精神分裂症脑脊液中相对分子质量130 ku蛋白质含量增加的免疫学及临床意义
作者：曾丽萍 温进坤 魏素珍 冯方波
单位：
关键词：精神分裂症/脑脊液；免疫球蛋白同种异型/脑脊液；印迹法，蛋白质/方法；电泳，聚丙烯酰胺凝胶/方法
河北医科大学学报990103
摘要 目的 研究精神分裂症脑脊液中存在的特异性IgG抗体。方法 应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白印迹(Western blot)技术对精神分裂症脑脊液与对照脑脊液同时进行检查。结果 精神分裂症脑脊液中相对分子质量130 ku的蛋白质含量显著增加,在蛋白印迹分析中发现此蛋白质可与羊抗人IgG抗体发生免疫结合反应。结论 提示该蛋白质组分可能是一种与IgG相关的蛋白质。
中图号 R749.3
SIGNIFICANCE OF CONTENT INCREASE OF RELATIVE MOLECULAR MASS 130 ku PROTEIN IN THE CEREBROSPINAL FLUID OF SCHIZOPHRENIA
, 百拇医药
Zeng Liping Wen Jinkun Wei Suzhen Feng Fangbo
The 261st Hospital of PLA (Beijing 100094)
ABSTRACT Objective To study specific IgG in cerebrospinal fluid(CSF) of schizophreniac patients.Methods The CSF from schizophreniac patients and control subjects was analysed with SDS polyacryl amide gel electrophoresis and Western blot.Results The content of relative molecular mass 130 ku protein increased significantly in the CSF of schizophrenia.Western blot analysis showed that this protein could produce immune binding reaction with the sheep anti-human IgG-HRP.Conclusion This protein was probably associated with IgG.
, 百拇医药
MeSH schizophrenia/csf;immunoglobulin allotypes/csf;blotting,Western/methods
electrophoresis,polyacrylamide gel/methods
精神分裂症多发于青少年,约占整个精神病的70%。由于其病因及发病机理尚不十分清楚,临床诊断无客观的生物学指标,目前还只能沿用传统的诊治方法。本文根据精神分裂症自身免疫假说〔1〕,采用SDS-聚丙酰胺凝胶电泳和蛋白印迹(Wester blot)技术直接检查了精神分裂症患者脑脊液和对照脑脊液之间的差异。
1 材料与方法
1.1 研究对象:精神分裂症患者脑脊液30份,按中国精神疾病分类方案与诊断标准第2版修订本(CCMD-Ⅱ-R)精神分裂症诊断标准筛选病例后常规采取脑脊液,-70℃保存。患者病程0.5～20年。选用无精神神经系统疾病及检查正常的脑脊液20份作为对照。
, 百拇医药
1.2 试剂:丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、硝酸纤维素膜、牛血清白蛋白、低相对分子质量标准蛋白、标准人IgG、羊抗人IgG/HRP均购自华美生物工程公司,其它试剂为国产分析纯。
1.3 标本的制备:采用冷冻浓缩法将精神分裂症混合脑脊液和对照混合脑脊液浓缩3倍,将个人份精神分裂症脑脊液和个人份对照脑脊液浓缩3倍。以低相对分子质量标准蛋白和标准人IgG作为标准,分别取浓缩的精神分裂症和对照的混合脑脊液,未浓缩的精神分裂症和对照的混合脑脊液,浓缩的精神分裂症和对照的个人份脑脊液,未浓缩的精神分裂症和对照的个人份脑脊液进行检测。
1.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳:分离胶浓度为10%,浓缩胶浓度为5%。电泳条件为稳压60 V,时间6 h。
1.5 蛋白印迹:蛋白印迹转移电泳按Towbin法进行〔2〕,90 mA转移4 h。免疫酶标显色过程如下:用3%牛血清白蛋白封闭电泳转移后的硝酸纤维素膜,37℃温箱放置过夜后,用0.05%Tween 20-PBS洗膜3次,每次5 min。用羊抗人IgG(500～1 000倍稀释)对膜进行封闭,37℃温箱孵育1 h,0.05%Tween 20-PBS洗膜4次,每次10 min。最后以二氨基联苯胺作底物显色5～15 min,双蒸水终止反应,照相保存。
, 百拇医药
2 结果
以上标本同时进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,经考马斯亮蓝R250染色显示,浓缩与未浓缩的精神分裂症混合脑脊液在相对分子质量130 ku处出现的电泳带,其深浅明显高于浓缩与未浓缩的对照混合脑脊液,在浓缩的脑脊液中尤为显著;在个人份脑脊液中,浓缩后的精神分裂症脑脊液有26份在130 ku处出现此带,4份未检出。个人份对照脑脊液浓缩后有14份可见很浅的带,6份未检出。而未浓缩的精神分裂症和未浓缩的对照个人份脑脊液中均未发现此带。在蛋白印迹中,此带可与羊抗人IgG抗体发生免疫结合反应,提示该成份系一种IgG样蛋白质。精神分裂症患者脑脊液在免疫印迹反应时所呈现的条带深于对照脑脊液,与考马斯亮蓝染色结果相一致。
3 讨论
随着免疫学的发展,许多学者发现精神分裂症患者存在细胞免疫和体液免疫障碍,从而认为精神分裂症与免疫病理损伤有密切关系。作者以往的研究发现〔3〕,用人胎脑蛋白和兔脑蛋白提取液与精神分裂症患者血清和脑脊液反应,出现IgG与脑蛋白特异性结合的条带,表明患者血清和脑脊液中存在针对某种脑蛋白的特异性IgG。而在患者脑脊液中也证实了即有血清中存在的IgG抗脑抗体,又有血清中没有的IgG抗脑抗体,这可能是血循环中的抗脑抗体透过通透性增加的血脑屏障而进入脑内,而后者则直接在脑组织中产生,因此抗脑抗体就很容易与中枢神经系统接触而产生损伤效应,目前已肯定免疫系统可在脑组织内发挥完整的效应〔4,5〕。本文继此研究之后又利用SDS-聚丙烯酰胺的高分辨率和蛋白印迹的高灵敏度检查精神分裂症脑脊液与对照脑脊液之间的异同,希望能直接地找出精神分裂症脑脊液中存在的特异抗体。用第2抗体直接与经电泳分离的脑脊液蛋白进行反应,多次重复试验结果表明,精神分裂症脑脊液与对照脑脊液之间的主要区别为130 ku蛋白质在质量上的明显不同,其它未见显著差异。130 ku蛋白质是IgG的一种亚类还是与IgG相关的其它蛋白质,尚有待进一步研究证实。130 ku蛋白质在精神分裂症脑脊液中的增多,提示精神分裂症患者体内可能存在某种脑组织来源的蛋白的异常刺激,抗体识别特异性脑蛋白抗原并产生自身免疫反应的免疫学意义和其它临床意义,有待进一步探讨。
, 百拇医药
参考文献
1.Коляскснна.ти идр.Совремнние лодохоⅡbⅠкнзучению иммуннтетя лрн uIнзофрнии вестн.Амн СССР,1979,7:76
2.Towbin H,Staehelin T,Gordon J.Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gel to nitrocellulose sheets procedure and some applications.Proc Natl Acad Sci USA,1979,76(9):4350
3.冯方波,王苏生,刘诚,等.精神分裂症患者IgG与脑蛋白的结合特异性.中华医学杂志,1987,67(11):603
4.Jankovic BD,Jakulic S,Horvat J.Schizophrenia and other psychiatric diseases:evidence for neurotissue hypersensitivity.Clin Exp Immunol,1980,40(3):515
5.Fontana A,Frei K,Bodmer S,et al.Immune-mediated encephalitis:on the role of antigen-presenting cells in brain tissue.Immunological Review,1987,100:185
(1997-12-31 收稿), 百拇医药
单位：
关键词：精神分裂症/脑脊液；免疫球蛋白同种异型/脑脊液；印迹法，蛋白质/方法；电泳，聚丙烯酰胺凝胶/方法
河北医科大学学报990103
摘要 目的 研究精神分裂症脑脊液中存在的特异性IgG抗体。方法 应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白印迹(Western blot)技术对精神分裂症脑脊液与对照脑脊液同时进行检查。结果 精神分裂症脑脊液中相对分子质量130 ku的蛋白质含量显著增加,在蛋白印迹分析中发现此蛋白质可与羊抗人IgG抗体发生免疫结合反应。结论 提示该蛋白质组分可能是一种与IgG相关的蛋白质。
中图号 R749.3
SIGNIFICANCE OF CONTENT INCREASE OF RELATIVE MOLECULAR MASS 130 ku PROTEIN IN THE CEREBROSPINAL FLUID OF SCHIZOPHRENIA
, 百拇医药
Zeng Liping Wen Jinkun Wei Suzhen Feng Fangbo
The 261st Hospital of PLA (Beijing 100094)
ABSTRACT Objective To study specific IgG in cerebrospinal fluid(CSF) of schizophreniac patients.Methods The CSF from schizophreniac patients and control subjects was analysed with SDS polyacryl amide gel electrophoresis and Western blot.Results The content of relative molecular mass 130 ku protein increased significantly in the CSF of schizophrenia.Western blot analysis showed that this protein could produce immune binding reaction with the sheep anti-human IgG-HRP.Conclusion This protein was probably associated with IgG.
, 百拇医药
MeSH schizophrenia/csf;immunoglobulin allotypes/csf;blotting,Western/methods
electrophoresis,polyacrylamide gel/methods
精神分裂症多发于青少年,约占整个精神病的70%。由于其病因及发病机理尚不十分清楚,临床诊断无客观的生物学指标,目前还只能沿用传统的诊治方法。本文根据精神分裂症自身免疫假说〔1〕,采用SDS-聚丙酰胺凝胶电泳和蛋白印迹(Wester blot)技术直接检查了精神分裂症患者脑脊液和对照脑脊液之间的差异。
1 材料与方法
1.1 研究对象:精神分裂症患者脑脊液30份,按中国精神疾病分类方案与诊断标准第2版修订本(CCMD-Ⅱ-R)精神分裂症诊断标准筛选病例后常规采取脑脊液,-70℃保存。患者病程0.5～20年。选用无精神神经系统疾病及检查正常的脑脊液20份作为对照。
, 百拇医药
1.2 试剂:丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、硝酸纤维素膜、牛血清白蛋白、低相对分子质量标准蛋白、标准人IgG、羊抗人IgG/HRP均购自华美生物工程公司,其它试剂为国产分析纯。
1.3 标本的制备:采用冷冻浓缩法将精神分裂症混合脑脊液和对照混合脑脊液浓缩3倍,将个人份精神分裂症脑脊液和个人份对照脑脊液浓缩3倍。以低相对分子质量标准蛋白和标准人IgG作为标准,分别取浓缩的精神分裂症和对照的混合脑脊液,未浓缩的精神分裂症和对照的混合脑脊液,浓缩的精神分裂症和对照的个人份脑脊液,未浓缩的精神分裂症和对照的个人份脑脊液进行检测。
1.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳:分离胶浓度为10%,浓缩胶浓度为5%。电泳条件为稳压60 V,时间6 h。
1.5 蛋白印迹:蛋白印迹转移电泳按Towbin法进行〔2〕,90 mA转移4 h。免疫酶标显色过程如下:用3%牛血清白蛋白封闭电泳转移后的硝酸纤维素膜,37℃温箱放置过夜后,用0.05%Tween 20-PBS洗膜3次,每次5 min。用羊抗人IgG(500～1 000倍稀释)对膜进行封闭,37℃温箱孵育1 h,0.05%Tween 20-PBS洗膜4次,每次10 min。最后以二氨基联苯胺作底物显色5～15 min,双蒸水终止反应,照相保存。
, 百拇医药
2 结果
以上标本同时进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,经考马斯亮蓝R250染色显示,浓缩与未浓缩的精神分裂症混合脑脊液在相对分子质量130 ku处出现的电泳带,其深浅明显高于浓缩与未浓缩的对照混合脑脊液,在浓缩的脑脊液中尤为显著;在个人份脑脊液中,浓缩后的精神分裂症脑脊液有26份在130 ku处出现此带,4份未检出。个人份对照脑脊液浓缩后有14份可见很浅的带,6份未检出。而未浓缩的精神分裂症和未浓缩的对照个人份脑脊液中均未发现此带。在蛋白印迹中,此带可与羊抗人IgG抗体发生免疫结合反应,提示该成份系一种IgG样蛋白质。精神分裂症患者脑脊液在免疫印迹反应时所呈现的条带深于对照脑脊液,与考马斯亮蓝染色结果相一致。
3 讨论
随着免疫学的发展,许多学者发现精神分裂症患者存在细胞免疫和体液免疫障碍,从而认为精神分裂症与免疫病理损伤有密切关系。作者以往的研究发现〔3〕,用人胎脑蛋白和兔脑蛋白提取液与精神分裂症患者血清和脑脊液反应,出现IgG与脑蛋白特异性结合的条带,表明患者血清和脑脊液中存在针对某种脑蛋白的特异性IgG。而在患者脑脊液中也证实了即有血清中存在的IgG抗脑抗体,又有血清中没有的IgG抗脑抗体,这可能是血循环中的抗脑抗体透过通透性增加的血脑屏障而进入脑内,而后者则直接在脑组织中产生,因此抗脑抗体就很容易与中枢神经系统接触而产生损伤效应,目前已肯定免疫系统可在脑组织内发挥完整的效应〔4,5〕。本文继此研究之后又利用SDS-聚丙烯酰胺的高分辨率和蛋白印迹的高灵敏度检查精神分裂症脑脊液与对照脑脊液之间的异同,希望能直接地找出精神分裂症脑脊液中存在的特异抗体。用第2抗体直接与经电泳分离的脑脊液蛋白进行反应,多次重复试验结果表明,精神分裂症脑脊液与对照脑脊液之间的主要区别为130 ku蛋白质在质量上的明显不同,其它未见显著差异。130 ku蛋白质是IgG的一种亚类还是与IgG相关的其它蛋白质,尚有待进一步研究证实。130 ku蛋白质在精神分裂症脑脊液中的增多,提示精神分裂症患者体内可能存在某种脑组织来源的蛋白的异常刺激,抗体识别特异性脑蛋白抗原并产生自身免疫反应的免疫学意义和其它临床意义,有待进一步探讨。
, 百拇医药
参考文献
1.Коляскснна.ти идр.Совремнние лодохоⅡbⅠкнзучению иммуннтетя лрн uIнзофрнии вестн.Амн СССР,1979,7:76
2.Towbin H,Staehelin T,Gordon J.Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gel to nitrocellulose sheets procedure and some applications.Proc Natl Acad Sci USA,1979,76(9):4350
3.冯方波,王苏生,刘诚,等.精神分裂症患者IgG与脑蛋白的结合特异性.中华医学杂志,1987,67(11):603
4.Jankovic BD,Jakulic S,Horvat J.Schizophrenia and other psychiatric diseases:evidence for neurotissue hypersensitivity.Clin Exp Immunol,1980,40(3):515
5.Fontana A,Frei K,Bodmer S,et al.Immune-mediated encephalitis:on the role of antigen-presenting cells in brain tissue.Immunological Review,1987,100:185
(1997-12-31 收稿), 百拇医药