失血性休克大鼠淋巴液中TNF和IL-6水平的变化及山莨菪碱的作用*
作者：李玉珍 刘育英 赵秀梅 王录焕
单位：李玉珍 刘育英 赵秀梅：解放军总医院循环研究室，北京 100853；王录焕：解放军总医院生化研究室，北京 100853
关键词：失血性休克；淋巴液；肿瘤坏死因子；白细胞介素6；山莨菪碱
军医进修学院学报990108 摘要 目的：观察失血性休克大鼠淋巴液中肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor, TNF)和白细胞介素 6(Interleukin 6, IL-6)水平的变化以及山莨菪碱的作用。方法：由颈总动脉放血复制失血性休克模型，经乳糜池插管收集淋巴液，用放射免疫分析法检测淋巴液中TNF和IL-6 的含量。结果：失血性休克后，TNF水平明显升高，其中失血 1h升高最明显，是失血前的 1.71 倍，与对照组相比，差异有极显著性意义(P<0.001)；IL-6的高峰出现休克 1～2h，与失血前相比有显著意义(P<0.01)。失血 1h后，回输全部失血并给予山莨菪碱治疗，发现TNF和IL-6水平明显下降，与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论：失血性休克后淋巴液TNF和IL-6水平升高是导致淋巴循环障碍的重要因素之一，山莨菪碱对TNF和IL-6 生成有抑制作用。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R 605.971
The changes of tumor necrosis factor and interleukin 6
in lymph ofhemorrhagic shock rats
Li Yuzhen, Liu Yuying, Zhao Xiumei, Wang Luhuan
(Laboratory of Microcirculation, Generalhospital of PLA, Beijing 100853)
Abstract Objective：The aim of the study was to measure tumor necrosis factor(TNF) and interleukin 6(IL-6) in lymph ofhemorrhagic shock rats and the effect of anisodamine on TNF and IL-6 production.Methods:The rat model ofhemorrhagic shock was made by bloodletting from common carotid artery.The lymph were collected by intubating into chylocyst.TNF and IL-6 in lymph were determined by means of radioimmunoassay.Results：Hemorrhagic shock led to an increase of TNF and IL-6 in lymph.TNF peaked at 1hour afterhemorrhage(P<0.001)，which was 1.71 timeshigher than that of prehemorrhage.IL-6 peaked at 1～2hour afterhemorrhage(P<0.01).Rats were transfused with all of the lost blood and administered with anisodamine.The levels of TNF and IL-6 were reduced but not significant(P>0.05).Conclusion:The results indicate that the increase of TNF and IL-6 in lymph may be one of important factors to induce lymph circulatory failure afterhemorrhagic shock, and anisodamine seems to be able to inhibit TNF and IL-6 production.
, http://www.100md.com
Key words hemorrhagic shock; lymph; tumor necrosis factor; interleukin 6; anisodamine
失血性休克的淋巴管静态口径进行性缩小，自主收缩频率和多数收缩性指数降低，造成淋巴循环障碍，这一现象已受到学者的广泛关注〔1，2〕。但有关其机制的研究甚少。肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)和白细胞介素6(Interleukin 6, IL-6)是参与休克反应的重要细胞因子〔3，4〕。研究表明，失血性休克时血液中TNF和IL-6明确升高〔5〕。那么淋巴液中TNF和IL-6的变化如何呢?抗休克治疗中常用的山莨菪碱能否抑制TNF和IL-6的产生?本实验采用大鼠失血性休克模型对此进行初步探讨。
1 材料和方法
1.1 动物 SD大鼠，雄性，体重220～300g，20%乌拉坦(1.25g.kg-1)双侧大腿肌肉麻醉。
, 百拇医药
1.2 颈总动脉插管 分离一侧颈总动脉，插入聚乙烯导管。三通管一端连接血压计，用于监测血压；另一端连接贮血瓶备放血用，通过调节瓶的高度控制血压和出血量。
1.3 乳糜池插管 沿腹正中线切口，上达剑突长约 3cm，并在切口中间向左作一横切口达肋缘，打开腹腔，分离乳糜池，插入聚乙烯导管，结扎固定后，将插管从腹壁引出，关闭腹腔。
1.4 收集淋巴液 实验分为 3 组，对照组：休克前收集 1h淋巴液；休克组：由颈总动脉放血，在 10min内使血压下降并稳定在 5.07～5.47kPa，分别收集失血后 1h，2h，3h淋巴液；休克治疗组：放血1h后，回输全部失血，同时给予山莨菪碱(1mg.kg-1)和 0.9%生理盐水(0.6ml.100g-1治疗)，收集 1h淋巴液。
, 百拇医药
1.5 TNF和IL-6 水平的测定 采用放射免疫测定法，TNF放免试剂盒购自解放军总医院东亚免疫研究所，IL-6放免试剂盒购自解放军总医院生化研究室。实验数据以平均数±标准差(
±s)表示。
2 结果
2.1 TNF水平的变化 对照组大鼠淋巴液TNF含量为(0.86±0.29)ng.ml-1(n=11)，大鼠失血性休克后，其TNF含量升高。其中尤以休克 1h时TNF变化最明显，是失血前的 1.71 倍(P<0.001)；休克 2h，TNF含量仍较高，是失血前的 1.45 倍(P<0.05)；但休克 3h，TNF含量基本恢复到失血前水平(P>0.05，表 1)。
表 1 失血性休克大鼠淋巴液中TNF水平的变化 组 别
, 百拇医药
n
±s(ng.ml-1)
对照组
11
0.86±0.29
失血1h
13
1.47±0.43***
失血2h
10
1.25±0.44*
, 百拇医药
失血3h
10
0.79±0.21
*P<0.05 ***P<0.001(与对照组比较)
2.2 IL-6水平的变化 对照组大鼠淋巴液中IL-6含量为(0.60±0.40)ng.ml-1(n=11)。大鼠失血性休克IL-6 含量升高，其高峰出现在休克 1h～2h，(P<0.01)；休克 3h，IL-6 的含量有所下降，但与失血前相比差异仍呈显著性意义(P<0.05，表 2)。
表 2 失血性休克大鼠淋巴液中IL-6 水平的变化 组 别
n
±s(ng.ml-1)
, 百拇医药
对照组
11
0.60±0.40
失血 1h
13
1.08±0.22**
失血 2h
10
1.10±0.10**
失血 3h
10
0.96±0.24*
, http://www.100md.com
*P<0.05 **P<0.01(与对照组比较)
2.3 山莨菪碱的作用 失血 1h后，回输全部失血并给予山莨菪碱和 0.9%生理盐水(0.9% NS)治疗，结果发现：经山莨菪碱治疗后，TNF和IL-6含量下降(P>0.05)；而经生理盐水治疗后，TNF和IL-6含量仍升高(P<0.05，表 3)。
表 3 山莨菪碱对失血性休克大鼠淋巴液TNF和
IL-6水平的影响(
±s，ρ/ng.ml-1) 组 别
n
TNF
, http://www.100md.com
IL-6
对照组
11
0.86±0.29
0.60±0.40
失血 2h
10
1.25±0.44*
1.10±0.10**
山莨菪碱组
10
0.79±0.24
, 百拇医药
0.52±0.25
0.9% NS组
10
1.28±0.32*
1.07±0.11**
*P<0.05 **P<0.01(与对照组比较)
3 讨论
Mainous等报道〔5〕，内毒素引起的休克大鼠血浆中TNF和IL-6升高，TNF的高峰出现在休克 2h左右，IL-6的高峰出现在休克 4～6h。本研究采用失血性休克模型，观察了淋巴液中TNF和IL-6水平的变化。结果发现，失血性休克时淋巴液中TNF和IL-6明显升高，其中TNF的高峰出现在休克 1h，IL-6 的高峰出现在休克 1～2h，早于血液中出现的高峰。这一结果提示休克早期淋巴液中TNF和IL-6的升高可能是造成淋巴循环障碍的重要因素。淋巴液中TNF和IL-6 的升高必然会造成淋巴管内皮细胞和平滑肌细胞的损伤，影响淋巴管的收缩，造成淋巴循环障碍。因此抑制TNF和IL-6的生成，改善淋巴循环障碍，促进淋巴的生成和回流，有利于从组织液中吸收和运输蛋白质等大分子物质，形成抗休克治疗的良性循环。研究发现山莨菪碱可降低淋巴液中TNF和IL-6含量，其作用机制有待于进一步研究。
, 百拇医药
*“九五”军队医药卫生科研基金资助项目，批准号 96Z026
参考文献
[1]张静，姜华，薄爱华.失血性休克时淋巴微循环的变化.中华医学杂志，1991，11(1)∶24
[2]Higaki A, Kawahara M, Yuge O et al.Mesenteric lymphotic vasomotion followinghemorrhage and retransfusion in the rat.Lymphology, 1990，23∶209
[3]Grotz MR, Ding J, Guo W et al.Comparision of plasma cytokine levels in rats subjected to superior mesenteric artery occlusion orhemorrhagic shock.Shock, 1995，3(5)∶362
[4]方国恩，华积德.白介素 6 在动物多器官功能衰竭中的变化及其意义.中华实验外科杂志，1995，12(1)∶25
[5]Mainous MR, Ertel W, Chautry Ih et al.The gut: a cytokine-generating organ in systernic inflammation.Shock, 1995，4(3)∶193
(1998—10—18收稿，1998—11—13修回), 百拇医药
单位：李玉珍 刘育英 赵秀梅：解放军总医院循环研究室，北京 100853；王录焕：解放军总医院生化研究室，北京 100853
关键词：失血性休克；淋巴液；肿瘤坏死因子；白细胞介素6；山莨菪碱
军医进修学院学报990108 摘要 目的：观察失血性休克大鼠淋巴液中肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor, TNF)和白细胞介素 6(Interleukin 6, IL-6)水平的变化以及山莨菪碱的作用。方法：由颈总动脉放血复制失血性休克模型，经乳糜池插管收集淋巴液，用放射免疫分析法检测淋巴液中TNF和IL-6 的含量。结果：失血性休克后，TNF水平明显升高，其中失血 1h升高最明显，是失血前的 1.71 倍，与对照组相比，差异有极显著性意义(P<0.001)；IL-6的高峰出现休克 1～2h，与失血前相比有显著意义(P<0.01)。失血 1h后，回输全部失血并给予山莨菪碱治疗，发现TNF和IL-6水平明显下降，与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论：失血性休克后淋巴液TNF和IL-6水平升高是导致淋巴循环障碍的重要因素之一，山莨菪碱对TNF和IL-6 生成有抑制作用。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R 605.971
The changes of tumor necrosis factor and interleukin 6
in lymph ofhemorrhagic shock rats
Li Yuzhen, Liu Yuying, Zhao Xiumei, Wang Luhuan
(Laboratory of Microcirculation, Generalhospital of PLA, Beijing 100853)
Abstract Objective：The aim of the study was to measure tumor necrosis factor(TNF) and interleukin 6(IL-6) in lymph ofhemorrhagic shock rats and the effect of anisodamine on TNF and IL-6 production.Methods:The rat model ofhemorrhagic shock was made by bloodletting from common carotid artery.The lymph were collected by intubating into chylocyst.TNF and IL-6 in lymph were determined by means of radioimmunoassay.Results：Hemorrhagic shock led to an increase of TNF and IL-6 in lymph.TNF peaked at 1hour afterhemorrhage(P<0.001)，which was 1.71 timeshigher than that of prehemorrhage.IL-6 peaked at 1～2hour afterhemorrhage(P<0.01).Rats were transfused with all of the lost blood and administered with anisodamine.The levels of TNF and IL-6 were reduced but not significant(P>0.05).Conclusion:The results indicate that the increase of TNF and IL-6 in lymph may be one of important factors to induce lymph circulatory failure afterhemorrhagic shock, and anisodamine seems to be able to inhibit TNF and IL-6 production.
, http://www.100md.com
Key words hemorrhagic shock; lymph; tumor necrosis factor; interleukin 6; anisodamine
失血性休克的淋巴管静态口径进行性缩小，自主收缩频率和多数收缩性指数降低，造成淋巴循环障碍，这一现象已受到学者的广泛关注〔1，2〕。但有关其机制的研究甚少。肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)和白细胞介素6(Interleukin 6, IL-6)是参与休克反应的重要细胞因子〔3，4〕。研究表明，失血性休克时血液中TNF和IL-6明确升高〔5〕。那么淋巴液中TNF和IL-6的变化如何呢?抗休克治疗中常用的山莨菪碱能否抑制TNF和IL-6的产生?本实验采用大鼠失血性休克模型对此进行初步探讨。
1 材料和方法
1.1 动物 SD大鼠，雄性，体重220～300g，20%乌拉坦(1.25g.kg-1)双侧大腿肌肉麻醉。
, 百拇医药
1.2 颈总动脉插管 分离一侧颈总动脉，插入聚乙烯导管。三通管一端连接血压计，用于监测血压；另一端连接贮血瓶备放血用，通过调节瓶的高度控制血压和出血量。
1.3 乳糜池插管 沿腹正中线切口，上达剑突长约 3cm，并在切口中间向左作一横切口达肋缘，打开腹腔，分离乳糜池，插入聚乙烯导管，结扎固定后，将插管从腹壁引出，关闭腹腔。
1.4 收集淋巴液 实验分为 3 组，对照组：休克前收集 1h淋巴液；休克组：由颈总动脉放血，在 10min内使血压下降并稳定在 5.07～5.47kPa，分别收集失血后 1h，2h，3h淋巴液；休克治疗组：放血1h后，回输全部失血，同时给予山莨菪碱(1mg.kg-1)和 0.9%生理盐水(0.6ml.100g-1治疗)，收集 1h淋巴液。
, 百拇医药
1.5 TNF和IL-6 水平的测定 采用放射免疫测定法，TNF放免试剂盒购自解放军总医院东亚免疫研究所，IL-6放免试剂盒购自解放军总医院生化研究室。实验数据以平均数±标准差(
±s)表示。2 结果
2.1 TNF水平的变化 对照组大鼠淋巴液TNF含量为(0.86±0.29)ng.ml-1(n=11)，大鼠失血性休克后，其TNF含量升高。其中尤以休克 1h时TNF变化最明显，是失血前的 1.71 倍(P<0.001)；休克 2h，TNF含量仍较高，是失血前的 1.45 倍(P<0.05)；但休克 3h，TNF含量基本恢复到失血前水平(P>0.05，表 1)。
表 1 失血性休克大鼠淋巴液中TNF水平的变化 组 别
, 百拇医药
n
±s(ng.ml-1)对照组
11
0.86±0.29
失血1h
13
1.47±0.43***
失血2h
10
1.25±0.44*
, 百拇医药
失血3h
10
0.79±0.21
*P<0.05 ***P<0.001(与对照组比较)
2.2 IL-6水平的变化 对照组大鼠淋巴液中IL-6含量为(0.60±0.40)ng.ml-1(n=11)。大鼠失血性休克IL-6 含量升高，其高峰出现在休克 1h～2h，(P<0.01)；休克 3h，IL-6 的含量有所下降，但与失血前相比差异仍呈显著性意义(P<0.05，表 2)。
表 2 失血性休克大鼠淋巴液中IL-6 水平的变化 组 别
n
±s(ng.ml-1), 百拇医药
对照组
11
0.60±0.40
失血 1h
13
1.08±0.22**
失血 2h
10
1.10±0.10**
失血 3h
10
0.96±0.24*
, http://www.100md.com
*P<0.05 **P<0.01(与对照组比较)
2.3 山莨菪碱的作用 失血 1h后，回输全部失血并给予山莨菪碱和 0.9%生理盐水(0.9% NS)治疗，结果发现：经山莨菪碱治疗后，TNF和IL-6含量下降(P>0.05)；而经生理盐水治疗后，TNF和IL-6含量仍升高(P<0.05，表 3)。
表 3 山莨菪碱对失血性休克大鼠淋巴液TNF和
IL-6水平的影响(
±s，ρ/ng.ml-1) 组 别n
TNF
, http://www.100md.com
IL-6
对照组
11
0.86±0.29
0.60±0.40
失血 2h
10
1.25±0.44*
1.10±0.10**
山莨菪碱组
10
0.79±0.24
, 百拇医药
0.52±0.25
0.9% NS组
10
1.28±0.32*
1.07±0.11**
*P<0.05 **P<0.01(与对照组比较)
3 讨论
Mainous等报道〔5〕，内毒素引起的休克大鼠血浆中TNF和IL-6升高，TNF的高峰出现在休克 2h左右，IL-6的高峰出现在休克 4～6h。本研究采用失血性休克模型，观察了淋巴液中TNF和IL-6水平的变化。结果发现，失血性休克时淋巴液中TNF和IL-6明显升高，其中TNF的高峰出现在休克 1h，IL-6 的高峰出现在休克 1～2h，早于血液中出现的高峰。这一结果提示休克早期淋巴液中TNF和IL-6的升高可能是造成淋巴循环障碍的重要因素。淋巴液中TNF和IL-6 的升高必然会造成淋巴管内皮细胞和平滑肌细胞的损伤，影响淋巴管的收缩，造成淋巴循环障碍。因此抑制TNF和IL-6的生成，改善淋巴循环障碍，促进淋巴的生成和回流，有利于从组织液中吸收和运输蛋白质等大分子物质，形成抗休克治疗的良性循环。研究发现山莨菪碱可降低淋巴液中TNF和IL-6含量，其作用机制有待于进一步研究。
, 百拇医药
*“九五”军队医药卫生科研基金资助项目，批准号 96Z026
参考文献
[1]张静，姜华，薄爱华.失血性休克时淋巴微循环的变化.中华医学杂志，1991，11(1)∶24
[2]Higaki A, Kawahara M, Yuge O et al.Mesenteric lymphotic vasomotion followinghemorrhage and retransfusion in the rat.Lymphology, 1990，23∶209
[3]Grotz MR, Ding J, Guo W et al.Comparision of plasma cytokine levels in rats subjected to superior mesenteric artery occlusion orhemorrhagic shock.Shock, 1995，3(5)∶362
[4]方国恩，华积德.白介素 6 在动物多器官功能衰竭中的变化及其意义.中华实验外科杂志，1995，12(1)∶25
[5]Mainous MR, Ertel W, Chautry Ih et al.The gut: a cytokine-generating organ in systernic inflammation.Shock, 1995，4(3)∶193
(1998—10—18收稿，1998—11—13修回), 百拇医药