二次离心分离法提高红细胞包涵体检出率
作者：李津婴 黄正霞 周虹 许燕群 闵碧荷
单位：长海医院血液科，上海200433
关键词：H包涵体；检出率；α-地中海贫血
临床检验杂志990121 在α-地中海贫血中，由于缺乏α链，Hb β链相对多余，聚合、沉淀而形成H包涵体。多数患者的H包涵体含量很低，约占红细胞总数的1/100 000，易造成诊断上假阴性结果。本文介绍简便易行的二次离心分离法，能提高包涵体阳性检出率，附1例得益于该法的溶血性贫血确诊病例。
1 方法 取新鲜抗凝全血于普通试管中离心，3 000 r/min，5 min，吸取靠近白细胞层的红细胞，置血球压积管中再次离心，3 000 r/min，10 min。吸取上层细胞，加1 g/dl煌焦油蓝液(1∶1)混匀，37℃孵育，分别于10 min、1 h、24 h涂片镜检。
2 病例 男性，22岁，巩膜黄染6年，Hb 100 g/L，Ret 0.06。溶血常规试验：酸溶血、蔗糖溶血、抗人球蛋白、Heinz小体生成、异丙醇试验、热不稳定试验等均阴性；盐水渗脆试验初溶0.42 g/dl，全溶0.25 g/dl；H包涵体常规操作(-)；HbA2 3.9%(正常<3.5%)；HbF 5.7%；红细胞形态显示中空区扩大，靶形细胞2.5%，嗜碱性点彩细胞3.3%。骨髓象：骨髓铁含量正常，红系明显增生。红细胞酶学检查：嘧啶5′-核苷酸酶(P5′N)初筛试验R值2.06(正常对照2.99±0.31)，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)21.97 EU/g Hb(13.70±1.93)，丙酮酸激酶(PK)27.88 EU/g Hb(15.83±1.43)，NADH-高铁血红蛋白还原酶(MR)37.51 EU/g Hb(19.11±1.23)。
3 结果与讨论
本病例外周红细胞形态学靶形变化、盐水渗脆全溶浓度下降和低色素表现提示存在地中海贫血，由于HbA2和HbF轻度增高，属轻型β-地贫表现，为排除致靶形细胞和高嗜碱性点彩的其他原因，逐用二次离心分离法再一次进行H包涵体试验，以及P5′N直接酶活力测定。结果显示，H包涵体试验阳性，P5′N酶活力正常〔P5′N 10.77 μmol Pi/g Hb(对照7.53±0.89)〕而初筛试验R值下降，排除P5′N缺陷致溶贫因素，强烈提示该患者可能同时存在血红蛋白β链和α链异常，建议患者及双亲做Hb基因分析(上海医学遗传研究所检测)，结果证实，该患者为β-地贫基因复合α珠蛋白基因三体型(IVS-2-654 C→/βA/αααaur：4.2/αα)中间型地中海贫血，β和α珠蛋白基因缺陷分别源于其父亲和母亲。
外周循环血中含包涵体的病态红细胞在通过脾窦时易被吞噬破坏,因此含包涵体的红细胞年龄相对而言比较年青。本法利用年轻细胞比重低、沉降慢的特点,用二次离心分离法浓集年轻细胞,可使原来不易检测到的含包涵体红细胞浓集100倍,如果原来为1/100 000,二次离心后可达1/1 000,即3～4个油镜视野可观察到1个阳性细胞，由此提高了包涵体阳性检出率及相应疾病的确诊率。本例高嗜碱性点彩伴低P5′N初筛R值及正常酶活力测值，提示存在地贫，而经二次离心分离法所得包涵体阳性结果则是α-地贫的直接诊断依据。
(1998-04-07收稿), http://www.100md.com
单位：长海医院血液科，上海200433
关键词：H包涵体；检出率；α-地中海贫血
临床检验杂志990121 在α-地中海贫血中，由于缺乏α链，Hb β链相对多余，聚合、沉淀而形成H包涵体。多数患者的H包涵体含量很低，约占红细胞总数的1/100 000，易造成诊断上假阴性结果。本文介绍简便易行的二次离心分离法，能提高包涵体阳性检出率，附1例得益于该法的溶血性贫血确诊病例。
1 方法 取新鲜抗凝全血于普通试管中离心，3 000 r/min，5 min，吸取靠近白细胞层的红细胞，置血球压积管中再次离心，3 000 r/min，10 min。吸取上层细胞，加1 g/dl煌焦油蓝液(1∶1)混匀，37℃孵育，分别于10 min、1 h、24 h涂片镜检。
2 病例 男性，22岁，巩膜黄染6年，Hb 100 g/L，Ret 0.06。溶血常规试验：酸溶血、蔗糖溶血、抗人球蛋白、Heinz小体生成、异丙醇试验、热不稳定试验等均阴性；盐水渗脆试验初溶0.42 g/dl，全溶0.25 g/dl；H包涵体常规操作(-)；HbA2 3.9%(正常<3.5%)；HbF 5.7%；红细胞形态显示中空区扩大，靶形细胞2.5%，嗜碱性点彩细胞3.3%。骨髓象：骨髓铁含量正常，红系明显增生。红细胞酶学检查：嘧啶5′-核苷酸酶(P5′N)初筛试验R值2.06(正常对照2.99±0.31)，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)21.97 EU/g Hb(13.70±1.93)，丙酮酸激酶(PK)27.88 EU/g Hb(15.83±1.43)，NADH-高铁血红蛋白还原酶(MR)37.51 EU/g Hb(19.11±1.23)。
3 结果与讨论
本病例外周红细胞形态学靶形变化、盐水渗脆全溶浓度下降和低色素表现提示存在地中海贫血，由于HbA2和HbF轻度增高，属轻型β-地贫表现，为排除致靶形细胞和高嗜碱性点彩的其他原因，逐用二次离心分离法再一次进行H包涵体试验，以及P5′N直接酶活力测定。结果显示，H包涵体试验阳性，P5′N酶活力正常〔P5′N 10.77 μmol Pi/g Hb(对照7.53±0.89)〕而初筛试验R值下降，排除P5′N缺陷致溶贫因素，强烈提示该患者可能同时存在血红蛋白β链和α链异常，建议患者及双亲做Hb基因分析(上海医学遗传研究所检测)，结果证实，该患者为β-地贫基因复合α珠蛋白基因三体型(IVS-2-654 C→/βA/αααaur：4.2/αα)中间型地中海贫血，β和α珠蛋白基因缺陷分别源于其父亲和母亲。
外周循环血中含包涵体的病态红细胞在通过脾窦时易被吞噬破坏,因此含包涵体的红细胞年龄相对而言比较年青。本法利用年轻细胞比重低、沉降慢的特点,用二次离心分离法浓集年轻细胞,可使原来不易检测到的含包涵体红细胞浓集100倍,如果原来为1/100 000,二次离心后可达1/1 000,即3～4个油镜视野可观察到1个阳性细胞，由此提高了包涵体阳性检出率及相应疾病的确诊率。本例高嗜碱性点彩伴低P5′N初筛R值及正常酶活力测值，提示存在地贫，而经二次离心分离法所得包涵体阳性结果则是α-地贫的直接诊断依据。
(1998-04-07收稿), http://www.100md.com