糖尿病性视网膜病变患者外周血中内皮素和一氧化氮的变化
作者：钟白丽 惠延年
单位：钟白丽(100039 北京，中国人民武装警察部队总医院眼科)；惠延年(第四军医大学西京医院眼科)
关键词：
中华眼科杂志990123 近几年的体外和动物实验证明，高血糖状态下内皮细胞源性收缩与舒张血管的活性物质生成失恒可造成微血管损伤和调节异常。目前认为一氧化氮(nitric oxide, NO)和内皮素(endothelin, ET)是一对重要的局部舒缩血管活性物质。我们检测了Ⅱ型糖尿病患者外周血中ET和亚硝酸盐(nitrire,
)含量(后者反映NO水平)，观察其在血管源性糖尿病性视网膜病变发生、发展各阶段的变化及患者自身某些因素与ET和NO的相关性。
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一、资料与方法
1.临床资料：(1)患者组：39例Ⅱ型糖尿病门诊或住院患者，其中男8例，女21例；平均年龄为(56.9±8.9)岁；病程3个月至20年；除外其他非糖尿病疾患。根据1985年全国第三届眼科学术会议制订的糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)分期标准分组：增殖型(proliferating-DR，PDR)、背景型(background-DR,BDR)、无糖尿病性视网膜病变(non-DR，NDR)组，共3组。(2)对照组：同期住院的15例无系统性疾病的老年性白内障患者，其中男7例，女8例，平均年龄(61.9±10.5)岁。
2.检测方法：(1)血标本：取空腹肘静脉血4 ml，其中2 ml置于含10%依地酸二钠30 μl和抑肽酶40 μl的试管中混匀，离心取血浆，分为2份，-20℃冰箱保存待检。另外2 ml测定血糖。采血同时测量卧位右臂血压，记录年龄、性别及病程等临床资料。(2)ET测定：采用解放军总医院东亚免疫技术研究所提供的ET试剂盒，按其放射免疫测定(radioimmuoassay, RIA)操作程序，使用美国Cap-Ria16型自动γ计数器检测，根据标准曲线直接计算ET含量。(3)NO测定：试剂盒由第四军医大学自由基生物学教研室提供。取室温下复融的血标本上清液20 μl，经去脂肪、去蛋白、离心后加入10 μl 2，3-二氨基萘盐酸生成荧光物质，以NaOH终止反应，加双蒸水3 ml，用日本RF-5000型荧光分光光度计测量标本的荧光强度，间接反映NO稳定的代谢产物亚硝酸盐(
)的含量。(4)统计学处理：采用第四军医大学统计教研室SPLM统计软件进行t检验、方差分析、两两比较及直线相关分析。
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二、结果
1.糖尿病患者血ET含量为(0.13±0.05)1015 g/L，高于对照组(0.10±0.03)1015 g/L，二者差异有显著性(P<0.05)；血含量为72.91±9.65 μmol/L，亦高于对照组50.66±10.41 μmol/L，二者差异有显著性(P<0.01，表1)。
2.与对照组比较，值在PDR组上升24.9%，在BDR及NDR组则分别下降3.1%和40.5%(表1)。
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3.血ET与含量：男性(0.12±0.05)1015 g/L，女性(0.13±0.05)1015 g/L，男女间差异无显著性(P>0.05)。ET含量与血糖呈正相关(r=0.59 134，P=0.00 012)，与病程呈负相关(r=0.491 26，P=0.001 49)，ET与无直线性相关(r=-0.033 33，P=0.812 07，表2)。
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表1 各组患者血中ET与含量比较(
±s)及ET/比值变化 组别
例数
ET
(1015 g/L)*
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(μmol/L)**
ET/
比值
比值升降率
(%)***
PDR组
13
0.15±0.06
58.74±11.41
2.58
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24.9
BDR组
14
0.14±0.04
69.75±18.86
2.00
-3.1
NDR组
12
0.11±0.04
81.95±11.23
1.22
, http://www.100md.com -40.5
对照组
15
0.10±0.04
50.67±10.41
2.06
-
*PDR组与对照组比较，P<0.05 **NDR组与其它3组比较，P<0.01；BDR组与对照组比较，P<0.01；BDR组与PDR组比较，P<0.05 ***PDR、BDR、NDR各组与对照组比较的升降率表2 糖尿病患者中ET与及诸因素的相关分析(n=39) 因素
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因素值
(±s)
ET
r值
P值
r值
P值
ET(1015 g/L)
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0.13± 0.05
-
-
-0.033 33
0.812 07(μmol/L)
72.91±19.65
-0.033 33
0.812 07
-
-
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年龄(岁)
57.62± 6.72
0.224 72
0.169 01
-0.198 75
0.225 16
收缩压(mm Hg)
140.18±20.77
0.008 56
0.958 82
-0.161 27
0.326 68
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舒张压(mm Hg)
80.85± 9.38
-0.186 35
0.256 01
-0.004 54
0.978 32
血糖(mol/L)
7.18± 4.77
0.591 34
0.000 12
-0.020 91
0.899 49
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病程(年)
5.99± 5.23
0.150 03
0.484 09
-0.491 26
0.001 49
三、讨论
我们在研究中观察到血ET含量随糖尿病的发生、DR的出现及加重渐次上升，并不依赖性别和年龄增长，仅与血糖含量正相关，提示高血糖是ET升高的重要因素。NO在NDR、BDR患者血中升高明显，但在PDR患者血中反而明显下降，其中ET/比值较对照组上升了24.9%的现象值得注意。电镜和荧光造影下见到的DR早期患者视网膜毛细血管扩张、糖尿病兔眼视网膜血管对ET的反应性下降及血管收缩迟缓[1]与NO的扩张血管并降低对血管活性物质的敏感性的作用及DR局部缺血和缺氧、后期发生的增殖性的改变及ET的缩血管作用、促多种细胞有丝分裂作用及其在血中的水平均有重要关系。ET与NO比例失恒可能是DR发生、发展的重要因素。
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NO不仅舒张微小血管，增加局部血流量，还可在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor, TNF-α)，白细胞介素-1(concentration of interleukin-1，IL-1)等细胞因子作用下通过诱导型一氧化氮合成酶表达增强而产生过多的NO。过量生成NO超氧化，产生超氧亚硝酸盐破坏DNA双链结构，表现出细胞毒性和组织损伤作用[2]。高水平的NO是否为血管内皮细胞损伤的一个原因，尚待探讨。
参考文献
[1] Bursell SE, Clermont AC, Oren B, et al. The in vivo effect of endothelins on retinal circulation in nondiabetic and diabetic rats. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1995, 36:596-607.
[2] Faraci FM, Brian JE Jr. Nitric Oxide and the cerebral circulation. Stroke, 1994, 25:692-694.
(收稿：1998-05-18 修回：1998-10-13), 百拇医药
单位：钟白丽(100039 北京，中国人民武装警察部队总医院眼科)；惠延年(第四军医大学西京医院眼科)
关键词：
中华眼科杂志990123 近几年的体外和动物实验证明，高血糖状态下内皮细胞源性收缩与舒张血管的活性物质生成失恒可造成微血管损伤和调节异常。目前认为一氧化氮(nitric oxide, NO)和内皮素(endothelin, ET)是一对重要的局部舒缩血管活性物质。我们检测了Ⅱ型糖尿病患者外周血中ET和亚硝酸盐(nitrire,
)含量(后者反映NO水平)，观察其在血管源性糖尿病性视网膜病变发生、发展各阶段的变化及患者自身某些因素与ET和NO的相关性。, http://www.100md.com
一、资料与方法
1.临床资料：(1)患者组：39例Ⅱ型糖尿病门诊或住院患者，其中男8例，女21例；平均年龄为(56.9±8.9)岁；病程3个月至20年；除外其他非糖尿病疾患。根据1985年全国第三届眼科学术会议制订的糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)分期标准分组：增殖型(proliferating-DR，PDR)、背景型(background-DR,BDR)、无糖尿病性视网膜病变(non-DR，NDR)组，共3组。(2)对照组：同期住院的15例无系统性疾病的老年性白内障患者，其中男7例，女8例，平均年龄(61.9±10.5)岁。
2.检测方法：(1)血标本：取空腹肘静脉血4 ml，其中2 ml置于含10%依地酸二钠30 μl和抑肽酶40 μl的试管中混匀，离心取血浆，分为2份，-20℃冰箱保存待检。另外2 ml测定血糖。采血同时测量卧位右臂血压，记录年龄、性别及病程等临床资料。(2)ET测定：采用解放军总医院东亚免疫技术研究所提供的ET试剂盒，按其放射免疫测定(radioimmuoassay, RIA)操作程序，使用美国Cap-Ria16型自动γ计数器检测，根据标准曲线直接计算ET含量。(3)NO测定：试剂盒由第四军医大学自由基生物学教研室提供。取室温下复融的血标本上清液20 μl，经去脂肪、去蛋白、离心后加入10 μl 2，3-二氨基萘盐酸生成荧光物质，以NaOH终止反应，加双蒸水3 ml，用日本RF-5000型荧光分光光度计测量标本的荧光强度，间接反映NO稳定的代谢产物亚硝酸盐(
)的含量。(4)统计学处理：采用第四军医大学统计教研室SPLM统计软件进行t检验、方差分析、两两比较及直线相关分析。, 百拇医药
二、结果
1.糖尿病患者血ET含量为(0.13±0.05)1015 g/L，高于对照组(0.10±0.03)1015 g/L，二者差异有显著性(P<0.05)；血
含量为72.91±9.65 μmol/L，亦高于对照组50.66±10.41 μmol/L，二者差异有显著性(P<0.01，表1)。2.与对照组比较，
值在PDR组上升24.9%，在BDR及NDR组则分别下降3.1%和40.5%(表1)。, 百拇医药
3.血ET与
含量：男性(0.12±0.05)1015 g/L，女性(0.13±0.05)1015 g/L，男女间差异无显著性(P>0.05)。ET含量与血糖呈正相关(r=0.59 134，P=0.00 012)，与病程呈负相关(r=0.491 26，P=0.001 49)，ET与无直线性相关(r=-0.033 33，P=0.812 07，表2)。, 百拇医药
表1 各组患者血中ET与
含量比较(±s)及ET/比值变化 组别例数
ET
(1015 g/L)*
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(μmol/L)**
ET/
比值
比值升降率
(%)***
PDR组
13
0.15±0.06
58.74±11.41
2.58
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24.9
BDR组
14
0.14±0.04
69.75±18.86
2.00
-3.1
NDR组
12
0.11±0.04
81.95±11.23
1.22
, http://www.100md.com -40.5
对照组
15
0.10±0.04
50.67±10.41
2.06
-
*PDR组与对照组比较，P<0.05 **NDR组与其它3组比较，P<0.01；BDR组与对照组比较，P<0.01；BDR组与PDR组比较，P<0.05 ***PDR、BDR、NDR各组与对照组比较的升降率表2 糖尿病患者中ET与
及诸因素的相关分析(n=39) 因素, 百拇医药
因素值
(
±s)ET
r值
P值
r值
P值
ET(1015 g/L)
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0.13± 0.05
-
-
-0.033 33
0.812 07
(μmol/L)72.91±19.65
-0.033 33
0.812 07
-
-
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年龄(岁)
57.62± 6.72
0.224 72
0.169 01
-0.198 75
0.225 16
收缩压(mm Hg)
140.18±20.77
0.008 56
0.958 82
-0.161 27
0.326 68
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舒张压(mm Hg)
80.85± 9.38
-0.186 35
0.256 01
-0.004 54
0.978 32
血糖(mol/L)
7.18± 4.77
0.591 34
0.000 12
-0.020 91
0.899 49
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病程(年)
5.99± 5.23
0.150 03
0.484 09
-0.491 26
0.001 49
三、讨论
我们在研究中观察到血ET含量随糖尿病的发生、DR的出现及加重渐次上升，并不依赖性别和年龄增长，仅与血糖含量正相关，提示高血糖是ET升高的重要因素。NO在NDR、BDR患者血中升高明显，但在PDR患者血中反而明显下降，其中ET/
比值较对照组上升了24.9%的现象值得注意。电镜和荧光造影下见到的DR早期患者视网膜毛细血管扩张、糖尿病兔眼视网膜血管对ET的反应性下降及血管收缩迟缓[1]与NO的扩张血管并降低对血管活性物质的敏感性的作用及DR局部缺血和缺氧、后期发生的增殖性的改变及ET的缩血管作用、促多种细胞有丝分裂作用及其在血中的水平均有重要关系。ET与NO比例失恒可能是DR发生、发展的重要因素。, 百拇医药
NO不仅舒张微小血管，增加局部血流量，还可在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor, TNF-α)，白细胞介素-1(concentration of interleukin-1，IL-1)等细胞因子作用下通过诱导型一氧化氮合成酶表达增强而产生过多的NO。过量生成NO超氧化，产生超氧亚硝酸盐破坏DNA双链结构，表现出细胞毒性和组织损伤作用[2]。高水平的NO是否为血管内皮细胞损伤的一个原因，尚待探讨。
参考文献
[1] Bursell SE, Clermont AC, Oren B, et al. The in vivo effect of endothelins on retinal circulation in nondiabetic and diabetic rats. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1995, 36:596-607.
[2] Faraci FM, Brian JE Jr. Nitric Oxide and the cerebral circulation. Stroke, 1994, 25:692-694.
(收稿：1998-05-18 修回：1998-10-13), 百拇医药