1 冯凯涛，张昌卿，张锦霞，等.介绍一种较佳的显示P53蛋白的免疫组化方法.诊断病理杂志，1994，1(1)：50
2 Prelich G,Stillman B.Coordinated leading and lagging strand synthesis during SV40 DNA replication in vitro requires PCNA.Cell,1988,53(1):117
3 Bravo R, Frank R, Blundell PA,et al.Cyclin/PCNA is the auxiliary protein of DNA polimerase-delta.Nature,1987,326(6 112):515
4 Kawai T,Suzuki M,Kono S,et al.Proliferating cell nuclear antigen and Ki-67 in lung carcinoma.Correlation with DNA flow cytometric analysis. Cancer,1994,74(9):2468
, 百拇医药
5 Ng IO,Lai EC,Fan ST,et al.Prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen expression in hepatocellular carcinoma.Cancer,1994,73(9):2268
6 Kobayashi I.The Proliferative activity in dysplasia and carcinoma in situ of the uterine cervix analyzed by proliferating cell nuclear antigen immunostaining and silver-bindingargyrophilic nucleolar organizer region staining.Hum Patho,1994,25(2):198
7 Victor E,Velculescu,Wafik S,et al.Biological and clinical importance of the P53 tumor suppression gene.Clinical Chemistry,1996,42(6):858
8 Wiethege T,Voss B,Muller KM.P53 accumulation and proliferating-cellnuclear antigen expression in human lung cancer.J Cancer Res Clin Oncol,1995,121(6):371, 百拇医药