肝组织内丙型肝炎病毒不同抗原的定位及比较
作者：翟为溶 周侃 姚光弼
单位：翟为溶 200032 上海医科大学；周侃、姚光弼 上海市静安区中心医院
关键词：慢性肝炎；肝炎病毒，丙型；免疫组织化学
中华传染病杂志990103 【摘要】 目的 研究HCV不同抗原的组织内定位以及与病变和血HCV RNA的关系。方法 51份慢性丙型肝炎肝穿刺组织，免疫组化检测HCVCP10、NS3和NS4，其中32份还检测NS5，同时观察组织学病变和血HCV RNA(RT-PCR法)。结果 HCAg总阳性率>60%。不同抗原阳性率不一，以CP10和NS5为高(各>50%)。阳性细胞数一般较少，散在分布；灶性集聚时，多与碎屑坏死及炎症反应相伴。几种抗原全阳性者组织病变活动度较高。血HCV RNA阳性率80.39%，但血与组织检测结果的重合性仅占50.98%；血阴性者，8/10份组织内检出1或多种抗原。结论 组织内同时检测多种抗原能提高HCAg检出率。
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Localization and comparison of varied HCV antigens in liver tissue
ZHAI Weirong, ZHOU Kan, YAO Guangbi.
Department of Pathology, Shanghai Medical University, Shanghai 200032
【Abstract】 Objective To compare the localizations of varied HCAg in liver tissue and to study their relationship with histopathology and expression of HCV RNA in serum. Methods HCAg CP10, NS3 and NS4 were localized immunohistochemically in 51 liver tissues biopsied from the chronic hepatitis C cases, and NS5 was also detected in 32 of 51 specimens. Histopathologic activity and HCV RNA in serum (RT-PCR) were investigated simultaneously.Results Total positive rate of HCAg was >60%. The frequencies of varied HCAg were different, the highest rate of which was CP10 and NS5 (>50%). The positive cells were usually scattered in most of the specimens. The clustered positive cells were found near the portal tract accompaning with the pieacemeal necrosis and inflammative reaction. The histopathologic activity was higher in the cases with positive results of all HCAg detected. The positive rate of serum HCV RNA was 80.39%. However, the coincident rate of HCV detection in serum and in tissue was only 50.98%, 1 or more HCAg were found to be in 8 specimens among the 10 of negative serum HCV RNA. Conclusion Detection of more kinds of HCAg in the same specimen will raise the positive rate of infected cases.
, 百拇医药
【Key words】 Chronic hepatitis Hepatitis C virus Immunohistochemistry
HCV感染肝组织中病毒抗原的免疫组化检测已有不少报道，但因所用抗体不同、组织标本处理及免疫组化方法的差异，组织内抗原阳性率相差较大[1]。本研究采用4种抗-HCV单克隆抗体，对慢性丙型肝炎肝穿刺组织作HCV相关抗原定位比较，并分析它们与血病毒RNA的表达和组织病变间的关系，报道如下。
材料和方法
一、标本来源
1993～1995年间上海市瑞金医院、静安区中心医院、华山医院以及中山医院收治的慢性丙型肝炎患者42例，男26例，女16例，年龄18～50岁。ALT大于正常值2倍以上，血清抗-HCV(Abbott EIA试剂盒)全部阳性，HCV RNA(RT-PCR)阳性37例，阴性5例，肝穿刺活检证实为慢性肝炎。其中9例经干扰素-α2a治疗半年后行第二次肝穿刺活检，同时复查血ALT与HCV RNA。
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肝穿刺组织共51份，经缓冲福尔马林固定，常规石蜡连续切片。HE染色，组织学观察参照慢性肝炎新分类进行分级[2]和组织学活动性指数(HAI)记分[3]。
二、免疫组化染色
采用单克隆抗体、LSAB(DAKO产品)法、DAB显色，在32份标本上分别显示HCV不同基因区段编码的抗原：CP10(抗CP10由中国科学院上海生化研究所崔大敷教授提供)，NS4(抗NS4由中国科学院上海细胞研究所提供)，NS3和NS5(抗NS3和抗NS5为北京医科大学肝炎研究所产品)，另19份标本因切片用完，未能检测NS5，但作其余3项指标检测。以无关单抗取代上述抗体作阴性对照。免疫组化阳性结果作半定量记录：“+”少数散在阳性细胞或灶性分布，后者最密处每高倍视野下≤5个阳性细胞；“++”易见散在或灶性分布，最密处阳性细胞6～20个；“+++”大量散在分布或灶性分布，最密处≥21个阳性细胞。
, 百拇医药
结果
一、4种抗原检出情况
4种抗原基本都定位于肝细胞胞浆内，仅个别病例有少量核内着色。阳性反应呈细或粗颗粒状，分散在胞浆内，有时集聚在胞核周围或一侧，少数阳性细胞呈全浆均匀着色(图1～4)。3种(指CP10、NS3和NS4)或4种(指前3种再加NS5)抗原在同一份标本中表达并不完全一致。检测3种抗原的51份标本中，1～3种抗原阳性的31份，总阳性率60.78%，但3种抗原全部阳性的仅9份(17.64%)，全部阴性的20份(39.22%)；检测4种抗原的32份标本中，1～4种抗原阳性的21份，总阳性率65.62%，4种抗原全部阳性的6份(18.75%)，全部阴性的11份(34.38%)。几种抗原相比，CP10和NS5阳性率最高，各达50%以上，NS3次之，NS4最低(表1)。
表1 几种抗原阳性率比较 抗原类型
, http://www.100md.com 检测例数
阳性数(%)
CP10
51
28(54.90)
NS3
51
19(37.25)
NS4
51
11(21.57)
NS5
32
, http://www.100md.com
16(50.00)
图1 HCV-CP10(+)，阳性反应位于肝细胞浆内(↑)，占据细胞的部分或大部分区 LSAB法×200
图2 HCV-CP10(++)，阳性细胞分布于汇管区附近，大多为胞浆阳性，少数呈胞核阳性(↑) LSAB法×200
图3 HCV-NS4(+++)，汇管区附近有较多阳性细胞，均为胞浆着色(与图2为同一例) LSAB法×200
, 百拇医药
图4 HCV-NS5(+)，肝细胞浆内阳性物质呈颗粒状 LSAB法×200
二、干扰素治疗后组织内抗原表达的变化
9例经干扰素治疗半年后，第二次肝穿组织内1或多项抗原转阴或减弱者4例，维持原状者1例，由阴转阳或阳性细胞数增多者4例。
三、组织内HCAg与血HCV RNA表达的关系
血HCV RNA阳性41份，阴性10份，阳性率80.39%，较组织内抗原阳性率高。同一病例同期血与组织相比，两者关系并不密切，其相互重合性仅占50.98%。血HCV RNA阳性者，18份组织标本未检出抗原；而血HCV RNA阴性者，却有8份组织标本检出1～3种抗原，其中4份血HCV RNA治疗前为阳性，治疗后转阴，但组织内抗原仍为阳性。
四、HCAg阳性细胞的分布及其与病变的关系
, 百拇医药
本组多数标本中HCAg阳性细胞数量少，属“+”，一般散在分布于小叶各处，周围并无明显炎症反应；4份标本属“++”，而“+++”者仅见于1份。阳性细胞呈灶性集聚时，多位于汇管区或由此发出的纤维间隔附近，与碎屑坏死及炎症反应相伴。多种抗原同时阳性而呈灶性分布者，连续片中可找见大致相应的阳性细胞区。本组组织学病变活动度分级大多属轻或中度。不同级别间，HCV抗原单项检出率差别的规律性并不明确，但3种或4种抗原全阳性者在不同分级中的比例则随活动度增高而增多(表2)。经治疗后，第二次肝穿组织病变与抗原表达间的变化并不完全相应，第二次标本病变活动性指数(HAI)降幅最大的2例(各降8和10分)，抗原表达分别由3种全阳性转为全阴或仍维持1种(CP10)阳性，但有3例HAI各降1～3分，而1或2种抗原却由阴转阳。
表2 组织HCAg检出与病变活动度比较 活动度
分级
3种抗原全阳性
, 百拇医药
4种抗原全阳性
例数
阳性数(%)
例数
阳性数(%)
1级
5
0
4
0
2级
33
4(12.12)
, 百拇医药
20
3(15.00)
3级
11
4(36.36)
7
2(28.57)
4级
2
1(50.00)
1
1(100.0)
合计
, http://www.100md.com
51
9(17.65)
32
6(18.75)
讨论 本研究采用单克隆抗体对HCV基因不同区段编码的4种蛋白产物所作特异性定位检测，在标本处理、检测方法和试剂相同的条件下，各种抗原检出率并不一致，其原因固然不能除外样本误差的因素(肝穿组织小、阳性细胞少且分散)，但病毒核苷酸序列变异性大，以致不同区段抗原表达不一可能更为重要。各区段相比，核心区相对保守，同源性在90%以上，而NS3、NS4区变异性大，个体差异也大，检出率不如核心区[4]。NS5相关蛋白为RNA聚合酶[5]，检出率也较高。本试验4种抗原相比，CP10和NS5表达最高，但仍有少数标本单独出现NS3或NS4阳性。因而，为了较准确地反映组织内HCV抗原，最好同时检测几种抗原，尤其是核心区和NS5区。Ballardini等[6]以人多克隆抗体所作同类检测中也得到类似结论。
, 百拇医药
有关HCAg阳性细胞与组织病变的关系文献报道不一[1，7，8]。本组阳性细胞少量散在分布时与病变或组织结构无关，而灶性集聚时，常与汇管区附近的碎屑坏死相伴，提示HCV感染对肝细胞的影响可能是多样性的：有的处于非致病的带毒状态，有的则可能通过细胞免疫反应引起组织损伤。从病变活动分级程度来看，虽然某一种抗原如CP10或NS5在各级病变中的阳性率相差不多，但3或4种抗原同时阳性者，其出现率随着活动程度增高而增多。可见，几种抗原同时呈阳性反应，表明HCV感染量高，或机体免疫反应异常，致使病变活动度高。
文献中对于血清HCV RNA与组织内HCAg的关系，除个别作者外，一般认为两者有关[9，10]。本组血HCV RNA阳性率高于组织内病毒抗原，然而两者重合率仅占半数，血HCV RNA阳性者中，43.90%的组织HCAg阴性；而血HCV RNA阴性者中，80%的组织1或多项HCAg呈阳性。两者不重合的原因可能涉及组织标本取样误差、病毒感染量、病毒复制及释放状况等多方面，有待更多资料积累、分析。值得注意的是4份血HCV RNA阳性者，当治疗后转阴时，组织内HCAg仍为阳性，提示组织内病毒清除晚于血HCV RNA。因而，组织内病毒抗原的检测可以作为病毒感染的辅佐标志，特别在血病毒核酸阴性者中更为重要。
, 百拇医药
(本研究得到上海第二医科大学瑞金医院陆志檬教授及病理教研室庄丽同志的协助，特此志谢)
本实验部分受Roche Research Foundation资助
参考文献
1 Guido M, Thung SN. The value of identifying hepatitis C viurs in liver pathology specimens. Hepatology, 1996,23:376-378.
2 病毒性肝炎防治方案(试行).中华传染病杂志，1995，13：241-247.
3 Knodell RG, Ishak KG, Black WC, et al. Formulation and application of a numerical scoring system for assessing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis. Hepatology, 1981, 1:431-435.
, 百拇医药
4 Cariani E: Heterogeneity of the HCV genome. J Infect Dis, 1991,163:1383-1388.
5 Tsutsumi M, Urashima S, Takada A, et al. Detection of antigens related to HCV RNA encoding the NS5 region in the liver of patients with chronic type C hepatitis. Hepatology, 1994,19:265-272.
6 Ballardini G, Groff P, Giostra F, et al. Hepatocellular codistribution of c100,c33,c22 and NS5 hepatitis C virus antigens detected by using immunopurified polycolnal spontaneous human antibodies. Hepatology, 1995, 21:730-734.
, 百拇医药
7 赵西平，杨东亮，程玉芳，等.丙型肝炎病毒感染者肝组织中病毒相关抗原的表达.中华传染病杂志，1996，14：81-84.
8 Hiramatsu N, Hayashi N, Haruna Y, et al. Immunchistochemical detection of HCV-infected hepatocytes in chronic liver disease with monoclonal antibodies to core, envelope and NS3 region of the hepatitis C virus genome. Hepatology, 1992, 16:306-311.
9 Di Biscenglie AM, Hoofnagle JH, Krawczynski K. Changes in hepatitis C virus antigen in liver with antiviral therapy. Gastroenterology, 1993,105:858-862.
10 Yap SH, Williams M, Vanden OJ, et al. Detection of hepatitis C virus antigen by immunohistochemical staining:a histological markers of hepatitis C virus infection. J Hepatol, 1994,20:275-281.
(收稿：1997-07-29 修回：1998-05-04), 百拇医药
单位：翟为溶 200032 上海医科大学；周侃、姚光弼 上海市静安区中心医院
关键词：慢性肝炎；肝炎病毒，丙型；免疫组织化学
中华传染病杂志990103 【摘要】 目的 研究HCV不同抗原的组织内定位以及与病变和血HCV RNA的关系。方法 51份慢性丙型肝炎肝穿刺组织，免疫组化检测HCVCP10、NS3和NS4，其中32份还检测NS5，同时观察组织学病变和血HCV RNA(RT-PCR法)。结果 HCAg总阳性率>60%。不同抗原阳性率不一，以CP10和NS5为高(各>50%)。阳性细胞数一般较少，散在分布；灶性集聚时，多与碎屑坏死及炎症反应相伴。几种抗原全阳性者组织病变活动度较高。血HCV RNA阳性率80.39%，但血与组织检测结果的重合性仅占50.98%；血阴性者，8/10份组织内检出1或多种抗原。结论 组织内同时检测多种抗原能提高HCAg检出率。
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Localization and comparison of varied HCV antigens in liver tissue
ZHAI Weirong, ZHOU Kan, YAO Guangbi.
Department of Pathology, Shanghai Medical University, Shanghai 200032
【Abstract】 Objective To compare the localizations of varied HCAg in liver tissue and to study their relationship with histopathology and expression of HCV RNA in serum. Methods HCAg CP10, NS3 and NS4 were localized immunohistochemically in 51 liver tissues biopsied from the chronic hepatitis C cases, and NS5 was also detected in 32 of 51 specimens. Histopathologic activity and HCV RNA in serum (RT-PCR) were investigated simultaneously.Results Total positive rate of HCAg was >60%. The frequencies of varied HCAg were different, the highest rate of which was CP10 and NS5 (>50%). The positive cells were usually scattered in most of the specimens. The clustered positive cells were found near the portal tract accompaning with the pieacemeal necrosis and inflammative reaction. The histopathologic activity was higher in the cases with positive results of all HCAg detected. The positive rate of serum HCV RNA was 80.39%. However, the coincident rate of HCV detection in serum and in tissue was only 50.98%, 1 or more HCAg were found to be in 8 specimens among the 10 of negative serum HCV RNA. Conclusion Detection of more kinds of HCAg in the same specimen will raise the positive rate of infected cases.
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【Key words】 Chronic hepatitis Hepatitis C virus Immunohistochemistry
HCV感染肝组织中病毒抗原的免疫组化检测已有不少报道，但因所用抗体不同、组织标本处理及免疫组化方法的差异，组织内抗原阳性率相差较大[1]。本研究采用4种抗-HCV单克隆抗体，对慢性丙型肝炎肝穿刺组织作HCV相关抗原定位比较，并分析它们与血病毒RNA的表达和组织病变间的关系，报道如下。
材料和方法
一、标本来源
1993～1995年间上海市瑞金医院、静安区中心医院、华山医院以及中山医院收治的慢性丙型肝炎患者42例，男26例，女16例，年龄18～50岁。ALT大于正常值2倍以上，血清抗-HCV(Abbott EIA试剂盒)全部阳性，HCV RNA(RT-PCR)阳性37例，阴性5例，肝穿刺活检证实为慢性肝炎。其中9例经干扰素-α2a治疗半年后行第二次肝穿刺活检，同时复查血ALT与HCV RNA。
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肝穿刺组织共51份，经缓冲福尔马林固定，常规石蜡连续切片。HE染色，组织学观察参照慢性肝炎新分类进行分级[2]和组织学活动性指数(HAI)记分[3]。
二、免疫组化染色
采用单克隆抗体、LSAB(DAKO产品)法、DAB显色，在32份标本上分别显示HCV不同基因区段编码的抗原：CP10(抗CP10由中国科学院上海生化研究所崔大敷教授提供)，NS4(抗NS4由中国科学院上海细胞研究所提供)，NS3和NS5(抗NS3和抗NS5为北京医科大学肝炎研究所产品)，另19份标本因切片用完，未能检测NS5，但作其余3项指标检测。以无关单抗取代上述抗体作阴性对照。免疫组化阳性结果作半定量记录：“+”少数散在阳性细胞或灶性分布，后者最密处每高倍视野下≤5个阳性细胞；“++”易见散在或灶性分布，最密处阳性细胞6～20个；“+++”大量散在分布或灶性分布，最密处≥21个阳性细胞。
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结果
一、4种抗原检出情况
4种抗原基本都定位于肝细胞胞浆内，仅个别病例有少量核内着色。阳性反应呈细或粗颗粒状，分散在胞浆内，有时集聚在胞核周围或一侧，少数阳性细胞呈全浆均匀着色(图1～4)。3种(指CP10、NS3和NS4)或4种(指前3种再加NS5)抗原在同一份标本中表达并不完全一致。检测3种抗原的51份标本中，1～3种抗原阳性的31份，总阳性率60.78%，但3种抗原全部阳性的仅9份(17.64%)，全部阴性的20份(39.22%)；检测4种抗原的32份标本中，1～4种抗原阳性的21份，总阳性率65.62%，4种抗原全部阳性的6份(18.75%)，全部阴性的11份(34.38%)。几种抗原相比，CP10和NS5阳性率最高，各达50%以上，NS3次之，NS4最低(表1)。
表1 几种抗原阳性率比较 抗原类型
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阳性数(%)
CP10
51
28(54.90)
NS3
51
19(37.25)
NS4
51
11(21.57)
NS5
32
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16(50.00)
图1 HCV-CP10(+)，阳性反应位于肝细胞浆内(↑)，占据细胞的部分或大部分区 LSAB法×200
图2 HCV-CP10(++)，阳性细胞分布于汇管区附近，大多为胞浆阳性，少数呈胞核阳性(↑) LSAB法×200
图3 HCV-NS4(+++)，汇管区附近有较多阳性细胞，均为胞浆着色(与图2为同一例) LSAB法×200
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图4 HCV-NS5(+)，肝细胞浆内阳性物质呈颗粒状 LSAB法×200
二、干扰素治疗后组织内抗原表达的变化
9例经干扰素治疗半年后，第二次肝穿组织内1或多项抗原转阴或减弱者4例，维持原状者1例，由阴转阳或阳性细胞数增多者4例。
三、组织内HCAg与血HCV RNA表达的关系
血HCV RNA阳性41份，阴性10份，阳性率80.39%，较组织内抗原阳性率高。同一病例同期血与组织相比，两者关系并不密切，其相互重合性仅占50.98%。血HCV RNA阳性者，18份组织标本未检出抗原；而血HCV RNA阴性者，却有8份组织标本检出1～3种抗原，其中4份血HCV RNA治疗前为阳性，治疗后转阴，但组织内抗原仍为阳性。
四、HCAg阳性细胞的分布及其与病变的关系
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本组多数标本中HCAg阳性细胞数量少，属“+”，一般散在分布于小叶各处，周围并无明显炎症反应；4份标本属“++”，而“+++”者仅见于1份。阳性细胞呈灶性集聚时，多位于汇管区或由此发出的纤维间隔附近，与碎屑坏死及炎症反应相伴。多种抗原同时阳性而呈灶性分布者，连续片中可找见大致相应的阳性细胞区。本组组织学病变活动度分级大多属轻或中度。不同级别间，HCV抗原单项检出率差别的规律性并不明确，但3种或4种抗原全阳性者在不同分级中的比例则随活动度增高而增多(表2)。经治疗后，第二次肝穿组织病变与抗原表达间的变化并不完全相应，第二次标本病变活动性指数(HAI)降幅最大的2例(各降8和10分)，抗原表达分别由3种全阳性转为全阴或仍维持1种(CP10)阳性，但有3例HAI各降1～3分，而1或2种抗原却由阴转阳。
表2 组织HCAg检出与病变活动度比较 活动度
分级
3种抗原全阳性
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4种抗原全阳性
例数
阳性数(%)
例数
阳性数(%)
1级
5
0
4
0
2级
33
4(12.12)
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20
3(15.00)
3级
11
4(36.36)
7
2(28.57)
4级
2
1(50.00)
1
1(100.0)
合计
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51
9(17.65)
32
6(18.75)
讨论 本研究采用单克隆抗体对HCV基因不同区段编码的4种蛋白产物所作特异性定位检测，在标本处理、检测方法和试剂相同的条件下，各种抗原检出率并不一致，其原因固然不能除外样本误差的因素(肝穿组织小、阳性细胞少且分散)，但病毒核苷酸序列变异性大，以致不同区段抗原表达不一可能更为重要。各区段相比，核心区相对保守，同源性在90%以上，而NS3、NS4区变异性大，个体差异也大，检出率不如核心区[4]。NS5相关蛋白为RNA聚合酶[5]，检出率也较高。本试验4种抗原相比，CP10和NS5表达最高，但仍有少数标本单独出现NS3或NS4阳性。因而，为了较准确地反映组织内HCV抗原，最好同时检测几种抗原，尤其是核心区和NS5区。Ballardini等[6]以人多克隆抗体所作同类检测中也得到类似结论。
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有关HCAg阳性细胞与组织病变的关系文献报道不一[1，7，8]。本组阳性细胞少量散在分布时与病变或组织结构无关，而灶性集聚时，常与汇管区附近的碎屑坏死相伴，提示HCV感染对肝细胞的影响可能是多样性的：有的处于非致病的带毒状态，有的则可能通过细胞免疫反应引起组织损伤。从病变活动分级程度来看，虽然某一种抗原如CP10或NS5在各级病变中的阳性率相差不多，但3或4种抗原同时阳性者，其出现率随着活动程度增高而增多。可见，几种抗原同时呈阳性反应，表明HCV感染量高，或机体免疫反应异常，致使病变活动度高。
文献中对于血清HCV RNA与组织内HCAg的关系，除个别作者外，一般认为两者有关[9，10]。本组血HCV RNA阳性率高于组织内病毒抗原，然而两者重合率仅占半数，血HCV RNA阳性者中，43.90%的组织HCAg阴性；而血HCV RNA阴性者中，80%的组织1或多项HCAg呈阳性。两者不重合的原因可能涉及组织标本取样误差、病毒感染量、病毒复制及释放状况等多方面，有待更多资料积累、分析。值得注意的是4份血HCV RNA阳性者，当治疗后转阴时，组织内HCAg仍为阳性，提示组织内病毒清除晚于血HCV RNA。因而，组织内病毒抗原的检测可以作为病毒感染的辅佐标志，特别在血病毒核酸阴性者中更为重要。
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(本研究得到上海第二医科大学瑞金医院陆志檬教授及病理教研室庄丽同志的协助，特此志谢)
本实验部分受Roche Research Foundation资助
参考文献
1 Guido M, Thung SN. The value of identifying hepatitis C viurs in liver pathology specimens. Hepatology, 1996,23:376-378.
2 病毒性肝炎防治方案(试行).中华传染病杂志，1995，13：241-247.
3 Knodell RG, Ishak KG, Black WC, et al. Formulation and application of a numerical scoring system for assessing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis. Hepatology, 1981, 1:431-435.
, 百拇医药
4 Cariani E: Heterogeneity of the HCV genome. J Infect Dis, 1991,163:1383-1388.
5 Tsutsumi M, Urashima S, Takada A, et al. Detection of antigens related to HCV RNA encoding the NS5 region in the liver of patients with chronic type C hepatitis. Hepatology, 1994,19:265-272.
6 Ballardini G, Groff P, Giostra F, et al. Hepatocellular codistribution of c100,c33,c22 and NS5 hepatitis C virus antigens detected by using immunopurified polycolnal spontaneous human antibodies. Hepatology, 1995, 21:730-734.
, 百拇医药
7 赵西平，杨东亮，程玉芳，等.丙型肝炎病毒感染者肝组织中病毒相关抗原的表达.中华传染病杂志，1996，14：81-84.
8 Hiramatsu N, Hayashi N, Haruna Y, et al. Immunchistochemical detection of HCV-infected hepatocytes in chronic liver disease with monoclonal antibodies to core, envelope and NS3 region of the hepatitis C virus genome. Hepatology, 1992, 16:306-311.
9 Di Biscenglie AM, Hoofnagle JH, Krawczynski K. Changes in hepatitis C virus antigen in liver with antiviral therapy. Gastroenterology, 1993,105:858-862.
10 Yap SH, Williams M, Vanden OJ, et al. Detection of hepatitis C virus antigen by immunohistochemical staining:a histological markers of hepatitis C virus infection. J Hepatol, 1994,20:275-281.
(收稿：1997-07-29 修回：1998-05-04), 百拇医药