脂肪乳剂对胃肠道肿瘤患者围手术期白细胞化学发光的影响
作者：顾倬云 冯毓灵
单位：解放军总医院老年病研究所外科，北京 100853
关键词：脂肪乳剂；胃肠道肿瘤；围手术期；白细胞化学发光
军医进修学院学报990114 摘要 目的：人体多形核白细胞(PMN)呼吸爆发产生的活性氧自由基是机体发挥防御机制的生化基础。白细胞化学发光(CL)高峰值的高低反映白细胞氧化杀菌能力。我们对完全胃肠外营养(TPN)溶液中脂肪乳剂对围手术期胃肠道癌症患者CL的影响进行研究。方法：14 例经病理证实的进展期胃、结肠癌分为两组：①TPN-力能组，20% Lipovenoes提供 30% 非蛋白质热卡(NPC)；②TPN-葡萄糖组，葡萄糖提供 100% NPC。两组等氮、等热量，其余营养素均相同。结果：手术前后CL无明显差异。输液TPN 4d后，TPN-力能组CL明显升高，与术前比P<0.01，TPN-葡萄糖组，CL虽有升高，与术前比差异不显著(P>0.05)。结论：①手术创伤对CL的影响不大；②术后输TPN(20% Lipovenoes提供 30% NPC)可增强白细胞化学发光。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R 977.6
The effect of lipid emulsion on leukocyte chemiluminescence in patients with perioperative gastrointestinal cancer
Gu Zhuo yun, Feng Yu lin
(Department of General Surgery, Generalhospital of PLA, Beijing 100853)
Abstract Objective：The active free oxygen radicals broken out by respirationc ofhuman polymorphoneuclear neutrophil are the biochemical basis of defencemechanism inhuman body.Our study was aimed to determine the levels of peak value of leukocyte chemiluminescence (LC) so that to reflect the ability of disinfection of white blood cells.Methods:The pictures of LC were studied from the patients with GI cancer supported by TPN with or without fat emulsion perioperatively.14 of such cases comfired diagnosis of advanced gastric or colonic cancers were divided into two groups: (1)TPN with fat emulsion group.30% nonprotein calories (NPC) was provided by 20% Lipovenoes.(2)TPN with glucose group.100% NPC was provided by glucose.Overall other nutrients, nitrogen and carolies were given same in both groups.Results：The results showed that the pictures of LC were not significant difference pre-and postoperatively, but the LC wasmore brightened after 4 days than that of preoperation in group Ⅰ(P<0.01)；but was not significantly different in group Ⅱ(P>0.05).Conclusion:(1)The operation trauma of GI cancer does not affect the LC.(2)TPN with 30% NPC provided by 20% Lipovenoesmay brighten the LC in patients with GI cancer postoperatively.
, 百拇医药
Key words lipid emulsion; gastrointestinal cancer; perioperative period; leukocyte chemiluminescence
完全胃肠外营养(TPN)是近 30 年来现代外科学的重大进展之一，脂肪乳剂目前在临床上也被常规用作TPN的组成，它不仅提供必需脂肪酸(EFA)，且为机体提供充足的热卡，对机体有节氮效应，它能为围手术期患者改善营养状况，提高手术率，减少并发症，溶解脂溶性维生素，并能防止肝脂肪变性。然则，脂肪乳剂应用对围手术期患者白细胞化学发光(Leukocyte chemiluminescence, CL)的影响研究不多。
1 实验设计
1.1 病例选择 14 例病理证实的进展期胃肠道肿瘤患者，其中胃癌 9 例，结肠癌 5 例，男性 12 例，女性 2 例，随机分成二组，TPN-力能组 8 例，TPN-葡萄糖组 6 例。两组平均年龄分别为(65.9±8.0)岁、(62.2±12.7)岁；平均体重分别为(51.6±11.9)kg、(54.7±6.4)kg。两组患者年龄及体重差异均无显著性意义(P>0.05)。
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1.2 “全合一”TPN营养液的配制 “全合一”营养液在洁净层流台配制，当日配制，当日输用，按处方要求由专人配液。
能量：非蛋白热量(NPC)按 105kJ(25kcal.kg-1.d-1)。
氮量：0.12 g/(kg.d)。
电解质、维生素、微量元素等配入营养液，3 000ml溶液在 16～24h输完。
2 检测指标及方法
2.1 指标 测定白细胞化学发光(CL)、血生化、肝肾功能、血脂、氮平衡。
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2.2 材料和方法
2.2.1 主要试剂Luminol(Sigma)；酵母多糖(第二军医大学放射医学研究所)；二甲基亚砜(DMSO，Sigma)；人ABO血清；SHG-1型生物化学发光计(中国上海生产)；DDY-1 型快速定氮仪(北京)。
2.2.2 试剂的配制 第一步Luminol发光剂的配制，Luminol用二甲基亚砜溶解，再用生理盐水配制成10-3mol的贮备液，使用前以组织培养液稀释至所需浓度，本实验用10-5mol。第二步，酵母多糖的调理：用PBS 37°C溶解酵母多糖(1ml)30min，以人ABO血清 1∶1∶1 37°C调理 2h，再以 PBS 1∶1稀释备用(浓度 10mg/ml)，4°C可保存 2 周。
2.2.3 化学发光测定 用SHG-1 型生物化学发光计进行化学发光测定，每次测量间隔时间 180s，最后以仪器记录的化学发光(CL)峰值(VP)表示PMN诱发CL的强度。
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2.3 标本的采集
2.3.1 血液标本采集各点分布
2.3.2 TPN开始后收集 24h尿，测定氮平衡。
3 结果
3.1 血酯、肝功、肾功、血糖(附表)。
附表 TPN前后两组血酯、血糖及肝肾功能(
±s)
TPN前
TPN后
GS
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力能
GS
力能
GPT(mmol/L)
11.8±5.8
15.7±8.8
15.5±8.5
16.9±9.3
GOP(mmol/L)
10.3±2.1
15.6±8.4
13.7±3.4
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21.8±15.9
TP(g/L)
68.6±4.9
65.8±8.7
66.3±3.6
65.2±7.4
TB(μmol/L)
13.9±2.9
14.7±8.2
12.4±3.2
20.1±10.6
DB(μmol/L)
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6.3±1.9
6.4±5.1
6.1±2.3
9.6±6.0
CH(mmol/L)
5.1±0.5
5.0±0.8
4.5±0.3
3.5±0.4
TG(mmol/L)
1.7±0.7
1.7±1.1
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1.2±0.1
1.3±1.0
GLU(mmol/L)
4.6±0.2
5.4±0.6
5.1±0.4
6.0±0.8
BUN(mmol/L)
4.0±0.7
4.8±0.9
5.3±1.8
5.1±1.1
, 百拇医药
CR(μmol/L)
65.7±9.8
84.1±15.5
75.1±23.4
75.9±11.0
TPN前后，葡萄糖组及力能组肝肾功能，血糖，血酯差异均无显著性意义，P>0.05
3.2 氮平衡 由图 1 中可以看出两组患者均为负氮平衡，力能组氮平衡优于葡萄糖组。
t/d
图 1 两组氮平衡
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3.3 白细胞化学发光(CL)
3.3.1 手术前、后比较，术后CL强度略减低，但差异无显著性意义。
3.3.2 TPN前后两组比较，TPN后CL强度均有升高，力能组差异有显著意义(P<0.01，图 2)。
图 2 TPN各组营养前后白细胞CL
4 讨论
人体多形核白细胞(PMN)呼吸爆发产生的活性氧自由基是机体发挥防御机制的生化基础。PMN受刺激后，通过已糖磷酸支路途径活化，发生呼吸爆发，在增加耗氧的同时产生许多活性氧自由基(如O-2，H2O2，OH-)这些活性氧有强烈的杀菌作用，在这一系列生物，化学过程中伴有发光现象。但是这种细胞的发光十分微弱。如果存在有冷光剂鲁米诺，那么活性氧会将能量转移给鲁米诺，使鲁米诺处于激发态，激发态的鲁米诺退到基态时，会产生波长为 425nm 的较强的化学发光〔2〕。
, 百拇医药
人全血CL主要是PMN呼吸爆发的结果这是因为：①红细胞没有CL，单核细胞和淋巴细胞的CL也微弱得无法检测；②同一份血标本相同数量的PMN，用分离的白细胞与全血，两者的CL相当。目前以全血为材料检测白细胞CL，已广泛用于科研和临床。
我们的研究结果表明手术创伤前后，白细胞CL无明显变化。白细胞CL的高低影响因素较多，与血清调理素水平的活性关系较大，CL的高低能反映白细胞的氧化杀菌能力。有很多研究指出创伤患者血清调理功能减低，而白细胞的吞噬是受体结合过程，被吞噬的细菌等首先需经过调理素的调理。因而创伤影响白细胞吞噬作用，但对创伤患者中性白细胞吞噬功能的研究结果不尽相同，有加快，减慢和基本不变，创伤后患者白细胞的平均吞噬速度基本正常，而吞噬功能与病情变化无明显关系，仅在极少数严重创伤患者才见到白细胞吞噬功能下降。但是大部分患者白细胞杀菌能力下降，这与我们的研究基本一致。
我们的研究表明，单一葡萄糖作为热源的TPN对胃肠手术后 4d患者的中性白细胞CL无明显影响，而力能(LCT)脂肪乳剂提供部分非蛋白质热卡的TPN能提高胃肠手术后 4 d患者中性白细胞CL，即提高白细胞的吞噬和氧化杀菌能力。
, 百拇医药
Shaita〔3〕的研究表明，在新生儿输入Intralipid 0.5mg/kg，4h输入，白细胞CL有所增加，输入Intralipid从 0.5g/(kg.d)逐渐增加到 2～3g/(kg.d)，3 周，结果表明：1周，2周，3周分别测得的白细胞CL明显高于输注前(P<0.01)。
脂肪乳剂影响中性白细胞CL的机制主要在膜结构改变。胃肠大手术后，机体脂肪廓清速率明显加快，细胞膜磷脂组成发生改变，细胞功能受到影响。在此期间输入外源性脂肪乳剂补充了大量不饱和脂肪酸(PUFA)使膜结构及功能得到改善，因创伤、手术所致的白细胞杀菌能力已有下降的趋势，输入脂肪乳剂后得到明显改善。
参考文献
[1]郑伟，顾倬云.脂肪乳剂对完全胃肠外营养大鼠血清游离脂肪酸谱的影响.营养学报，1995，17∶193
[2]朱茂祥，龚诒芬，葛桂秀.体外刺激人外周血多形核白细胞诱发化学发光研究.生物化学与生物物理学报，1995，27∶23
[3]Shaista SV, Rita GH, Concepcion GS.In vitro effect of intralipid on polymorphonuclear leukocyte function in the neonat.J Pediatrics, 1986，109∶710
(1998—10—20收稿，1998—12—17修回), 百拇医药
单位：解放军总医院老年病研究所外科，北京 100853
关键词：脂肪乳剂；胃肠道肿瘤；围手术期；白细胞化学发光
军医进修学院学报990114 摘要 目的：人体多形核白细胞(PMN)呼吸爆发产生的活性氧自由基是机体发挥防御机制的生化基础。白细胞化学发光(CL)高峰值的高低反映白细胞氧化杀菌能力。我们对完全胃肠外营养(TPN)溶液中脂肪乳剂对围手术期胃肠道癌症患者CL的影响进行研究。方法：14 例经病理证实的进展期胃、结肠癌分为两组：①TPN-力能组，20% Lipovenoes提供 30% 非蛋白质热卡(NPC)；②TPN-葡萄糖组，葡萄糖提供 100% NPC。两组等氮、等热量，其余营养素均相同。结果：手术前后CL无明显差异。输液TPN 4d后，TPN-力能组CL明显升高，与术前比P<0.01，TPN-葡萄糖组，CL虽有升高，与术前比差异不显著(P>0.05)。结论：①手术创伤对CL的影响不大；②术后输TPN(20% Lipovenoes提供 30% NPC)可增强白细胞化学发光。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R 977.6
The effect of lipid emulsion on leukocyte chemiluminescence in patients with perioperative gastrointestinal cancer
Gu Zhuo yun, Feng Yu lin
(Department of General Surgery, Generalhospital of PLA, Beijing 100853)
Abstract Objective：The active free oxygen radicals broken out by respirationc ofhuman polymorphoneuclear neutrophil are the biochemical basis of defencemechanism inhuman body.Our study was aimed to determine the levels of peak value of leukocyte chemiluminescence (LC) so that to reflect the ability of disinfection of white blood cells.Methods:The pictures of LC were studied from the patients with GI cancer supported by TPN with or without fat emulsion perioperatively.14 of such cases comfired diagnosis of advanced gastric or colonic cancers were divided into two groups: (1)TPN with fat emulsion group.30% nonprotein calories (NPC) was provided by 20% Lipovenoes.(2)TPN with glucose group.100% NPC was provided by glucose.Overall other nutrients, nitrogen and carolies were given same in both groups.Results：The results showed that the pictures of LC were not significant difference pre-and postoperatively, but the LC wasmore brightened after 4 days than that of preoperation in group Ⅰ(P<0.01)；but was not significantly different in group Ⅱ(P>0.05).Conclusion:(1)The operation trauma of GI cancer does not affect the LC.(2)TPN with 30% NPC provided by 20% Lipovenoesmay brighten the LC in patients with GI cancer postoperatively.
, 百拇医药
Key words lipid emulsion; gastrointestinal cancer; perioperative period; leukocyte chemiluminescence
完全胃肠外营养(TPN)是近 30 年来现代外科学的重大进展之一，脂肪乳剂目前在临床上也被常规用作TPN的组成，它不仅提供必需脂肪酸(EFA)，且为机体提供充足的热卡，对机体有节氮效应，它能为围手术期患者改善营养状况，提高手术率，减少并发症，溶解脂溶性维生素，并能防止肝脂肪变性。然则，脂肪乳剂应用对围手术期患者白细胞化学发光(Leukocyte chemiluminescence, CL)的影响研究不多。
1 实验设计
1.1 病例选择 14 例病理证实的进展期胃肠道肿瘤患者，其中胃癌 9 例，结肠癌 5 例，男性 12 例，女性 2 例，随机分成二组，TPN-力能组 8 例，TPN-葡萄糖组 6 例。两组平均年龄分别为(65.9±8.0)岁、(62.2±12.7)岁；平均体重分别为(51.6±11.9)kg、(54.7±6.4)kg。两组患者年龄及体重差异均无显著性意义(P>0.05)。
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1.2 “全合一”TPN营养液的配制 “全合一”营养液在洁净层流台配制，当日配制，当日输用，按处方要求由专人配液。
能量：非蛋白热量(NPC)按 105kJ(25kcal.kg-1.d-1)。
氮量：0.12 g/(kg.d)。
电解质、维生素、微量元素等配入营养液，3 000ml溶液在 16～24h输完。
2 检测指标及方法
2.1 指标 测定白细胞化学发光(CL)、血生化、肝肾功能、血脂、氮平衡。
, 百拇医药
2.2 材料和方法
2.2.1 主要试剂Luminol(Sigma)；酵母多糖(第二军医大学放射医学研究所)；二甲基亚砜(DMSO，Sigma)；人ABO血清；SHG-1型生物化学发光计(中国上海生产)；DDY-1 型快速定氮仪(北京)。
2.2.2 试剂的配制 第一步Luminol发光剂的配制，Luminol用二甲基亚砜溶解，再用生理盐水配制成10-3mol的贮备液，使用前以组织培养液稀释至所需浓度，本实验用10-5mol。第二步，酵母多糖的调理：用PBS 37°C溶解酵母多糖(1ml)30min，以人ABO血清 1∶1∶1 37°C调理 2h，再以 PBS 1∶1稀释备用(浓度 10mg/ml)，4°C可保存 2 周。
2.2.3 化学发光测定 用SHG-1 型生物化学发光计进行化学发光测定，每次测量间隔时间 180s，最后以仪器记录的化学发光(CL)峰值(VP)表示PMN诱发CL的强度。
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2.3 标本的采集
2.3.1 血液标本采集各点分布
2.3.2 TPN开始后收集 24h尿，测定氮平衡。
3 结果
3.1 血酯、肝功、肾功、血糖(附表)。
附表 TPN前后两组血酯、血糖及肝肾功能(
±s)TPN前
TPN后
GS
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力能
GS
力能
GPT(mmol/L)
11.8±5.8
15.7±8.8
15.5±8.5
16.9±9.3
GOP(mmol/L)
10.3±2.1
15.6±8.4
13.7±3.4
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21.8±15.9
TP(g/L)
68.6±4.9
65.8±8.7
66.3±3.6
65.2±7.4
TB(μmol/L)
13.9±2.9
14.7±8.2
12.4±3.2
20.1±10.6
DB(μmol/L)
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6.3±1.9
6.4±5.1
6.1±2.3
9.6±6.0
CH(mmol/L)
5.1±0.5
5.0±0.8
4.5±0.3
3.5±0.4
TG(mmol/L)
1.7±0.7
1.7±1.1
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1.3±1.0
GLU(mmol/L)
4.6±0.2
5.4±0.6
5.1±0.4
6.0±0.8
BUN(mmol/L)
4.0±0.7
4.8±0.9
5.3±1.8
5.1±1.1
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CR(μmol/L)
65.7±9.8
84.1±15.5
75.1±23.4
75.9±11.0
TPN前后，葡萄糖组及力能组肝肾功能，血糖，血酯差异均无显著性意义，P>0.05
3.2 氮平衡 由图 1 中可以看出两组患者均为负氮平衡，力能组氮平衡优于葡萄糖组。
t/d
图 1 两组氮平衡
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3.3 白细胞化学发光(CL)
3.3.1 手术前、后比较，术后CL强度略减低，但差异无显著性意义。
3.3.2 TPN前后两组比较，TPN后CL强度均有升高，力能组差异有显著意义(P<0.01，图 2)。
图 2 TPN各组营养前后白细胞CL
4 讨论
人体多形核白细胞(PMN)呼吸爆发产生的活性氧自由基是机体发挥防御机制的生化基础。PMN受刺激后，通过已糖磷酸支路途径活化，发生呼吸爆发，在增加耗氧的同时产生许多活性氧自由基(如O-2，H2O2，OH-)这些活性氧有强烈的杀菌作用，在这一系列生物，化学过程中伴有发光现象。但是这种细胞的发光十分微弱。如果存在有冷光剂鲁米诺，那么活性氧会将能量转移给鲁米诺，使鲁米诺处于激发态，激发态的鲁米诺退到基态时，会产生波长为 425nm 的较强的化学发光〔2〕。
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人全血CL主要是PMN呼吸爆发的结果这是因为：①红细胞没有CL，单核细胞和淋巴细胞的CL也微弱得无法检测；②同一份血标本相同数量的PMN，用分离的白细胞与全血，两者的CL相当。目前以全血为材料检测白细胞CL，已广泛用于科研和临床。
我们的研究结果表明手术创伤前后，白细胞CL无明显变化。白细胞CL的高低影响因素较多，与血清调理素水平的活性关系较大，CL的高低能反映白细胞的氧化杀菌能力。有很多研究指出创伤患者血清调理功能减低，而白细胞的吞噬是受体结合过程，被吞噬的细菌等首先需经过调理素的调理。因而创伤影响白细胞吞噬作用，但对创伤患者中性白细胞吞噬功能的研究结果不尽相同，有加快，减慢和基本不变，创伤后患者白细胞的平均吞噬速度基本正常，而吞噬功能与病情变化无明显关系，仅在极少数严重创伤患者才见到白细胞吞噬功能下降。但是大部分患者白细胞杀菌能力下降，这与我们的研究基本一致。
我们的研究表明，单一葡萄糖作为热源的TPN对胃肠手术后 4d患者的中性白细胞CL无明显影响，而力能(LCT)脂肪乳剂提供部分非蛋白质热卡的TPN能提高胃肠手术后 4 d患者中性白细胞CL，即提高白细胞的吞噬和氧化杀菌能力。
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Shaita〔3〕的研究表明，在新生儿输入Intralipid 0.5mg/kg，4h输入，白细胞CL有所增加，输入Intralipid从 0.5g/(kg.d)逐渐增加到 2～3g/(kg.d)，3 周，结果表明：1周，2周，3周分别测得的白细胞CL明显高于输注前(P<0.01)。
脂肪乳剂影响中性白细胞CL的机制主要在膜结构改变。胃肠大手术后，机体脂肪廓清速率明显加快，细胞膜磷脂组成发生改变，细胞功能受到影响。在此期间输入外源性脂肪乳剂补充了大量不饱和脂肪酸(PUFA)使膜结构及功能得到改善，因创伤、手术所致的白细胞杀菌能力已有下降的趋势，输入脂肪乳剂后得到明显改善。
参考文献
[1]郑伟，顾倬云.脂肪乳剂对完全胃肠外营养大鼠血清游离脂肪酸谱的影响.营养学报，1995，17∶193
[2]朱茂祥，龚诒芬，葛桂秀.体外刺激人外周血多形核白细胞诱发化学发光研究.生物化学与生物物理学报，1995，27∶23
[3]Shaista SV, Rita GH, Concepcion GS.In vitro effect of intralipid on polymorphonuclear leukocyte function in the neonat.J Pediatrics, 1986，109∶710
(1998—10—20收稿，1998—12—17修回), 百拇医药