左归降糖方对实验性糖尿病大鼠糖代谢及胰岛功能的影响①
作者：喻 嵘 葛金文 陈大舜 易法银 邓奕晖 吴勇军 朱传湘
单位：喻 嵘 葛金文 陈大舜 易法银 邓奕晖 吴勇军 朱传湘(湖南中医学院内分泌疾病研究室 长沙410007)
关键词：左归降糖方；实验性糖尿病；血糖；糖耐量试验；胰岛试验
湖南中医学院学报/990106 提要 以小剂量链脲佐菌素给大鼠腹腔注射并配合高热量饲料喂饲造成实验性糖尿病，同时给予药物进行治疗。结果表明：左归降糖方对于增高的空腹血糖具有降低作用，且又能抑制糖负荷后血糖的升高。对实验大鼠胰岛功能的影响方面，该方治疗用药后，又有增加胰岛素含量和抑制胰高血糖素升高的作用趋势。
中国图书分类号 R285.5 R587.1
糖尿病(中医消渴病)是一种常见、多发的内分泌代谢紊乱性疾病，其死亡率仅次于心血管疾病和肿瘤，成为威胁人类生命的第三大疾病。因此，糖尿病及其慢性并发症的防治是当前世界各国医学界重点研究的课题之一。本实验通过对链脲佐菌(STZ)造成大鼠糖尿病模型的研究，探讨左归降糖方对实验大鼠糖代谢及胰岛功能的影响。
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1 材料与方法
1.1 动物
健康SD大鼠，雌雄各半，3月龄，体重100～150g，由本院实验动物中心提供。
1.2 药物
左归降糖方：药材购自湖南中医学院杏林药号，药材鉴定后水煎两次，合并滤液，浓缩成2g/ml生药浓度，冰箱贮存备用。愈三消：吉林省辉南生化药业有限公司产品(96卫药准字2-31
号)，批号：970214。达美康：法国施维雅与天津华津药厂合作生产产品，批号：970106。
1.3 试剂
链脲佐菌素(STZ)：美国Sigma公司产品；血糖测试盒：深圳月亮湾生物工程研究所提供；胰岛素、胰高血糖素放免测试盒：北京邦定生物医学公司提供(批号：970625，970623)
, 百拇医药
1.4 实验性链脲佐菌素糖尿病大鼠模型制备方法
参照文献[1、2]，并加以改进，以高热量饲料(10%花生油、10%猪油、15%炼乳、65%普通饲料)喂饲4周后，禁食不禁水14h，然后各鼠腹腔注射1%STZ(0.05mol/L柠檬酸缓冲液稀释，PH4.4，4℃)剂量：每鼠30mg/kg，2d后，同样方法及剂量再注射1次。
1.5 实验方法
将SD大鼠60只，随机分为正常组(10只)、糖尿病造模组(50只)，然后按上述模型制备方法造模，正常组饲以普通饲料。当造模组大鼠第二次腹腔注射1%STZ 48h后，分别测定空腹血糖及葡萄糖耐量试验，将糖负荷1h后血糖>11.1ml/L的48只大鼠纳入实验，并按体重、性别及血糖值分层，随机分为模型组、左归降糖方组、愈三消中药对照组、达美康对照组(每组12只)。然后左归降糖方组按6.03g/kg灌胃，愈三消组以0.86g/kg、达美康组以7.2mg/kg灌胃，正常组与模型组则以等量蒸馏水灌胃，容量10ml/kg，每日1次，连续30d。除正常组大鼠每日饲以普通饲料外，其余各组均隔日饲以1次高热量饲料，1次普通饲料。灌胃第15天及第30天，分别作空腹血糖及糖耐量测定，末次给药半小时后，将各组大鼠颈动脉放血处死，按要求分别留取血样及各组织脏器。
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1.6 观察指标与测定方法
血糖采用葡萄糖氧化酶法测定；胰岛素、胰高血糖素均采用放射免疫法测试。以上操作方法参照试剂盒说明书。
1.7 统计学处理
多组计量资料数据处理，方差齐性的采用方差分析，组间比较用q检验；方差不齐者采用秩和检验。
2 结果
2.1 模型动物的考查
造模组大鼠经喂饲高热量饲料以及STZ腹腔注射后，表现出活动减少，饮水量及小便排泄量明显增多，体重增长略高于正常组大鼠的特点。经灌服葡萄糖(灌胃浓度：6.75g/kg体重)作糖耐量试验结果如下：造模组大鼠与正常组大鼠的空腹血糖值无显著性差异(P>0.05)。而灌服葡萄糖1
, 百拇医药
h，造模组大鼠的血糖值明显增高，与正常组比较具有显著性差异(P<0.01)；灌服葡萄糖2h及3h后，造模组大鼠的血糖值仍明显高于正常组大鼠(P<0.01)，表明造模组大鼠糖耐量试验异常。此外，随机抽取正常组与造模组大鼠作血清总胆固醇、甘油三酯测定，结果表明造模组大鼠的血清总胆固醇、甘油三酯含量明显高于正常组(P<0.05)。以上结果显示，该模型大鼠类似于人类非胰岛素依赖型糖尿病的发病特点，亦说明该模型成功，与文献报导一致。
2.2 左归降糖方对葡萄糖耐量的影响
治疗给药第15天时，空腹血糖各组之间无显著性差异(P>0.05)，而糖负荷1h的血糖值，模型组与正常组比较有非常显著性差异(P<0.01)，提示模型是成功的。此外，左归降糖方组与模型组、愈三消组、达美康组比较均有显著性差异(P<0.01，P<0.05)，表明左归降糖方能明显抑制糖负荷后血糖值的升高，且这种作用强于愈三消及达美康。糖负荷3h时，左归降糖方又能显著降低血糖(与模型组比较P<0.05)。治疗给药30d时，模型组大鼠的空腹血糖显著升高(与正常组比较，P<0.01)。而达美康、左归方均显示出明显地抑制空腹血糖升高的作用(与模型组比较，P<0.01，P<0.05)；糖负荷1h时，达美康对糖负荷后血糖的升高没有明显地抑制作用。而左归降糖方有抑制糖负荷1h后血糖升高的作用趋势。糖负荷3h时，则左归降糖方组的血糖值与模型组比较具有显著性差异(P<0.05)，表明左归降糖方能明显降低糖负荷3h时的血糖，见表1。
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表1 左归降糖方治疗给药对大鼠糖耐量试验中血糖值的影响 (mmol/L，
±s)
正常组
模型组
达美康组
愈三消组
左归组
治疗前
n
10
12
12
, 百拇医药
12
12
空腹
3.74±1.03
4.37±1.31
5.01±1.01
6.05±4.26
4.46±2.02
糖负荷1h
8.96±1.77※※
19.54±8.02
20.64±7.53
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19.40±6.57
19.95±7.16
糖负荷3h
3.85±0.70※※
10.64±6.82
8.73±3.96
9.99±6.96
9.41±5.69
治疗15天
n
9
11
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12
12
11
空腹
4.73±0.64
5.14±1.07
4.24±0.61
4.33±1.75
3.94±0.89
糖负荷1h
7.86±1.14※※
20.66±5.52
, 百拇医药
18.32±5.89
19.93±7.49
12.01±3.71※※△＃
糖负荷3h
6.64±1.36
9.78±1.92
7.08±2.12
8.54±4.31
5.40±1.76
治疗30天
n
8
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11
12
11
9
空腹
2.86±1.34※※
9.45±5.33
4.17±1.07※※
7.34±3.37
6.10±1.04※
糖负荷1h
7.91±0.80※※
, 百拇医药
22.46±11.84
21.87±7.46
22.51±8.18
16.60±8.06
糖负荷3h
5.92±1.01※
10.62±7.54
4.83±2.09
10.07±5.32
4.61±1.06※
注：与模型组比较※P<0.05※※P<0.01 与达美康组比较△P<0.05 与愈三消组比较＃P<0.05
, 百拇医药
2.3 左归降糖方对空腹血胰岛素、胰高血糖素的影响
治疗用药30d时，模型组大鼠空腹血中胰岛素含量降低，与正常组比较具有显著性差异(P<0.05)，表明该模型存在着胰岛素的不足。此外，左归降糖方虽与模型组比较无显著性差异，但左归降糖方有升高空腹血胰岛素含量的趋势。对胰高血糖素的影响方面，虽然模型组大鼠与正常组相比具有升高胰高血糖素的作用趋势，而左归降糖方、达美康组与模型组比较具有降低胰高血糖素的作用趋势，但经统计分析其总体差异无显著性意义(P>0.05)，见表2。
表2 左归降糖方治疗给药30天对大鼠空腹血胰岛素、胰高血糖素含量的影响±s)
组 别
n
, 百拇医药 胰岛素含量
(μmol/ml)
n
胰高血糖素含量
(pg/ml)
正常组
8
40.04±16.01※
7
165.01±61.52
模型组
10
, 百拇医药 18.39±13.62
8
293.96±99.26
达美康组
8
21.96±9.06
7
207.23±44.87
愈三消组
10
19.99±13.84
7
, 百拇医药
238.43±134.54
左归方组
7
34.42±15.17
7
201.52±79.55
注：与模型组比较，※P<0.05
3 讨论
现代研究表明，非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)的发病机理主要为胰岛素分泌不正常和胰岛素抵抗。而胰岛素抵抗是NIDDM发病的显著特征，其发生机理主要有三个方面的原因[3、4]：①胰岛β细胞分泌胰岛素不正常。②血循环中存在胰岛素拮抗物质。其中激素类如胰高血糖素、生长激素、皮质醇及儿茶酚胺等，均在周围组织有对抗胰岛素的作用。③周围组织靶细胞对胰岛素反应性有缺陷。上述激素中，胰岛素与胰高血糖素均系胰岛细胞所分泌，它们是一对维持人体血糖平衡的重要激素。我们以明代医家张景岳阴阳互济法的代表方左归丸、左归饮化裁组成的左归糖降方用于NIDDM的防治，取得了较为满意的疗效，前期实验研究也证实该方具有一定的降糖作用[5、6]。本实验研究中，我们以小剂量链脲佐菌素给大鼠腹腔注射并配合高热量饲料喂饲造成实验性NIDDM同时给予药物进行治疗。结果表明，左归降糖方对高空腹血糖的降低作用与达美康相似，而且左归降糖方又能抑制糖负荷后血糖的升高，这种作用则优于达美康。左归降糖方对实验大鼠胰岛功能的影响方面，结果表明，模型组大鼠与正常大鼠比较存在着胰岛素分泌的不足以及胰高血糖素含量的增高。左归降糖方治疗用药后，则有增加胰岛素含量和抑制胰高血糖升高的作用趋势。上述研究尚有待进一步深入。
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①湖南省科委资助课题(02-962-07(4))
参考文献
[1] 谢明智，刘海帆，张凌云，等.实验性肥胖及糠尿病大鼠模型.药学学报，1985，(20)：801
[2] 雷涛，刘宋汉.实验性NIDDM大鼠主动脉内膜早期超微结构的改变.中华内分泌代谢杂志，1994，10(4)：201
[3] Olefsky Jm，et al.Insulin action and resistance in obesity and non-insulin-dependent type Ⅱ diabetes milletus.Am J physiol，1982，243：E15
[4] 方圻主编.现代内科学.北京：人民军医出版社，1995.2705
[5] 陈大舜，易法银，葛金文，等.左归降糖灵对实验性糖尿病的防治作用.湖南中医学院学报，1995，15(2)：44
(收稿日期 1999-01-12)
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单位：喻 嵘 葛金文 陈大舜 易法银 邓奕晖 吴勇军 朱传湘(湖南中医学院内分泌疾病研究室 长沙410007)
关键词：左归降糖方；实验性糖尿病；血糖；糖耐量试验；胰岛试验
湖南中医学院学报/990106 提要 以小剂量链脲佐菌素给大鼠腹腔注射并配合高热量饲料喂饲造成实验性糖尿病，同时给予药物进行治疗。结果表明：左归降糖方对于增高的空腹血糖具有降低作用，且又能抑制糖负荷后血糖的升高。对实验大鼠胰岛功能的影响方面，该方治疗用药后，又有增加胰岛素含量和抑制胰高血糖素升高的作用趋势。
中国图书分类号 R285.5 R587.1
糖尿病(中医消渴病)是一种常见、多发的内分泌代谢紊乱性疾病，其死亡率仅次于心血管疾病和肿瘤，成为威胁人类生命的第三大疾病。因此，糖尿病及其慢性并发症的防治是当前世界各国医学界重点研究的课题之一。本实验通过对链脲佐菌(STZ)造成大鼠糖尿病模型的研究，探讨左归降糖方对实验大鼠糖代谢及胰岛功能的影响。
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1 材料与方法
1.1 动物
健康SD大鼠，雌雄各半，3月龄，体重100～150g，由本院实验动物中心提供。
1.2 药物
左归降糖方：药材购自湖南中医学院杏林药号，药材鉴定后水煎两次，合并滤液，浓缩成2g/ml生药浓度，冰箱贮存备用。愈三消：吉林省辉南生化药业有限公司产品(96卫药准字2-31
号)，批号：970214。达美康：法国施维雅与天津华津药厂合作生产产品，批号：970106。
1.3 试剂
链脲佐菌素(STZ)：美国Sigma公司产品；血糖测试盒：深圳月亮湾生物工程研究所提供；胰岛素、胰高血糖素放免测试盒：北京邦定生物医学公司提供(批号：970625，970623)
, 百拇医药
1.4 实验性链脲佐菌素糖尿病大鼠模型制备方法
参照文献[1、2]，并加以改进，以高热量饲料(10%花生油、10%猪油、15%炼乳、65%普通饲料)喂饲4周后，禁食不禁水14h，然后各鼠腹腔注射1%STZ(0.05mol/L柠檬酸缓冲液稀释，PH4.4，4℃)剂量：每鼠30mg/kg，2d后，同样方法及剂量再注射1次。
1.5 实验方法
将SD大鼠60只，随机分为正常组(10只)、糖尿病造模组(50只)，然后按上述模型制备方法造模，正常组饲以普通饲料。当造模组大鼠第二次腹腔注射1%STZ 48h后，分别测定空腹血糖及葡萄糖耐量试验，将糖负荷1h后血糖>11.1ml/L的48只大鼠纳入实验，并按体重、性别及血糖值分层，随机分为模型组、左归降糖方组、愈三消中药对照组、达美康对照组(每组12只)。然后左归降糖方组按6.03g/kg灌胃，愈三消组以0.86g/kg、达美康组以7.2mg/kg灌胃，正常组与模型组则以等量蒸馏水灌胃，容量10ml/kg，每日1次，连续30d。除正常组大鼠每日饲以普通饲料外，其余各组均隔日饲以1次高热量饲料，1次普通饲料。灌胃第15天及第30天，分别作空腹血糖及糖耐量测定，末次给药半小时后，将各组大鼠颈动脉放血处死，按要求分别留取血样及各组织脏器。
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1.6 观察指标与测定方法
血糖采用葡萄糖氧化酶法测定；胰岛素、胰高血糖素均采用放射免疫法测试。以上操作方法参照试剂盒说明书。
1.7 统计学处理
多组计量资料数据处理，方差齐性的采用方差分析，组间比较用q检验；方差不齐者采用秩和检验。
2 结果
2.1 模型动物的考查
造模组大鼠经喂饲高热量饲料以及STZ腹腔注射后，表现出活动减少，饮水量及小便排泄量明显增多，体重增长略高于正常组大鼠的特点。经灌服葡萄糖(灌胃浓度：6.75g/kg体重)作糖耐量试验结果如下：造模组大鼠与正常组大鼠的空腹血糖值无显著性差异(P>0.05)。而灌服葡萄糖1
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h，造模组大鼠的血糖值明显增高，与正常组比较具有显著性差异(P<0.01)；灌服葡萄糖2h及3h后，造模组大鼠的血糖值仍明显高于正常组大鼠(P<0.01)，表明造模组大鼠糖耐量试验异常。此外，随机抽取正常组与造模组大鼠作血清总胆固醇、甘油三酯测定，结果表明造模组大鼠的血清总胆固醇、甘油三酯含量明显高于正常组(P<0.05)。以上结果显示，该模型大鼠类似于人类非胰岛素依赖型糖尿病的发病特点，亦说明该模型成功，与文献报导一致。
2.2 左归降糖方对葡萄糖耐量的影响
治疗给药第15天时，空腹血糖各组之间无显著性差异(P>0.05)，而糖负荷1h的血糖值，模型组与正常组比较有非常显著性差异(P<0.01)，提示模型是成功的。此外，左归降糖方组与模型组、愈三消组、达美康组比较均有显著性差异(P<0.01，P<0.05)，表明左归降糖方能明显抑制糖负荷后血糖值的升高，且这种作用强于愈三消及达美康。糖负荷3h时，左归降糖方又能显著降低血糖(与模型组比较P<0.05)。治疗给药30d时，模型组大鼠的空腹血糖显著升高(与正常组比较，P<0.01)。而达美康、左归方均显示出明显地抑制空腹血糖升高的作用(与模型组比较，P<0.01，P<0.05)；糖负荷1h时，达美康对糖负荷后血糖的升高没有明显地抑制作用。而左归降糖方有抑制糖负荷1h后血糖升高的作用趋势。糖负荷3h时，则左归降糖方组的血糖值与模型组比较具有显著性差异(P<0.05)，表明左归降糖方能明显降低糖负荷3h时的血糖，见表1。
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表1 左归降糖方治疗给药对大鼠糖耐量试验中血糖值的影响 (mmol/L，
±s)正常组
模型组
达美康组
愈三消组
左归组
治疗前
n
10
12
12
, 百拇医药
12
12
空腹
3.74±1.03
4.37±1.31
5.01±1.01
6.05±4.26
4.46±2.02
糖负荷1h
8.96±1.77※※
19.54±8.02
20.64±7.53
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19.40±6.57
19.95±7.16
糖负荷3h
3.85±0.70※※
10.64±6.82
8.73±3.96
9.99±6.96
9.41±5.69
治疗15天
n
9
11
, http://www.100md.com
12
12
11
空腹
4.73±0.64
5.14±1.07
4.24±0.61
4.33±1.75
3.94±0.89
糖负荷1h
7.86±1.14※※
20.66±5.52
, 百拇医药
18.32±5.89
19.93±7.49
12.01±3.71※※△＃
糖负荷3h
6.64±1.36
9.78±1.92
7.08±2.12
8.54±4.31
5.40±1.76
治疗30天
n
8
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11
12
11
9
空腹
2.86±1.34※※
9.45±5.33
4.17±1.07※※
7.34±3.37
6.10±1.04※
糖负荷1h
7.91±0.80※※
, 百拇医药
22.46±11.84
21.87±7.46
22.51±8.18
16.60±8.06
糖负荷3h
5.92±1.01※
10.62±7.54
4.83±2.09
10.07±5.32
4.61±1.06※
注：与模型组比较※P<0.05※※P<0.01 与达美康组比较△P<0.05 与愈三消组比较＃P<0.05
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2.3 左归降糖方对空腹血胰岛素、胰高血糖素的影响
治疗用药30d时，模型组大鼠空腹血中胰岛素含量降低，与正常组比较具有显著性差异(P<0.05)，表明该模型存在着胰岛素的不足。此外，左归降糖方虽与模型组比较无显著性差异，但左归降糖方有升高空腹血胰岛素含量的趋势。对胰高血糖素的影响方面，虽然模型组大鼠与正常组相比具有升高胰高血糖素的作用趋势，而左归降糖方、达美康组与模型组比较具有降低胰高血糖素的作用趋势，但经统计分析其总体差异无显著性意义(P>0.05)，见表2。
表2 左归降糖方治疗给药30天对大鼠空腹血胰岛素、胰高血糖素含量的影响
±s)组 别
n
, 百拇医药 胰岛素含量
(μmol/ml)
n
胰高血糖素含量
(pg/ml)
正常组
8
40.04±16.01※
7
165.01±61.52
模型组
10
, 百拇医药 18.39±13.62
8
293.96±99.26
达美康组
8
21.96±9.06
7
207.23±44.87
愈三消组
10
19.99±13.84
7
, 百拇医药
238.43±134.54
左归方组
7
34.42±15.17
7
201.52±79.55
注：与模型组比较，※P<0.05
3 讨论
现代研究表明，非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)的发病机理主要为胰岛素分泌不正常和胰岛素抵抗。而胰岛素抵抗是NIDDM发病的显著特征，其发生机理主要有三个方面的原因[3、4]：①胰岛β细胞分泌胰岛素不正常。②血循环中存在胰岛素拮抗物质。其中激素类如胰高血糖素、生长激素、皮质醇及儿茶酚胺等，均在周围组织有对抗胰岛素的作用。③周围组织靶细胞对胰岛素反应性有缺陷。上述激素中，胰岛素与胰高血糖素均系胰岛细胞所分泌，它们是一对维持人体血糖平衡的重要激素。我们以明代医家张景岳阴阳互济法的代表方左归丸、左归饮化裁组成的左归糖降方用于NIDDM的防治，取得了较为满意的疗效，前期实验研究也证实该方具有一定的降糖作用[5、6]。本实验研究中，我们以小剂量链脲佐菌素给大鼠腹腔注射并配合高热量饲料喂饲造成实验性NIDDM同时给予药物进行治疗。结果表明，左归降糖方对高空腹血糖的降低作用与达美康相似，而且左归降糖方又能抑制糖负荷后血糖的升高，这种作用则优于达美康。左归降糖方对实验大鼠胰岛功能的影响方面，结果表明，模型组大鼠与正常大鼠比较存在着胰岛素分泌的不足以及胰高血糖素含量的增高。左归降糖方治疗用药后，则有增加胰岛素含量和抑制胰高血糖升高的作用趋势。上述研究尚有待进一步深入。
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①湖南省科委资助课题(02-962-07(4))
参考文献
[1] 谢明智，刘海帆，张凌云，等.实验性肥胖及糠尿病大鼠模型.药学学报，1985，(20)：801
[2] 雷涛，刘宋汉.实验性NIDDM大鼠主动脉内膜早期超微结构的改变.中华内分泌代谢杂志，1994，10(4)：201
[3] Olefsky Jm，et al.Insulin action and resistance in obesity and non-insulin-dependent type Ⅱ diabetes milletus.Am J physiol，1982，243：E15
[4] 方圻主编.现代内科学.北京：人民军医出版社，1995.2705
[5] 陈大舜，易法银，葛金文，等.左归降糖灵对实验性糖尿病的防治作用.湖南中医学院学报，1995，15(2)：44
(收稿日期 1999-01-12)
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