内毒素脂多糖等方法刺激大鼠牙髓的组织病理学反应
作者：余 擎 吴补领 肖明振 史俊南 陆 群
单位：第四军医大学口腔医学院，陕西 西安 710032
关键词：内毒素脂多糖；牙髓炎；大鼠
牙体牙髓牙周病学杂志CHINESE JOURNAL OF CONSERVATIVE DENTISTRY1999年 第9卷 第1期 Vol 摘要 目的：采用单纯开放和LPS诱导等方法建立大鼠磨牙实验性牙髓炎模型，并对它们进行比较和评价。方法：充分利用大鼠磨牙，采用单纯开放法和LPS涂布大鼠磨牙牙髓的方法，分别观察牙髓在几种不同刺激条件下的组织病理学反应。结果：几种方法均能成功地造成牙髓炎症，同一时间LPS开放组炎症最重，进展最快，在1周内各组炎症随时间的推移不断发展。结论：单纯开放和LPS诱导均能成功地建立大鼠牙髓炎模型，联合运用可在较短的时间内造成牙髓炎症，提示应该根据不同的实验目的和需求选用不同的建模方法。
, http://www.100md.com
中图号：R780.2 文献标识码：A 文章编号：1005-2593(1999)01-0049-03
[牙体牙髓牙周病学杂志，1999，9(1)：49]
The histopathological study on the pulpal response to applicationof Lipopolysaccharide to the pulps of rats
Yu Qing, Wu Buling, Xiao Mingzhen et al
School of Stomatology, The Fourth Military Medical University, Xi'an 710032
Abstract Aim: To establish and investigate the models of pulpitis by application of Lipopolysaccharide(LPS) and so on. Methods: Sixteen rat molars by application of LPS were removed from the jaws after 24h、72h、120h and 168h respectively. They were stained with Hematoxylin-Eosin and observed under microscope. Results: The acute supprative inflammation was observed in the pulps by application of all kinds of methods. The pulps exposed by LPS were the most typical pulpitis in the same time. Conclutions: The models of rat pulpitis could be established by all kinds of methods. We had better choice different methods according to different aims.
, 百拇医药
Key words Lipopolysaccharide；pulpitis；rat
[Chinese Journal of Conservative Dentistry, 1999,9(1):49]
关于大鼠磨牙实验性牙髓炎动物模型的建立，国内外学者较多采用的方法是单纯穿髓开放法和内毒素脂多糖(LPS)诱导法。尽管两者均能满足各自的实验需求，但前者影响因素颇多，而后者则因LPS来源、使用浓度等不同而差异较大。本研究通过几种方法的比较为研究细胞凋亡在实验性牙髓炎中的作用奠定基础。
1 材料和方法
1.1 实验动物和主要试剂
上海产SD大鼠16只，雄性，体重200～220g(购自本校动物中心)。
, 百拇医药
LPS溶液：12×106U/L, 中国药品生物制品鉴定所。用生理盐水将其稀释至5g/L，过滤除菌备用。
1.2 方法
根据不同的处死时间将16只大鼠随机分为4组，每组4只，即1d组、3d组、5d组和7d组。846液(0.25ml/kg)肌注麻醉后仰卧固定，以750ml/L乙醇消毒双侧上下颌磨牙区，在双侧上颌第一、第二磨牙面和双侧下颌第一磨牙面轻轻开髓，暴露穿髓点，B区和D区牙的穿髓点稍作扩大。A区第一、第二磨牙穿髓点处置饱蘸LPS溶液的小棉球，B区第一磨牙置相同大小的生理盐水棉球，第二磨牙开放，4个牙同时作用30min后，去除棉球，用无菌棉球擦干牙面，玻璃离子水门汀暂封。C区第一磨牙穿髓后立即置饱蘸LPS溶液的小棉球开放；D区同名牙则置相同大小的生理盐水棉球开放。各组鼠分别于1、3、5、7d后麻醉下放血处死，40g/L多聚甲醛固定液心内灌注30min，切取双侧磨牙区再固定12h，尔后经甲酸-甲酸钠溶液脱钙1周，系列乙醇脱水，二甲苯置换至石蜡包埋。各标本作3μm厚的石蜡切片，HE染色，光镜观察。
, 百拇医药
2 结果
2.1 处理1d(图1)
A区LPS组镜下可见穿髓点下方呈现以中性粒细胞浸润为主的急性浆液性炎症反应，局部充血，成牙本质细胞层紊乱、变性，部分牙髓变性坏死，根髓基本正常。B区生理盐水组和空白对照组与LPS组病理像基本相同。
图1 LPS处理1d，牙髓呈急性浆液性炎症反应(10×10)
C区LPS开放组和D区单纯开放组的病理像也与之相似，表现为急性浆液性炎症反应。
2.2 处理3d(图2)
A区LPS组出现以穿髓点为中心的坏死区，周围有大量粒细胞和部分单核-巨噬细胞浸润，偶见淋巴细胞。炎细胞浸润区周围可见少量纤维组织包饶，成纤维细胞增生，部分细胞呈环状排列。根髓小血管明显扩张，但成牙本质细胞排列基本正常，无炎细胞浸润。B区生理盐水组和空白对照组与LPS组病理像基本相同。
, 百拇医药
图2 开放3d，大量炎细胞浸润 (10×10)
C区LPS开放组和D区单纯开放组的病理像也与之相似，只是LPS开放组炎症较重，表现在坏死区范围广泛，大量炎细胞浸润且聚集成团，根髓血管扩张明显，炎细胞浸润区和充血反应区之间无明显分界，偶见少量成纤维细胞增生。
2.3 处理5d(图3)
4个区处理牙的炎症反应加重，表现在冠髓部分坏死，有的有微脓肿形成；冠髓内大量弥散性炎细胞浸润，以粒细胞、多核巨细胞为主，可见少量的淋巴细胞；根管口附近可见纤维组织包饶炎细胞浸润区，成纤维细胞呈环状排列；根髓血管扩张，成牙本质细胞排列紊乱。此时4个区中C区LPS开放组炎症最重，D区单纯开放组和A区LPS组的组织病理像相近，B区生理盐水组和空白对照组的炎症最轻。
, 百拇医药
图3 LPS开放5d，冠髓部分坏死, 根髓炎症 (10×10)
2.4 处理7d(图4)
坏死区已扩展到1/3～1/2冠髓，整个冠髓被大量的炎细胞占据，其中淋巴细胞的组成逐渐增多，根髓内亦有炎细胞浸润，细胞间纤维成分增多，呈半环状包饶炎细胞浸润区，只有近根尖1/3的牙髓正常，偶见少量修复性牙本质形成。此时B区生理盐水组和空白对照组炎症明显轻于A区LPS处理组，4个区中C区LPS开放组炎症仍最重。
图4 LPS处理7d，根髓炎症 (10×10)
3 讨论
本组实验运用单纯开放法、LPS化学诱导法及两者交叉联合的方法，均成功地诱导产生了大鼠实验性牙髓炎，结果显示：A区LPS处理组和D区单纯开放组的牙髓组织病理学变化分别与侯本祥[1]和郭希民[2]的研究结果相符，说明这两种方法仍是目前较常用的建立大鼠牙髓炎模型的方法，能满足不同实验的需要。
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理论上讲牙髓是否造成损伤，取决于内因和外因两方面因素。内因主要包括牙髓的免疫防御能力和牙髓组织的解剖生理特点；外因则包括刺激的形式、强度和作用时间等。本实验研究对象选用同一只大鼠口内四个区的同名牙，穿髓部位、方法和深度又基本相同，这样就使得影响牙髓是否造成损伤的内因基本上保持一致，着重研究不同的外因情况下对牙髓的影响，减少了系统误差。同时，在实验设计上我们把外因又进行了细分，即持续开放(D区第一磨牙)、开放30min(B区第一磨牙)、LPS持续作用(C区第一磨牙)、LPS作用30min(A区第一磨牙)，结果表明两种形式只需1d均能造成牙髓炎症，在1周内刺激作用时间与炎症发展的强度基本成正相关，其中C区LPS开放组由于刺激最大，同一时间点的炎症反应最重，提示应该根据不同的实验目的和需求选用不同的建模方法。
根据预实验的结果和侯本祥、郭希民的报道[1，2]，我们选取了1、3、5、7d四个时间点，结果均出现了典型的牙髓炎症，显示了炎症发生发展的全过程。坏死区、炎细胞浸润区、纤维增生包饶区和充血反应区随时间的推移依次发生发展，层次分明，充分展示了牙髓在外界刺激下的炎症反应过程和牙髓自身的防御修复潜能，为牙髓炎的研究提供了良好的实验模型，为探讨牙髓炎的病理机制和各种因素在牙髓炎发生发展中的作用奠定了基础。
参考文献
1 侯本祥，史俊南，丰泽悟 等. 内毒素脂多糖刺激大鼠牙髓的组织病理学反应. 牙体牙髓牙周病学杂志. 1997，7(1)：12
2 郭希民. 白细胞介素-8在牙髓、尖周和牙周疾病中作用机理的实验研究：[学位论文] 西安：第四军医大学口腔医学院，1997. 36
收稿日期：1998-10-12
修回日期：1998-12-20, http://www.100md.com
单位：第四军医大学口腔医学院，陕西 西安 710032
关键词：内毒素脂多糖；牙髓炎；大鼠
牙体牙髓牙周病学杂志CHINESE JOURNAL OF CONSERVATIVE DENTISTRY1999年 第9卷 第1期 Vol 摘要 目的：采用单纯开放和LPS诱导等方法建立大鼠磨牙实验性牙髓炎模型，并对它们进行比较和评价。方法：充分利用大鼠磨牙，采用单纯开放法和LPS涂布大鼠磨牙牙髓的方法，分别观察牙髓在几种不同刺激条件下的组织病理学反应。结果：几种方法均能成功地造成牙髓炎症，同一时间LPS开放组炎症最重，进展最快，在1周内各组炎症随时间的推移不断发展。结论：单纯开放和LPS诱导均能成功地建立大鼠牙髓炎模型，联合运用可在较短的时间内造成牙髓炎症，提示应该根据不同的实验目的和需求选用不同的建模方法。
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中图号：R780.2 文献标识码：A 文章编号：1005-2593(1999)01-0049-03
[牙体牙髓牙周病学杂志，1999，9(1)：49]
The histopathological study on the pulpal response to applicationof Lipopolysaccharide to the pulps of rats
Yu Qing, Wu Buling, Xiao Mingzhen et al
School of Stomatology, The Fourth Military Medical University, Xi'an 710032
Abstract Aim: To establish and investigate the models of pulpitis by application of Lipopolysaccharide(LPS) and so on. Methods: Sixteen rat molars by application of LPS were removed from the jaws after 24h、72h、120h and 168h respectively. They were stained with Hematoxylin-Eosin and observed under microscope. Results: The acute supprative inflammation was observed in the pulps by application of all kinds of methods. The pulps exposed by LPS were the most typical pulpitis in the same time. Conclutions: The models of rat pulpitis could be established by all kinds of methods. We had better choice different methods according to different aims.
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Key words Lipopolysaccharide；pulpitis；rat
[Chinese Journal of Conservative Dentistry, 1999,9(1):49]
关于大鼠磨牙实验性牙髓炎动物模型的建立，国内外学者较多采用的方法是单纯穿髓开放法和内毒素脂多糖(LPS)诱导法。尽管两者均能满足各自的实验需求，但前者影响因素颇多，而后者则因LPS来源、使用浓度等不同而差异较大。本研究通过几种方法的比较为研究细胞凋亡在实验性牙髓炎中的作用奠定基础。
1 材料和方法
1.1 实验动物和主要试剂
上海产SD大鼠16只，雄性，体重200～220g(购自本校动物中心)。
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LPS溶液：12×106U/L, 中国药品生物制品鉴定所。用生理盐水将其稀释至5g/L，过滤除菌备用。
1.2 方法
根据不同的处死时间将16只大鼠随机分为4组，每组4只，即1d组、3d组、5d组和7d组。846液(0.25ml/kg)肌注麻醉后仰卧固定，以750ml/L乙醇消毒双侧上下颌磨牙区，在双侧上颌第一、第二磨牙面和双侧下颌第一磨牙面轻轻开髓，暴露穿髓点，B区和D区牙的穿髓点稍作扩大。A区第一、第二磨牙穿髓点处置饱蘸LPS溶液的小棉球，B区第一磨牙置相同大小的生理盐水棉球，第二磨牙开放，4个牙同时作用30min后，去除棉球，用无菌棉球擦干牙面，玻璃离子水门汀暂封。C区第一磨牙穿髓后立即置饱蘸LPS溶液的小棉球开放；D区同名牙则置相同大小的生理盐水棉球开放。各组鼠分别于1、3、5、7d后麻醉下放血处死，40g/L多聚甲醛固定液心内灌注30min，切取双侧磨牙区再固定12h，尔后经甲酸-甲酸钠溶液脱钙1周，系列乙醇脱水，二甲苯置换至石蜡包埋。各标本作3μm厚的石蜡切片，HE染色，光镜观察。
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2 结果
2.1 处理1d(图1)
A区LPS组镜下可见穿髓点下方呈现以中性粒细胞浸润为主的急性浆液性炎症反应，局部充血，成牙本质细胞层紊乱、变性，部分牙髓变性坏死，根髓基本正常。B区生理盐水组和空白对照组与LPS组病理像基本相同。
图1 LPS处理1d，牙髓呈急性浆液性炎症反应(10×10)
C区LPS开放组和D区单纯开放组的病理像也与之相似，表现为急性浆液性炎症反应。
2.2 处理3d(图2)
A区LPS组出现以穿髓点为中心的坏死区，周围有大量粒细胞和部分单核-巨噬细胞浸润，偶见淋巴细胞。炎细胞浸润区周围可见少量纤维组织包饶，成纤维细胞增生，部分细胞呈环状排列。根髓小血管明显扩张，但成牙本质细胞排列基本正常，无炎细胞浸润。B区生理盐水组和空白对照组与LPS组病理像基本相同。
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图2 开放3d，大量炎细胞浸润 (10×10)
C区LPS开放组和D区单纯开放组的病理像也与之相似，只是LPS开放组炎症较重，表现在坏死区范围广泛，大量炎细胞浸润且聚集成团，根髓血管扩张明显，炎细胞浸润区和充血反应区之间无明显分界，偶见少量成纤维细胞增生。
2.3 处理5d(图3)
4个区处理牙的炎症反应加重，表现在冠髓部分坏死，有的有微脓肿形成；冠髓内大量弥散性炎细胞浸润，以粒细胞、多核巨细胞为主，可见少量的淋巴细胞；根管口附近可见纤维组织包饶炎细胞浸润区，成纤维细胞呈环状排列；根髓血管扩张，成牙本质细胞排列紊乱。此时4个区中C区LPS开放组炎症最重，D区单纯开放组和A区LPS组的组织病理像相近，B区生理盐水组和空白对照组的炎症最轻。
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图3 LPS开放5d，冠髓部分坏死, 根髓炎症 (10×10)
2.4 处理7d(图4)
坏死区已扩展到1/3～1/2冠髓，整个冠髓被大量的炎细胞占据，其中淋巴细胞的组成逐渐增多，根髓内亦有炎细胞浸润，细胞间纤维成分增多，呈半环状包饶炎细胞浸润区，只有近根尖1/3的牙髓正常，偶见少量修复性牙本质形成。此时B区生理盐水组和空白对照组炎症明显轻于A区LPS处理组，4个区中C区LPS开放组炎症仍最重。
图4 LPS处理7d，根髓炎症 (10×10)
3 讨论
本组实验运用单纯开放法、LPS化学诱导法及两者交叉联合的方法，均成功地诱导产生了大鼠实验性牙髓炎，结果显示：A区LPS处理组和D区单纯开放组的牙髓组织病理学变化分别与侯本祥[1]和郭希民[2]的研究结果相符，说明这两种方法仍是目前较常用的建立大鼠牙髓炎模型的方法，能满足不同实验的需要。
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理论上讲牙髓是否造成损伤，取决于内因和外因两方面因素。内因主要包括牙髓的免疫防御能力和牙髓组织的解剖生理特点；外因则包括刺激的形式、强度和作用时间等。本实验研究对象选用同一只大鼠口内四个区的同名牙，穿髓部位、方法和深度又基本相同，这样就使得影响牙髓是否造成损伤的内因基本上保持一致，着重研究不同的外因情况下对牙髓的影响，减少了系统误差。同时，在实验设计上我们把外因又进行了细分，即持续开放(D区第一磨牙)、开放30min(B区第一磨牙)、LPS持续作用(C区第一磨牙)、LPS作用30min(A区第一磨牙)，结果表明两种形式只需1d均能造成牙髓炎症，在1周内刺激作用时间与炎症发展的强度基本成正相关，其中C区LPS开放组由于刺激最大，同一时间点的炎症反应最重，提示应该根据不同的实验目的和需求选用不同的建模方法。
根据预实验的结果和侯本祥、郭希民的报道[1，2]，我们选取了1、3、5、7d四个时间点，结果均出现了典型的牙髓炎症，显示了炎症发生发展的全过程。坏死区、炎细胞浸润区、纤维增生包饶区和充血反应区随时间的推移依次发生发展，层次分明，充分展示了牙髓在外界刺激下的炎症反应过程和牙髓自身的防御修复潜能，为牙髓炎的研究提供了良好的实验模型，为探讨牙髓炎的病理机制和各种因素在牙髓炎发生发展中的作用奠定了基础。
参考文献
1 侯本祥，史俊南，丰泽悟 等. 内毒素脂多糖刺激大鼠牙髓的组织病理学反应. 牙体牙髓牙周病学杂志. 1997，7(1)：12
2 郭希民. 白细胞介素-8在牙髓、尖周和牙周疾病中作用机理的实验研究：[学位论文] 西安：第四军医大学口腔医学院，1997. 36
收稿日期：1998-10-12
修回日期：1998-12-20, http://www.100md.com