近视Ⅲ号方对气虚大鼠环核苷酸的影响
作者：黄仲委 刘煜 余杨桂
单位：广州中医药大学第一附属医院眼科(广州510405)
关键词：气虚；大鼠；cAMP；cGMP；中药
中国中医眼科杂志990103 摘要 目的：探讨近视Ⅲ号方对气虚血滞高度近视黄斑病变的作用机理。方法：选用12月龄大鼠，随机分成4组。模型组用大剂量生大黄煎剂灌胃，治疗组分别用小剂量及大剂量近视Ⅲ号方加生大黄煎剂灌胃，空白对照组灌生理盐水，20天后分别取大鼠血浆和眼球视网膜，测定其cAMP、cGMP含量。结果：模型组cAMP、cAMP/cGMP均低于空白对照组( P<0.05 )，而治疗组之大剂量组与空白对照组之间则无显著性差异( P>0.05)。结论：近视Ⅲ号方能促使气虚大鼠cAMP、cAMP/cGMP升高，并具有补脾益气的作用。
Experimental study on effect of jinshifangⅢ(近视Ⅲ号方) on cyclonucleotide in the rats with deficiency of qi (气虚) Huang Zhongwei， LiuYu， Yu Yanggui. Department of Ophthalmology, The First Affiliated Hospital of Guangzhou Traditional Chinese Medicine University
, 百拇医药
Key words deficiency of qi(气虚) rat cAMP cGMP traditional Chinese
medicine
Abstract OBJECTIVE: To study the mechanism of jinshifang Ⅲ(近视Ⅲ号方) on maculopathy in high myopia with deficiency of qi(气虚) and blood stasis. METHODS: The 12 months old rats were divided into 4 groups randomly. The rats of model group were administered with raw rhubarb decoction, while the rats of treated groups were administered respectively with large dose and small dose jinshifang Ⅲ decoction when raw rhubarb decoction also was administered, and the rats of control group were administered with normal saline. After these trials had been performed for 20 days, the levels of cAMP and cGMP were determined in rat blood plasma and retina. RESULTS: The levels of cAMP and cAMP/cGMP in model group were lower than that of control group ( P<0.05 ), while there was not significant difference between the treated group with large dose and normal control group (P>0.05). CONCLUSIONS: Jinshifang Ⅲ can raise the levels of cAMP and cAMP/cGMP in the rats with deficiency of qi.
, 百拇医药
近视Ⅲ号方是我们自拟用于治疗高度近视黄斑病变的方剂，经临床应用已取得一定疗效。我们对高度近视黄斑病变的病机辨证为气虚血滞。用生大黄煎剂灌饲大鼠以制造气虚大鼠模型。环核苷酸与气虚的关系亦有文献报告，本实验以环核苷酸为观察指标，旨在通过其变化以反映近视Ⅲ号方的补脾益气作用。
1 材料与方法
1.1 实验材料
动物：由广东省卫生厅动物场提供的12月龄SD大鼠，雌雄兼有，体重400～500g。
药物：①大黄煎剂：用水浸泡切碎后的生大黄(由本院中心药房提供)煮沸10min，纱布过滤，80℃水浴浓缩成200%煎剂。②近视Ⅲ号方药物组成：党参 黄芪 枸杞子 丹参 三七等。将药物水煎三次后合并药液过滤，浓缩成100%及200%煎剂。以上制剂皆由本院制剂师指导配制。
, http://www.100md.com 主要试剂：cAMP、cGMP试剂盒由上海中医药大学提供。
主要设备：FJ-2008自动γ闪烁仪，上海产高速低温冷冻离心机。
1.2 实验方法
1.2.1 动物分组：将实验用大鼠按体重随机分为4组，每织7只，即空白对照组、模型组、小剂量中药组及大剂量中药组。
1.2.2 给药方法：灌胃。空白对照组灌生理盐水2ml/hg，模型组灌生大黄煎剂1ml/hg，小剂量中药组灌生大黄煎剂1ml/hg加100%近视Ⅲ号方1ml/hg，大剂量中药组灌生大黄煎剂1ml/hg加200%近视Ⅲ号方1ml/hg，以上皆分二次灌胃，连续20d。
1.2.3 血浆cAMP、cGMP测定：采用传统方法。经眼眶取血，采抗凝血后加无水乙醇2ml，置离心机以3000r/min离心10min，取上清液，再加75%乙醇于剩余液体中，同前法离心后取上清液，合并两次上清液，按cAMP和cGMP试剂盒说明进行操作。
, http://www.100md.com
1.2.4 眼球cAMP和cGMP测定：摘取大鼠眼球，显微镜下分离视网膜，用组织天平称重后，加1ml50mM醋酸缓冲液，置匀浆器中匀浆，高速离心(3500r/min)15min，取上清液，同上法测定cAMP和cGMP。
2 结果
灌药后模型组大鼠有便溏、纳差、体毛稀疏脱落、萎糜、消瘦、体重明显下降等症，空白对照组无异常变化，且体重增加，认为气虚大鼠模型造模成功〔1〕。
2.1 血浆环核苷酸含量的比较
各组cGMP含量无统计学差异。模型组cAMP、cAMP/cGMP均低于空白对照组，经t检验P值分别<0.05或<0.01。小剂量中药组cAMP、cAMP/cGMP与模型组相比无统计学差异(P>0.05)，而大剂量中药组则有显著性差异，说明近视Ⅲ号方具有提高大鼠cAMP作用，但其作用与剂量有关(见表1)。
, http://www.100md.com
表1 大鼠血浆环核苷酸含量比较(pmol/ml,
±s) 组 别
cAMP
cGMP
cAMP/cGMP
(1)空白对照组
61.47±16.53
19.39±6.23
3.32±0.90
(2)模型组
39.67±10.78
, 百拇医药
22.71±7.50
1.90±0.78
(3)小剂量中药组
43.10±8.63
21.03±8.23
2.31±0.90
(4)大剂量中药组
63.50±19.02
20.68±7.11
3.29±1.23
t值 (1)∶(2)
, 百拇医药 2.923
0.901
3.129
(1)∶(3)
2.606
0.421
2.080
(1)∶(4)
0.206
0.286
0.09
(2)∶(3)
0.657
, http://www.100md.com
0.399
0.941
(2)∶(4)
2.838
0.425
2.4529
P值 (1)∶(2)
<0.02
>0.05
<0.01
(1)∶(3)
<0.05
, http://www.100md.com >0.05
>0.05
(1)∶(4)
>0.05
>0.05
>0.05
(2)∶(3)
>0.05
>0.05
>0.05
(2)∶(4)
<0.02
>0.05
, 百拇医药
<0.05
2.2 大鼠眼球视网膜环核苷酸含量的比较
各组cGMP含量无显著差异。模型组cAMP、cAMP/cGMP与空白对照相比有显著性差异，P值分别<0.05及<0.01，进一步证明造模是成功的。而大、小剂量中药组与空白对照组相比皆无统计学差异(P>0.05)，且大剂量组cAMP、cAMP/cGMP与模型组相比有显著性差异，P值分别<0.01及0.05，说明近视Ⅲ号方有提高大鼠视网膜组织的cAMP的作用，并同样与灌服剂量有关，(见表2)。表2 大鼠视网膜组织环核苷酸含量比较(pmol/100mg;±s) 组 别
cAMP
cGMP
cAMP/cGMP
, http://www.100md.com
(1)空白对照组
4.00±0.68
1.33±0.75
4.71±1.15
(2)模型组
3.24±0.37
1.50±0.95
2.06±0.94
(3)小剂量中药组
3.85±0.97
1.48±0.81
2.74±1.47
, 百拇医药
(4)大剂量中药组
4.28±0.74
1.34±0.30
3.55±1.06
t值 (1)∶(2)
2.438
0.462
3.060
(1)∶(3)
0.335
0.362
1.730
, 百拇医药
(1)∶(4)
0.713
0.028
1.298
(2)∶(3)
1.442
0.128
0.870
(2)∶(4)
3.070
0.646
2.508
P值 (1)∶(2)
, 百拇医药
<0.05
>0.05
<0.01
(1)∶(3)
>0.05
>0.05
>0.05
(1)∶(4)
>0.05
>0.05
>0.05
(2)∶(3)
>0.05
, 百拇医药
>0.05
>0.05
(2)∶(4)
<0.01
>0.05
<0.05
3 讨论
根据临床实践，我们认为高度近视黄斑病变基本病机为气虚血滞。因此拟近视Ⅲ号方不仅为补虚而设，并有泻实作用，以达到标本兼治的目的。该方在临床上已取得初步疗效，为进一步从药效学来验证中医对高度近视黄斑病变病机的认识，故选用自然衰老的12月龄SD大鼠进行实验。鉴于目前对高度近视黄斑病变动物模型制备的困难，只能按病机需要制造气虚模型，除采用大黄煎剂灌服外，并有意选取自然衰老的12月龄SD大鼠，以求更接近体衰、气虚的要求〔1〕。气虚时血浆及局部组织cAMP含量下降，cAMP/cGMP的比值下降〔2〕。我们的实验结果显示，模型组大鼠cAMP、cAMP/cGMP均明显低于空白对照组，且有便溏、萎糜、体重下降等症状。因此认为气虚模型的造模是成功的，在此基础上对近视Ⅲ号方的观察结果是客观可信的。结果表明，大鼠血浆及视网膜组织的改变基本同步，对比模型组，灌服近视Ⅲ号方的大鼠血浆及视网膜cAMP含量增高，cAMP/cGMP比值升高，大剂量灌服组改变更明显，说明近视Ⅲ号方对气虚大鼠有健脾益气作用。表1、表2中标准差较大者可能与样本例数少有关。大剂量组的血浆及视网膜组织cAMP含量高于空白对照组，但cAMP/cGMP却低于空白对照组。尽管差异均无显著性，这不排除由于样本数偏少的因素，亦与近视Ⅲ号方并非纯补气虚，而是补虚泻实相兼的组方立意相符。试验结果亦为今后对该方的药物作进一步筛选与组合作出良好提示。
参考文献
[1] 黄吉堂. 论气，中医学的最高范畴. 新中医，1989，(1)：2
[2] 王建华. 医林荟萃. 广州：广东高等教育出版社，1994. 4
收稿：1998-06-08；修回：1998-08-18, http://www.100md.com
单位：广州中医药大学第一附属医院眼科(广州510405)
关键词：气虚；大鼠；cAMP；cGMP；中药
中国中医眼科杂志990103 摘要 目的：探讨近视Ⅲ号方对气虚血滞高度近视黄斑病变的作用机理。方法：选用12月龄大鼠，随机分成4组。模型组用大剂量生大黄煎剂灌胃，治疗组分别用小剂量及大剂量近视Ⅲ号方加生大黄煎剂灌胃，空白对照组灌生理盐水，20天后分别取大鼠血浆和眼球视网膜，测定其cAMP、cGMP含量。结果：模型组cAMP、cAMP/cGMP均低于空白对照组( P<0.05 )，而治疗组之大剂量组与空白对照组之间则无显著性差异( P>0.05)。结论：近视Ⅲ号方能促使气虚大鼠cAMP、cAMP/cGMP升高，并具有补脾益气的作用。
Experimental study on effect of jinshifangⅢ(近视Ⅲ号方) on cyclonucleotide in the rats with deficiency of qi (气虚) Huang Zhongwei， LiuYu， Yu Yanggui. Department of Ophthalmology, The First Affiliated Hospital of Guangzhou Traditional Chinese Medicine University
, 百拇医药
Key words deficiency of qi(气虚) rat cAMP cGMP traditional Chinese
medicine
Abstract OBJECTIVE: To study the mechanism of jinshifang Ⅲ(近视Ⅲ号方) on maculopathy in high myopia with deficiency of qi(气虚) and blood stasis. METHODS: The 12 months old rats were divided into 4 groups randomly. The rats of model group were administered with raw rhubarb decoction, while the rats of treated groups were administered respectively with large dose and small dose jinshifang Ⅲ decoction when raw rhubarb decoction also was administered, and the rats of control group were administered with normal saline. After these trials had been performed for 20 days, the levels of cAMP and cGMP were determined in rat blood plasma and retina. RESULTS: The levels of cAMP and cAMP/cGMP in model group were lower than that of control group ( P<0.05 ), while there was not significant difference between the treated group with large dose and normal control group (P>0.05). CONCLUSIONS: Jinshifang Ⅲ can raise the levels of cAMP and cAMP/cGMP in the rats with deficiency of qi.
, 百拇医药
近视Ⅲ号方是我们自拟用于治疗高度近视黄斑病变的方剂，经临床应用已取得一定疗效。我们对高度近视黄斑病变的病机辨证为气虚血滞。用生大黄煎剂灌饲大鼠以制造气虚大鼠模型。环核苷酸与气虚的关系亦有文献报告，本实验以环核苷酸为观察指标，旨在通过其变化以反映近视Ⅲ号方的补脾益气作用。
1 材料与方法
1.1 实验材料
动物：由广东省卫生厅动物场提供的12月龄SD大鼠，雌雄兼有，体重400～500g。
药物：①大黄煎剂：用水浸泡切碎后的生大黄(由本院中心药房提供)煮沸10min，纱布过滤，80℃水浴浓缩成200%煎剂。②近视Ⅲ号方药物组成：党参 黄芪 枸杞子 丹参 三七等。将药物水煎三次后合并药液过滤，浓缩成100%及200%煎剂。以上制剂皆由本院制剂师指导配制。
, http://www.100md.com 主要试剂：cAMP、cGMP试剂盒由上海中医药大学提供。
主要设备：FJ-2008自动γ闪烁仪，上海产高速低温冷冻离心机。
1.2 实验方法
1.2.1 动物分组：将实验用大鼠按体重随机分为4组，每织7只，即空白对照组、模型组、小剂量中药组及大剂量中药组。
1.2.2 给药方法：灌胃。空白对照组灌生理盐水2ml/hg，模型组灌生大黄煎剂1ml/hg，小剂量中药组灌生大黄煎剂1ml/hg加100%近视Ⅲ号方1ml/hg，大剂量中药组灌生大黄煎剂1ml/hg加200%近视Ⅲ号方1ml/hg，以上皆分二次灌胃，连续20d。
1.2.3 血浆cAMP、cGMP测定：采用传统方法。经眼眶取血，采抗凝血后加无水乙醇2ml，置离心机以3000r/min离心10min，取上清液，再加75%乙醇于剩余液体中，同前法离心后取上清液，合并两次上清液，按cAMP和cGMP试剂盒说明进行操作。
, http://www.100md.com
1.2.4 眼球cAMP和cGMP测定：摘取大鼠眼球，显微镜下分离视网膜，用组织天平称重后，加1ml50mM醋酸缓冲液，置匀浆器中匀浆，高速离心(3500r/min)15min，取上清液，同上法测定cAMP和cGMP。
2 结果
灌药后模型组大鼠有便溏、纳差、体毛稀疏脱落、萎糜、消瘦、体重明显下降等症，空白对照组无异常变化，且体重增加，认为气虚大鼠模型造模成功〔1〕。
2.1 血浆环核苷酸含量的比较
各组cGMP含量无统计学差异。模型组cAMP、cAMP/cGMP均低于空白对照组，经t检验P值分别<0.05或<0.01。小剂量中药组cAMP、cAMP/cGMP与模型组相比无统计学差异(P>0.05)，而大剂量中药组则有显著性差异，说明近视Ⅲ号方具有提高大鼠cAMP作用，但其作用与剂量有关(见表1)。
, http://www.100md.com
表1 大鼠血浆环核苷酸含量比较(pmol/ml,
±s) 组 别cAMP
cGMP
cAMP/cGMP
(1)空白对照组
61.47±16.53
19.39±6.23
3.32±0.90
(2)模型组
39.67±10.78
, 百拇医药
22.71±7.50
1.90±0.78
(3)小剂量中药组
43.10±8.63
21.03±8.23
2.31±0.90
(4)大剂量中药组
63.50±19.02
20.68±7.11
3.29±1.23
t值 (1)∶(2)
, 百拇医药 2.923
0.901
3.129
(1)∶(3)
2.606
0.421
2.080
(1)∶(4)
0.206
0.286
0.09
(2)∶(3)
0.657
, http://www.100md.com
0.399
0.941
(2)∶(4)
2.838
0.425
2.4529
P值 (1)∶(2)
<0.02
>0.05
<0.01
(1)∶(3)
<0.05
, http://www.100md.com >0.05
>0.05
(1)∶(4)
>0.05
>0.05
>0.05
(2)∶(3)
>0.05
>0.05
>0.05
(2)∶(4)
<0.02
>0.05
, 百拇医药
<0.05
2.2 大鼠眼球视网膜环核苷酸含量的比较
各组cGMP含量无显著差异。模型组cAMP、cAMP/cGMP与空白对照相比有显著性差异，P值分别<0.05及<0.01，进一步证明造模是成功的。而大、小剂量中药组与空白对照组相比皆无统计学差异(P>0.05)，且大剂量组cAMP、cAMP/cGMP与模型组相比有显著性差异，P值分别<0.01及0.05，说明近视Ⅲ号方有提高大鼠视网膜组织的cAMP的作用，并同样与灌服剂量有关，(见表2)。表2 大鼠视网膜组织环核苷酸含量比较(pmol/100mg;
±s) 组 别cAMP
cGMP
cAMP/cGMP
, http://www.100md.com
(1)空白对照组
4.00±0.68
1.33±0.75
4.71±1.15
(2)模型组
3.24±0.37
1.50±0.95
2.06±0.94
(3)小剂量中药组
3.85±0.97
1.48±0.81
2.74±1.47
, 百拇医药
(4)大剂量中药组
4.28±0.74
1.34±0.30
3.55±1.06
t值 (1)∶(2)
2.438
0.462
3.060
(1)∶(3)
0.335
0.362
1.730
, 百拇医药
(1)∶(4)
0.713
0.028
1.298
(2)∶(3)
1.442
0.128
0.870
(2)∶(4)
3.070
0.646
2.508
P值 (1)∶(2)
, 百拇医药
<0.05
>0.05
<0.01
(1)∶(3)
>0.05
>0.05
>0.05
(1)∶(4)
>0.05
>0.05
>0.05
(2)∶(3)
>0.05
, 百拇医药
>0.05
>0.05
(2)∶(4)
<0.01
>0.05
<0.05
3 讨论
根据临床实践，我们认为高度近视黄斑病变基本病机为气虚血滞。因此拟近视Ⅲ号方不仅为补虚而设，并有泻实作用，以达到标本兼治的目的。该方在临床上已取得初步疗效，为进一步从药效学来验证中医对高度近视黄斑病变病机的认识，故选用自然衰老的12月龄SD大鼠进行实验。鉴于目前对高度近视黄斑病变动物模型制备的困难，只能按病机需要制造气虚模型，除采用大黄煎剂灌服外，并有意选取自然衰老的12月龄SD大鼠，以求更接近体衰、气虚的要求〔1〕。气虚时血浆及局部组织cAMP含量下降，cAMP/cGMP的比值下降〔2〕。我们的实验结果显示，模型组大鼠cAMP、cAMP/cGMP均明显低于空白对照组，且有便溏、萎糜、体重下降等症状。因此认为气虚模型的造模是成功的，在此基础上对近视Ⅲ号方的观察结果是客观可信的。结果表明，大鼠血浆及视网膜组织的改变基本同步，对比模型组，灌服近视Ⅲ号方的大鼠血浆及视网膜cAMP含量增高，cAMP/cGMP比值升高，大剂量灌服组改变更明显，说明近视Ⅲ号方对气虚大鼠有健脾益气作用。表1、表2中标准差较大者可能与样本例数少有关。大剂量组的血浆及视网膜组织cAMP含量高于空白对照组，但cAMP/cGMP却低于空白对照组。尽管差异均无显著性，这不排除由于样本数偏少的因素，亦与近视Ⅲ号方并非纯补气虚，而是补虚泻实相兼的组方立意相符。试验结果亦为今后对该方的药物作进一步筛选与组合作出良好提示。
参考文献
[1] 黄吉堂. 论气，中医学的最高范畴. 新中医，1989，(1)：2
[2] 王建华. 医林荟萃. 广州：广东高等教育出版社，1994. 4
收稿：1998-06-08；修回：1998-08-18, http://www.100md.com